【技術實現步驟摘要】
本公開涉及病毒載體的，具體涉及一種靶向視網膜的重組腺相關病毒及其應用。
技術介紹
1、腺相關病毒病毒（aav）是一種具有單鏈?dna?的非包膜細小病毒，粒徑為?24?至26?nm，其基因組由?rep?和?cap?基因組成，兩側有?2?個?itr，aav需要輔助病毒的幫助進行dna?復制。aav?在受體作用下附著在細胞表面，觸發細胞內的內吞信號，從而感染靶細胞。接下來，病毒粒子從內體中釋放出來，并釋放其單鏈?dna，然后在細胞內轉化為雙鏈dna。aav基因能夠在非分裂細胞中長期表達。
2、視網膜疾病包括leber遺傳性視神經病變（lhon）、leber先天性黑蒙（lca）、stargardt病、和年齡相關性黃斑變性（amd）等，會對患者的獨立生活和日常活動能力造成極大損害，且仍缺乏有效的治療手段。aav作為最有前途的基因遞送工具之一，具有高遞送效率和長效表達等優勢，可能會徹底改變眼部疾病，尤其是視網膜相關疾病的治療現狀。
3、由于不同的眼底疾病發病機理不同，利用aav病毒進行視網膜相關疾病的治療時，需感染的細胞層次有所差別。不同?aav?血清型的轉導效率和眼組織嗜性不同，而通過改造aav?載體的衣殼可以改變其組織嗜性、轉導效率以及衣殼逃避宿主免疫反應的能力。本專利技術的目的是通過衣殼改造篩選出對視網膜感染效率更高，細胞嗜性更專一的重組aav載體，以及提供其在制備視網膜疾病的基因治療藥物中的應用。
技術實現思路
1、基于上述目的，本專利技術首先提供了一種用于提高
2、其次，本專利技術提供了一種編碼上述的異源肽的多核苷酸，所述多核苷酸的序列如seq?id?no.4或10所示，其中，序列如seq?id?no.3的異源肽v2的編碼多核苷酸序列如seqid?no.4所示，序列如seq?id?no.9的異源肽v5的編碼多核苷酸序列如seq?id?no.10所示。
3、第三，本專利技術提供了一種含有上述的異源肽的腺相關病毒衣殼蛋白突變體。本專利技術所述的“含有”是指在腺相關病毒衣殼蛋白中插入了所述的異源肽。
4、在一個優選的實施方案中，所述異源肽的插入位置位于腺相關病毒衣殼蛋白氨基酸序列的q574之后。本專利技術所述的腺相關病毒衣殼蛋白氨基酸序列是以genbank?id?yp_068409.1所表示的腺相關病毒衣殼蛋白氨基酸序列為基準設定的，該插入位點位于可變區viii。
5、在一個更為優選的實施方案中，所述的5型腺相關病毒衣殼蛋白突變體的氨基酸序列如seq?id?no.11或13所示。在本專利技術中具有seq?id?no.11的5型腺相關病毒衣殼蛋白突變體被命名為#2突變體，具有seq?id?no.13的5型腺相關病毒衣殼蛋白突變體被命名為#5突變體。
6、第四，本專利技術提供了一種編碼上述腺相關病毒衣殼蛋白突變體的多核苷酸，所述多核苷酸的序列如seq?id?no.12或14所示。在本專利技術中，氨基酸序列如seq?id?no.11所示的編碼多核苷酸的序列如seq?id?no.12所示，氨基酸序列如seq?id?no.?13所示的編碼多核苷酸的序列如seq?id?no.?14所示。
7、第五，本專利技術提供了一種含有編碼上述的腺相關病毒衣殼蛋白突變體的多核苷酸的載體。
8、在一個優選的實施方案中，所述載體還含有生物效應分子和/或生物標記分子編碼基因。本專利技術所述的生物效應分子編碼基因包括但不限于：crry基因或nrf2基因。本專利技術中所述的crry（cr1-related?protein?y）編碼一種重要的細胞表面補體調節受體，在調節補體系統的活性中起著關鍵作用，能夠調控經典和替代補體途徑。作為一種膜蛋白，crry在小鼠中是補體激活的關鍵細胞調節劑，它通過抑制c3的激活來調控補體系統的活性。nrf2（nuclear?factor?erythroid?2-related?factor?2）編碼核因子e2相關因子2，是一種關鍵的轉錄因子，在細胞的抗氧化應激反應中起著核心作用，在機體中通過多種機制保護細胞免受氧化應激和炎癥損傷，并在多種疾病的防治中扮演重要角色。本專利技術所述的生物標記分子還可以是但不限于：綠色熒光蛋白（gfp）基因、熒光素酶（luciferase）基因。
9、在一個更為優選的實施方案中，所述載體為重組腺相關病毒載體。在本專利技術的一個具體實施方案中，所述腺相關病毒為5型腺相關病毒。
10、最后，本專利技術提供了一種上述的重組腺相關病毒載體在制備視網膜疾病治療藥物中的應用。在一些應用的實例中，所述視網膜疾病選自leber遺傳性視神經病變（lhon）、leber先天性黑蒙（lca）、stargardt病、和年齡相關性黃斑變性（amd）中的任一種。這些疾病都伴有rpe層的損傷或退行性變化，導致光感受器功能受損，進而引起視力下降。通過上述的重組腺相關病毒載體可將治療基因遞送至rpe層，緩解rpe層的病理損傷。
11、本專利技術的有益效果是：與親代血清型aav5相比，#2突變體和#5突變體在balb/cj和c57bl/6j小鼠模型中表現出更快的基因傳遞動力學和更高的眼內轉基因長期表達水平，特別是在rpe細胞層的特異性轉導方面。
12、本專利技術公開的腺相關病毒衣殼蛋白、包含其的腺相關病毒，具有視網膜轉導能力增強的特性，可作為遞送載體用于視網膜相關疾病的治療，對拓展aav相關的基因治療具有重要作用。
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1.?一種用于提高腺相關病毒衣殼蛋白的視網膜細胞嗜性的異源肽，其特征在于，所述異源肽的序列如SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.9所示。
2.?一種編碼權利要求1所述的異源肽的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ?ID?NO.4或SEQ?ID?NO.10所示。
3.一種含有權利要求1所述的異源肽的腺相關病毒衣殼蛋白突變體。
4.根據權利要求3所述的腺相關病毒衣殼蛋白突變體，其特征在于，所述異源肽的插入位置位于5型腺相關病毒衣殼蛋白氨基酸序列的Q574之后。
5.?根據權利要求4所述的腺相關病毒衣殼蛋白突變體，其特征在于，所述的5型腺相關病毒衣殼蛋白突變體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.11或SEQ?ID?NO.13所示。
6.?一種編碼權利要求5所述腺相關病毒衣殼蛋白突變體的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ?ID?NO.12或SEQ?ID?NO.14所示。
7.一種含有權利要求6所述的編碼所述腺相關病毒衣殼蛋白突變體的多核苷酸的載體。
8.根據權利要求7所述的
9.根據權利要求8所述的載體，其特征在于，所述載體為重組腺相關病毒載體。
10.權利要求9所述的載體在制備視網膜疾病治療藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.?一種用于提高腺相關病毒衣殼蛋白的視網膜細胞嗜性的異源肽，其特征在于，所述異源肽的序列如seq?id?no.3或seq?id?no.9所示。
2.?一種編碼權利要求1所述的異源肽的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如seq?id?no.4或seq?id?no.10所示。
3.一種含有權利要求1所述的異源肽的腺相關病毒衣殼蛋白突變體。
4.根據權利要求3所述的腺相關病毒衣殼蛋白突變體，其特征在于，所述異源肽的插入位置位于5型腺相關病毒衣殼蛋白氨基酸序列的q574之后。
5.?根據權利要求4所述的腺相關病毒衣殼蛋白突變體，其特征在于，所述的5型腺相關病毒...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙拯浩，李瑤，侯利華，吳詩坡，張哲，張金龍，王步森，陳旖，龍江蘭，陳薇，
申請(專利權)人：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，
類型：發明
國別省市：
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