【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫學領域，具體涉及一種抗glypican-3的全人源化單域抗體及其應用。
技術介紹
1、在原發性肝癌中，肝細胞癌(hepatocellular?carcinoma,hcc)是最常見的病理分型，約占75％-85％(xu?w,jian?d,yang?h,et?al.aggregation-induced?emission:application?in?diagnosis?and?therapy?of?hepatocellular?carcinoma[j].biosensors?and?bioelectronics,2024,266)。全球范圍內，hcc發病率呈逐年上升的趨勢，尤其是在亞洲地區(wang?y,deng?b.hepatocellular?carcinoma:molecularmechanism,targeted?therapy,and?biomarkers[j].cancer?metastasis?rev,2023,42(3):629-52)，并且hcc患者(尤其是晚期患者)的總生存率較低，這也使得開發針對特定靶標的、高效的hcc治療方案尤為重要。
2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,gpc3)是硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparansulfate?proteoglycan,hspg)家族成員之一，通過糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,gpi)錨定在細胞表面。截至目前已有多篇研究表明，gpc3在細胞膜表面主要起到調節信號轉導的作用(filmus
3、單域抗體(single-domain?antibody,sdab)的分子量極小，僅有12-15kda，只含有單個重鏈可變區(vh)，具有與傳統抗體類似的抗原結合親和力，但結合了小分子和單克隆抗體的優點，具有更高的溶解性、穩定性和特異性(mohseni?a,molakarimi?m,taghdir?m,et?al.exploring?single-domain?antibody?thermostability?by?molecular?dynamicssimulation[j].j?biomol?struct?dyn,2019,37(14):3686-96；tang?h,gao?y,hanj.application?progress?of?the?single?domain?antibody?in?medicine[j].int?j?molsci,2023,24(4))，對識別抗原片段具有獨特的優勢。以上這些特征使得單域抗體在基礎研究、診斷和治療中被大量應用。目前已有超過30種單域抗體化合物正在臨床開發中(kunzs,durandy?m,seguin?l,feral?c?c.nanobody((r))molecule,a?giga?medical?tool?innanodimensions[j].int?j?mol?sci,2023,24(17))，并且也已有研究成功開發出sdab衍生的gpc3靶向immunopet成像策略，在臨床前hcc模型中表現出了優秀的診斷準確性(an?s,zhang?d,zhang?y,et?al.gpc3-targeted?immunopet?imaging?of?hepatocellularcarcinomas[j].eur?j?nucl?med?mol?imaging,2022,49(8):2682-92)。
技術實現思路
1、針對現有問題的不足，本專利技術的目的是提供一種抗glypican-3的全人源化單域抗體及其應用。本專利技術利用噬菌體展示技術，通過靶向人gpc3蛋白進行抗體篩選，獲得了1個抗人gpc3特異性全人源單克隆單域抗體。獲得的單域抗體能與人gpc3特異性結合，并能有效抑制wnt信號的活化，為以gpc3為靶標的hcc治療提供了有效的備選抗體藥物，具有潛在的臨床應用前景。
2、本專利技術解決其技術問題采用的技術方案是：
3、第一方面，本專利技術保護一種抗glypican-3的全人源化單域抗體，其包括3個重鏈互補決定區cdr，其中，
4、cdr1的氨基酸序列為seq?id?no:1的第31-35位氨基酸序列；
5、cdr2的氨基酸序列為seq?id?no:1的第50-66位氨基酸序列；
6、cdr3的氨基酸序列為seq?id?no:1的第99-107位氨基酸序列。
7、在具體的實施方案中，所述單域抗體還包括框架區。
8、在更具體的實施方案中，所述單域抗體的框架區fr1為seq?id?no:1的第1-30位氨基酸序列；所述單域抗體的框架區fr2為seq?id?no:1的第36-49位氨基酸序列；所述單域抗體的框架區fr3為seq?id?no:1的第67-98位氨基酸序列；所述單域抗體的框架區fr4為seqid?no:1的第108-118位氨基酸序列。
9、在具體的實施方案中，所述抗體選自如下(a1)-本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種抗Glypican-3的全人源化單域抗體，其包括3個重鏈互補決定區CDR，其中，CDR1的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1的第31-35位氨基酸序列；
2.根據權利要求1所述的抗Glypican-3的全人源化單域抗體，其特征在于，所述抗體選自如下(A1)-(A3)中的任一種：
3.權利要求1或2所述的抗Glypican-3的全人源化單域抗體的核酸分子，其序列如SEQID?NO:2所示。
4.含有權利要求3所述核酸分子的表達盒。
5.含有權利要求3所述核酸分子的重組載體或含有權利要求4所示表達盒的重組載體。
6.含有權利要求3所述核酸分子的重組微生物、或含有權利要求4所述表達盒的重組微生物、或含有權利要求5所述重組載體的重組微生物。
7.一種藥物組合物，其包括治療或診斷有效量的權利要求1或2所述的抗Glypican-3的全人源化單域抗體，以及藥學上可接受的載體。
8.根據權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物進一步包括治療或診斷有效量的至少一種選自治療劑、診斷劑和治療診斷劑
9.權利要求1或2所述的抗Glypican-3的全人源化單域抗體在制備治療肝細胞癌的藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述治療包括：向所述受試者施用包括有效量的前文任一項所述的抗Glypican-3的全人源化單域抗體以及可接受的載體的藥物組合物。
...【技術特征摘要】
1.一種抗glypican-3的全人源化單域抗體，其包括3個重鏈互補決定區cdr，其中，cdr1的氨基酸序列為seq?id?no:1的第31-35位氨基酸序列；
2.根據權利要求1所述的抗glypican-3的全人源化單域抗體，其特征在于，所述抗體選自如下(a1)-(a3)中的任一種：
3.權利要求1或2所述的抗glypican-3的全人源化單域抗體的核酸分子，其序列如seqid?no:2所示。
4.含有權利要求3所述核酸分子的表達盒。
5.含有權利要求3所述核酸分子的重組載體或含有權利要求4所示表達盒的重組載體。
6.含有權利要求3所述核酸分子的重組微生物、或含有權利要求4所述表達...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高威，陳飛燕，劉溪，徐馳，王旭飛，劉曉宇，劉學斌，
申請(專利權)人：南京醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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