【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及利用分子標記鑒定東北南星和燈臺蓮的方法。
技術介紹
1、東北南星(arisaema?amurense?maxim.)與燈臺蓮(arisaema?bockii?engler.)同為天南星科天南星屬的多年生草本，其中東北南星為《中國藥典》規(guī)定的天南星藥材的正品基原之一。按《中國植物志》對這兩個物種的鑒別點的描述，東北南星為一片葉子，燈臺蓮為兩片葉子，然而在對東北南星和燈臺蓮的野外觀察中發(fā)現(xiàn)，東北南星常存在兩片葉子的類型，燈臺蓮也常存在一片葉子的類型，而且兩者都具有短柄的棒狀附屬器，葉片均為鳥趾狀復葉(圖1)。
2、因此，按《中國植物志》的描述難以區(qū)分兩者，以致《安徽植物志》誤將單葉類型的的燈臺蓮作東北南星收錄，可見按照傳統(tǒng)的分類學對燈臺蓮和東北南星進行區(qū)分，專業(yè)人士尚可能存在錯誤，可能導致燈臺蓮誤作為東北南星入藥。因此，需要尋求新的方式對兩者進行區(qū)分，其中分子鑒別是如今較為快速、可靠的鑒定方式，通過開發(fā)鑒定東北南星和燈臺蓮的分子標記可以對二者種質(zhì)資源管理和中藥材的入藥標準制定方面提供重要依據(jù)。
技術實現(xiàn)思路
1、本專利技術主要針對上述技術問題，提供一種簡便的利用分子標記鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法。
2、具體地，本專利技術提供如下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供一種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
4、1)提取待檢測樣品的總dna；
5、2)對上述總dna進行測序，
6、3)將上述測序序列比對到dna條形碼上，所述dna條形碼為seq?id?no.1-4任一條；
7、4)根據(jù)測序reads在dna條形碼上的覆蓋情況判斷所述樣品的物種，如能夠完全覆蓋seq?id?no.1和/或seq?id?no.4，
8、即判斷待測樣品的物種含有東北南星樣品；如能完全覆蓋seq?id?no.2和/或seqid?no.3，即判斷待測樣品的物種含有燈臺蓮樣品。
9、進一步地，步驟1)中所述樣品為單個物種樣品或混合的多物種樣品。
10、進一步地，步驟2)中所述高通量測序為二代測序或三代測序。
11、進一步地，步驟3)中使用geneious、bowtie、bowtie、tophat或hisat任一款軟件極性reads比對。
12、另一方面，本專利技術提供了第二種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
13、1)提取待檢測樣品的總dna；
14、2)利用引物對上述樣品的總dna分別pcr，所述引物的上游引物為seq?id?no.5-9任一條，下游引物為seq?id?no.10-14任一條；
15、3)以seq?id?no.1和/或seq?id?no.2作為標準品，對pcr產(chǎn)物和標準品進行電泳檢測，并根據(jù)電泳結(jié)果判斷待檢測樣品的物種信息；
16、當電泳結(jié)果顯示pcr產(chǎn)物與seq?id?no.1長度接近，和/或大于seq?id?no.2時，即判斷待檢測樣品為東北南星；
17、當電泳結(jié)果顯示pcr產(chǎn)物與seq?id?no.2長度接近，和/或小于seq?id?no.1時，即判斷待檢測樣品為燈臺蓮；
18、當電泳結(jié)果顯示pcr產(chǎn)物含有2條主帶，且分別與seq?id?no.1和seq?id?no.2長度接近，即判斷待檢測樣品同時含有東北南星和燈臺蓮。
19、進一步地，所述引物的上游引物seq?id?no.5，下游引物為seq?id?no.10。
20、另一方面，本專利技術提了第三種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
21、1)提取待檢測樣品的總dna；
22、2)利用引物對上述樣品的總dna分別pcr，所述引物的上游引物為seq?id?no.15-19任一條，下游引物為seq?id?no.20-24任一條；
23、3)以seq?id?no.3和/或seq?id?no.4作為標準品，對pcr產(chǎn)物和標準品進行電泳檢測，并根據(jù)電泳結(jié)果判斷待檢測樣品的物種信息；
24、當電泳結(jié)果顯示pcr產(chǎn)物與seq?id?no.3長度接近，和/或大于seq?id?no.4時，即判斷待檢測樣品為燈臺蓮；
25、當電泳結(jié)果顯示pcr產(chǎn)物與seq?id?no.4長度接近，和/或小于seq?id?no.3時，即判斷待檢測樣品為東北南星；
26、當電泳結(jié)果顯示pcr產(chǎn)物含有2條主帶，且分別與seq?id?no.3和seq?id?no.4長度接近，即判斷待檢測樣品同時含有東北南星和燈臺蓮。
27、進一步地，所述引物的上游引物seq?id?no.15，下游引物為seq?id?no.20。
28、5.另一方面，本專利技術提了第四種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
29、1)提取待檢測樣品的總dna；
30、2)利用引物對上述樣品的總dna分別pcr，所述引物為2對引物；
31、第一對引物的上游引物為seq?id?no.5-9任一條，下游引物為seq?id?no.10-14任一條；
32、第二對引物的上游引物為seq?id?no.15-19任一條，下游引物為seq?id?no.20-24任一條；
33、3)以seq?id?no.1和/或seq?id?no.2和/或seq?id?no.3和/或seq?id?no.4作為標準品，對pcr產(chǎn)物和標準品進行電泳檢測，并根據(jù)電泳結(jié)果判斷待檢測樣品的物種信息，判斷表如如下：
34、a、當電泳結(jié)果顯示第一對引物的pcr產(chǎn)物與seq?id?no.1長度接近，和/或大于seqid?no.2時，
35、且第二對引物的pcr產(chǎn)物與seq?id?no.4長度接近，和/或小于seq?id?no.3時，即判斷待檢測樣品為東北南星；
36、b、當電泳結(jié)果顯示第一對引物的pcr產(chǎn)物與seq?id?no.2長度接近，和/或小于seqid?no.1時，
37、且第二對引物的pcr產(chǎn)物與seq?id?no.3長度接近，和/或大于seq?id?no.4時，即判斷待檢測樣品為燈臺蓮；
38、c、當電泳結(jié)果顯示第一對引物的pcr產(chǎn)物含有2條主帶，且分別與seq?id?no.1和seq?id?no.2長度接近，
39、且第二對引物的pcr產(chǎn)物含有2條主帶，且分別與seq?id?no.3和seq?id?no.4長度接近，即判斷待檢測樣品同時含有東北南星和燈臺蓮。
40、進一步地，所述第一對引物的上游引物seq?id?no.5，下游引物為seq?id?no.10，所述第二對引物的上游引物seq?id?no.15，下游引物為seq?id?no.20。
41、在一個優(yōu)選案例中，上述pcr反應的條件如下：本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
1.一種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，步驟1)中所述樣品為單個物種樣品或混合的多物種樣品。
3.如權(quán)利要求1所述鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，步驟2)中所述高通量測序為二代測序或三代測序。
4.如權(quán)利要求1所述鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，步驟3)中使用Geneious、Bowtie、Bowtie、Tophat或HISAT任一款軟件極性reads比對。
5.一種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
6.如權(quán)利要求5所述的鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，所述引物的上游引物SEQ?ID?NO.5，下游引物為SEQ?ID?NO.10。
7.一種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
8.如權(quán)利要求7所述的鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，所述引物的上游引物SEQ?ID?NO.15，下游引物為SEQ?ID?NO.20。
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1.一種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，步驟1)中所述樣品為單個物種樣品或混合的多物種樣品。
3.如權(quán)利要求1所述鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，步驟2)中所述高通量測序為二代測序或三代測序。
4.如權(quán)利要求1所述鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于，步驟3)中使用geneious、bowtie、bowtie、tophat或hisat任一款軟件極性reads比對。
5.一種鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，其特征在于包含以下步驟：
6.如權(quán)利要求5所述的鑒定區(qū)分東北南星和燈臺蓮的方法，...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：易善勇，徐濤，高欣怡，韓邦興，王威，張曉美，李余先，
申請(專利權(quán))人：皖西學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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