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    丹參引導蛋白SmDIR18及其編碼基因的應用制造技術

    技術編號:44518632 閱讀:3 留言:0更新日期:2025-03-07 13:12
    本發明專利技術公開了丹參引導蛋白SmDIR18及其編碼基因的應用,本發明專利技術首次從藥用植物丹參中克隆得到一個能顯著影響植物生長發育,增強丹參中丹參酮的含量,進而增強丹參對環境適應性的引導蛋白SmDIR18。研究結果表明,植株的鹽處理4?h后的丹參引導蛋白SmDIR18受到鹽誘導表達且基因表達量顯著上升。丹參引導蛋白SmDIR18基因過表達可提高丹參中的丹參酮類物質的含量。丹參引導蛋白SmDIR18基因敲降植株生長緩慢且丹參酮的含量降低。對該基因的調控可以應用在培育抗逆的丹參物種,并利用抗逆脅迫提高丹參中有效活性成分丹參酮的含量,具有較高的經濟價值和廣闊的應用前景。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術屬于生物,具體涉及丹參引導蛋白smdir18及其編碼基因的應用,本專利技術所述丹參引導蛋白smdir18的編碼基因能夠調節丹參植株的生長發育,增加丹參體內的丹參酮含量,進而增強植物對環境的適應性和在惡劣自然條件下的抗逆性。


    技術介紹

    1、丹參作為唇形科,鼠尾草屬的多年生草本植物,主要使用丹參的干燥根及根莖。丹參作為一種臨床常用藥材,含有的有效活性成分丹參酮可以用于治療冠心病、心絞痛等心臟疾病。丹參作為眾多中成藥的原料,需求隨之加大,但野生丹參資源匱乏,造成供應不足的局面。引導蛋白直接參與植物木質素的合成,調節植物根部生長和植株的生長發育,可通過內皮層凱氏帶直接參與調控水、氧氣和離子進出維管束。但在丹參中目前尚無有關引導蛋白功能的報道。深入挖掘丹參引導蛋白家族中與生長發育有關的基因,增加植株的有效活性成分丹參酮的含量,培育丹參其他抗逆種質資源,對于進一步提高丹參的經濟價值有極大地促進作用,并為一些生物途徑未完全解析,無法通過生物合成途徑生產的含量低但生物活性高的化合物如紫杉醇等,通過抗逆提高并提取化合物提供參考,對于中醫藥行業的發展和土地的科學利用都有著重要的意義。


    技術實現思路

    1、本專利技術目的在于針對目前丹參需求量不斷增加,但是栽培的丹參品質不斷下降的技術問題,提供丹參引導蛋白smdir18及其編碼基因的應用。本專利技術篩選得到一種來自于丹參植物的引導蛋白smdir18,研究發現,該引導蛋白smdir18能調節丹參的生長發育,增加丹參體內有效活性成分丹參酮的含量,進而增強丹參對環境的適應性;因此具有較高的實際應用價值和經濟價值。

    2、本專利技術的目的可以通過以下技術方案實現:

    3、第一方面,本專利技術請求保護氨基酸序列如seq?id?no.2所示的丹參引導蛋白smdir18或與所述丹參引導蛋白smdir18相關的生物材料在如下(a1)-(a9)中的至少一種應用:

    4、(a1)在調節丹參植株的生長發育中的應用;

    5、(a2)在制備調節丹參植株的生長發育的產品中的應用;

    6、(a3)在調節丹參中丹參酮含量中的應用;

    7、(a4)在制備調節丹參中丹參酮含量的產品中的應用;

    8、(a5)在調節丹參抗逆性中的應用;

    9、(a6)在制備調節丹參抗逆性的產品中的應用;

    10、(a7)在培育生長發育能力提高的丹參新種質中的應用;

    11、(a8)在培育丹參酮含量提高的丹參新種質中的應用;

    12、(a9)在培育抗逆性提高的丹參新種質中的應用。

    13、進一步,上述的應用中,所述的與所述丹參引導蛋白smdir18相關的生物材料為如下(b1)-(b11)中的至少一種:

    14、(b1)編碼所述丹參引導蛋白smdir18的基因;

    15、(b2)用于克隆(b1)所述基因的引物對;

    16、(b3)含有(b1)所述基因的表達盒;

    17、(b4)含有(b1)所述基因的重組載體、或含有(b3)所述表達盒的重組載體;

    18、(b5)含有(b1)所述基因的重組微生物、或含有(b3)所述表達盒的重組微生物、或含有(b4)所述重組載體的重組微生物;

    19、(b6)含有(b1)所述基因的轉基因丹參植物細胞系、或含有(b3)所述表達盒的轉基因丹參植物細胞系、或含有(b4)所述重組載體的轉基因丹參植物細胞系;

    20、(b7)含有(b1)所述基因的轉基因丹參植物組織、或含有(b3)所述表達盒的轉基因丹參植物組織、或含有(b4)所述重組載體的轉基因丹參植物組織;

    21、(b8)含有(b1)所述基因的轉基因丹參植物器官、或含有(b3)所述表達盒的轉基因丹參植物器官、或含有(b4)所述重組載體的轉基因丹參植物器官;

    22、(b9)含有(b1)所述基因的轉基因丹參植株、或含有(b3)所述表達盒的轉基因丹參植株、或含有(b4)所述重組載體的轉基因丹參植株;

    23、(b10)由(b9)所述轉基因丹參植株的可再生細胞產生的組織培養物;

    24、(b11)由(b10)所述組織培養物產生的原生質體。

    25、更進一步,(b1)中編碼所述丹參引導蛋白smdir18的基因的核苷酸序列如seq?idno.1所示。

    26、更進一步,(b2)中所述引物對的核苷酸序列如seq?id?no.3和seq?id?no.4所示。

    27、進一步,上述的應用為在目標丹參植株中提高所述丹參引導蛋白smdir18的活性或/和含量,或者過表達編碼所述丹參引導蛋白smdir18的基因,能夠促進丹參植株的生長發育或/和增加丹參中丹參酮的含量或/和提高丹參抗逆性。

    28、第二方面,本專利技術請求保護一種方法,該方法為如下(c1)~(c3)中的至少一種:

    29、(c1)促進丹參生長發育的方法;

    30、(c2)增加丹參中丹參酮含量的方法;

    31、(c3)提高丹參抗逆性的方法;

    32、該方法為在目標丹參植株中提高所述丹參引導蛋白smdir18的活性或/和含量,或者過表達編碼所述丹參引導蛋白smdir18的基因。

    33、第三方面,本專利技術請求保護一種培育轉基因丹參的方法,在目標丹參植株中過表達編碼所述丹參引導蛋白smdir18的基因得到(d1)~(d3)中至少一種所述的丹參轉基因植株:

    34、(d1)生長發育能力提高的丹參轉基因植株;

    35、(d2)丹參酮含量提高的轉基因植株;

    36、(d3)抗逆性提高的轉基因植株。

    37、本專利技術的具體實施方式中,將含有所述丹參引導蛋白smdir18編碼基因的載體通過農桿菌侵染轉入丹參無菌苗葉片,獲得相應的轉基因丹參植株。

    38、所述的編碼丹參引導蛋白smdir18的基因如上所述。

    39、本專利技術所述的抗逆性為耐鹽性。

    40、本專利技術的有益效果:

    41、本專利技術從丹參體中篩選一種引導蛋白smdir18,通過pcr技術從丹參植株中提取的rna進逆轉錄成cdna后擴增獲得了基因的全長序列。通過構建過表達載體和敲降載體并轉入丹參無菌苗葉片中。轉基因植株顯示引導蛋白smdir18可以影響丹參植株的生長發育,增加丹參中丹參酮的含量,進而可以增強丹參對環境的適應性,具有較高的經濟價值和廣闊的應用前景。

    本文檔來自技高網...

    【技術保護點】

    1.氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的丹參引導蛋白SmDIR18或與所述丹參引導蛋白SmDIR18相關的生物材料在如下(a1)-(a9)中的至少一種應用:

    2.根據權利要求1所述的應用,其特征在于,所述的與所述丹參引導蛋白SmDIR18相關的生物材料為如下(b1)-(b11)中的至少一種:

    3.根據權利要求2所述的應用,其特征在于,(b1)中編碼所述丹參引導蛋白SmDIR18的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

    4.根據權利要求2所述的應用,其特征在于,(b2)中所述引物對的核苷酸序列如SEQ?IDNO.3和SEQ?ID?NO.4所示。

    5.根據權利要求1所述的應用,其特征在于,在目標丹參植株中提高所述丹參引導蛋白SmDIR18的活性或/和含量,或者過表達編碼所述丹參引導蛋白SmDIR18的基因,能夠促進丹參植株的生長發育或/和增加丹參中丹參酮的含量或/和提高丹參抗逆性。

    6.根據權利要求1或5所述的應用,其特征在于,所述的抗逆性為耐鹽性。

    7.一種方法,其特征在于,該方法為如下(c1)~(c3)中的至少一種:

    8.一種培育轉基因丹參的方法,其特征在于,在目標丹參植株中過表達編碼權利要求1中所述丹參引導蛋白SmDIR18的基因得到如下(d1)~(d3)中至少一種所述的丹參轉基因植株:

    9.根據權利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述的編碼丹參引導蛋白SmDIR18的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

    10.根據權利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述的抗逆性為耐鹽性。

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    【技術特征摘要】

    1.氨基酸序列如seq?id?no.2所示的丹參引導蛋白smdir18或與所述丹參引導蛋白smdir18相關的生物材料在如下(a1)-(a9)中的至少一種應用:

    2.根據權利要求1所述的應用,其特征在于,所述的與所述丹參引導蛋白smdir18相關的生物材料為如下(b1)-(b11)中的至少一種:

    3.根據權利要求2所述的應用,其特征在于,(b1)中編碼所述丹參引導蛋白smdir18的基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

    4.根據權利要求2所述的應用,其特征在于,(b2)中所述引物對的核苷酸序列如seq?idno.3和seq?id?no.4所示。

    5.根據權利要求1所述的應用,其特征在于,在目標丹參植株中提高所述丹參引導蛋白smdir18的活性或/和含...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:陸續尹小建滕云峰
    申請(專利權)人:中國藥科大學
    類型:發明
    國別省市:

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