【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物的，更具體地說，涉及一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法。
技術(shù)介紹
1、塵螨是世界范圍內(nèi)分布的過敏作用最強(qiáng)的致敏原。塵螨是一種只有塵埃大小，肉眼難以辨認(rèn)的節(jié)肢動物，廣泛生活在地毯，沙發(fā)、床褥和厚窗簾內(nèi)，以人和動物脫落的皮屑為生。無論是活的或死的塵螨，及其分泌物均可令人產(chǎn)生過敏反應(yīng)。塵螨喜歡在溫暖和潮濕的環(huán)境繁殖，是引起鼻炎，哮喘和皮炎的最重要致敏原。
2、對于過敏性疾病的治療，世界衛(wèi)生組織(who)提出“四位一體”的綜合治療方案。方案建議在盡量避免接觸過敏原的前提下，建議采用變應(yīng)原特異性免疫治療(allergenspecific?immunotherapy，asit)聯(lián)合對癥藥物對患者進(jìn)行綜合性治療，并配合完善的患者管理與教育，以期獲得穩(wěn)定的近期和遠(yuǎn)期療效。其中，asit是目前唯一可能改變過敏性疾病自然進(jìn)程的治療方法。asit目前已被列為ar的一線治療方式，不需要以對癥藥物治療無效為前提。
3、特異性免疫治療成功的關(guān)鍵在于使用標(biāo)準(zhǔn)化、可持續(xù)生產(chǎn)的高質(zhì)量的過敏原制劑，這對提過敏原產(chǎn)品的安全性、有效性、可靠性和精確性至關(guān)重要。同時(shí)，能夠規(guī)模化生產(chǎn)出質(zhì)量可控穩(wěn)定的過敏原原材料也至關(guān)重要。
4、目前，國內(nèi)尚未實(shí)現(xiàn)規(guī)模化粉塵螨的快速繁殖培養(yǎng)。無粉塵螨變應(yīng)原制劑產(chǎn)品可供用于特異性免疫治療。
5、基于上述問題，我們提供了一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法。該制備方法能夠制備得到粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液。不僅能實(shí)現(xiàn)粉塵螨的高效增殖，而且操作簡
6、本
技術(shù)介紹
所公開的上述信息僅僅用于增加對本專利技術(shù)
技術(shù)介紹
的理解，因此，其可能包括不構(gòu)成本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的現(xiàn)有技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決上述
技術(shù)介紹
中提出的問題，本專利技術(shù)提供一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法。
2、本專利技術(shù)提供的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法采用如下的技術(shù)方案：
3、一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，包括以下步驟：
4、步驟一、螨種收集：在粉塵螨的繁殖高峰期即每年的春秋5-6月和9-10月，從糧店、面粉廠的地面及騰空的米、面袋內(nèi)收集下腳粉塵；
5、步驟二、分離鑒定：將粉塵過2號分樣篩，去除雜質(zhì)；再過4號分樣篩，去除顆粒細(xì)小的粉塵，中間一層即為含螨粉塵。將上述含螨粉塵倒入培養(yǎng)皿中，撫平表面，避光置于陰涼潮濕處，定時(shí)觀察。當(dāng)螨的活動破壞了粉塵光滑的表面，出現(xiàn)小凸起時(shí)，挑起少許凸起處制片，進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，在顯微鏡下挑選出活躍的粉塵螨，用于螨種培養(yǎng)；
6、步驟三、螨種培養(yǎng)：將挑出的活躍的粉塵螨在無菌條件下接種至裝有粉塵螨培養(yǎng)基的無菌細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，擰緊瓶蓋。在24～27℃、相對濕度60～80％的條件下培養(yǎng)，每周至少一次在解剖鏡下對粉塵螨的純度、雜螨污染、真菌污染進(jìn)行監(jiān)控。純化培養(yǎng)兩代后，挑選活躍度高、生長狀況良好的為粉塵螨螨種；
7、步驟四、接種：在無菌條件下取粉塵螨螨種與培養(yǎng)基重量比約1:25的接種比例接入至裝有粉塵螨培養(yǎng)基的無菌細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，擰緊瓶蓋。
8、步驟五、培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度24～27℃，相對濕度60～80％，每天記錄溫度、相對濕度，每周至少一次在解剖鏡下對粉塵螨的純度、雜螨污染、真菌污染進(jìn)行監(jiān)控。培養(yǎng)時(shí)間2～3月。培養(yǎng)過程中，及時(shí)挑出受到真菌和雜螨污染的培養(yǎng)瓶；
9、步驟六、收獲：蟲體密度達(dá)到約30～50只/mg培養(yǎng)物即可收獲。將培養(yǎng)好粉塵螨的細(xì)胞培養(yǎng)瓶封口放入冰箱，進(jìn)行-18℃冷凍且保持24小時(shí)以上；
10、步驟七、純化：將粉塵螨培養(yǎng)物根據(jù)螨與飼料的物理性質(zhì)不同、比重不同而逐層分離純化，重復(fù)4～5次此項(xiàng)操作，鏡檢粉塵螨含量達(dá)95％～99％；
11、步驟八、脫脂：將收集得到的粉塵螨原材料用脫脂溶劑反復(fù)浸洗進(jìn)行脫脂處理；
12、步驟九、干燥：將脫脂后的粉塵螨均勻攤開，采用室溫、真空或流化床進(jìn)行干燥處理，得到粉塵螨過敏原原材料；
13、步驟十、保存：將粉塵螨過敏原原材料進(jìn)行冷凍保存；
14、步驟十一、粉塵螨過敏原浸提液制備：按重量體積比1:50～1:10將ph7.9～8.5緩沖鹽水提取液加入到粉塵螨過敏原原材料中，邊加邊振搖，使粉塵螨過敏原原材料分散在緩沖鹽水提取液中，保障混合液中無結(jié)塊現(xiàn)象；在2～8℃下浸提48～72小時(shí)；通過離心機(jī)對緩沖鹽水提取液進(jìn)行離心處理；并收取上清液，對上清液依次進(jìn)行多重過濾；然后在a級無菌潔凈環(huán)境下，進(jìn)行濾膜除菌過濾，最后分裝保存。
15、通過采用上述技術(shù)方案，能夠制備得到粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液。
16、優(yōu)選的，在步驟三、步驟四中，培養(yǎng)基組分為小麥全麥粉31％，玉米粉40％，蛋白粉23.7％，礦物質(zhì)混合物4.8％，復(fù)合維生素0.3％，酵母粉0.2％，培養(yǎng)基經(jīng)過劑量為10kgy-20kgy鈷60輻射滅菌處理。
17、優(yōu)選的，在步驟八中，粉塵螨過敏原原材料用脫脂溶劑反復(fù)浸洗進(jìn)行脫脂處理的過程包括：將脫脂溶劑加入到過敏原原材料中，并攪拌或振蕩脫脂1～3小時(shí)，然后靜置分層，倒出上層液，加入新的脫脂溶劑，重復(fù)脫脂至上層液體澄清，所述過敏原原材料與脫脂溶劑的重量體積比為1：5～1:1，所述脫脂溶劑為丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或環(huán)己烷中的至少一種。
18、優(yōu)選的，在步驟十中，粉塵螨過敏原原材料冷凍保存為-40℃保存。
19、優(yōu)選的，在步驟十一中，緩沖鹽水提取液為碳酸氫鹽提取液或磷酸氫鹽提取液。
20、優(yōu)選的，在步驟十一中，離心機(jī)的離心速度為6000～12000rpm，離心溫度為2～8℃，離心時(shí)間設(shè)定為10～20分鐘。
21、優(yōu)選的，在步驟十一中，對上清液依次進(jìn)行多重過濾，上清液先經(jīng)過濾紙過濾，然后依次經(jīng)過0.65μm、0.45μm和0.22μm的濾膜過濾，且為正壓過濾。
22、優(yōu)選的，在步驟十一中，在a級無菌潔凈環(huán)境下，進(jìn)行濾膜除菌過濾為經(jīng)過0.22μm的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
23、綜上所述，本專利技術(shù)包括以下有益技術(shù)效果：
24、本專利技術(shù)所述一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法能夠制備得到粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液。不僅能實(shí)現(xiàn)粉塵螨的高效增殖，而且操作簡單、成本低廉，所培養(yǎng)的粉塵螨密度大，純度高達(dá)95％～99％，可規(guī)模化高產(chǎn)量培養(yǎng)得到無菌的粉塵螨培養(yǎng)物。制備的浸提液在診斷及治療粉塵螨過敏性疾病中具有很大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟三、步驟四中，培養(yǎng)基組分為小麥全麥粉31％，玉米粉40％，蛋白粉23.7％，礦物質(zhì)混合物4.8％，復(fù)合維生素0.3％，酵母粉0.2％，培養(yǎng)基經(jīng)過劑量為10KGy-20KGy鈷60輻射滅菌處理。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟八中，粉塵螨過敏原原材料用脫脂溶劑反復(fù)浸洗進(jìn)行脫脂處理的過程包括：將脫脂溶劑加入到過敏原原材料中，并攪拌或振蕩脫脂1～3小時(shí)，然后靜置分層，倒出上層液，加入新的脫脂溶劑，重復(fù)脫脂至上層液體澄清，所述過敏原原材料與脫脂溶劑的重量體積比為1：5～1:1，所述脫脂溶劑為丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或環(huán)己烷中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟十中，粉塵螨過敏原原材料冷凍保存為-40℃保存。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟十一中，離心機(jī)的離心速度為6000～12000rpm，離心溫度為2～8℃，離心時(shí)間設(shè)定為10～20分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟十一中，對上清液依次進(jìn)行多重過濾過程包括，上清液先經(jīng)過濾紙過濾，然后依次經(jīng)過0.65μm、0.45μm和0.22μm的濾膜過濾，且為正壓過濾。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟十一中，在A級無菌潔凈環(huán)境下，進(jìn)行濾膜除菌過濾為經(jīng)過0.22μm的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟三、步驟四中，培養(yǎng)基組分為小麥全麥粉31％，玉米粉40％，蛋白粉23.7％，礦物質(zhì)混合物4.8％，復(fù)合維生素0.3％，酵母粉0.2％，培養(yǎng)基經(jīng)過劑量為10kgy-20kgy鈷60輻射滅菌處理。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法，其特征在于：在步驟八中，粉塵螨過敏原原材料用脫脂溶劑反復(fù)浸洗進(jìn)行脫脂處理的過程包括：將脫脂溶劑加入到過敏原原材料中，并攪拌或振蕩脫脂1～3小時(shí)，然后靜置分層，倒出上層液，加入新的脫脂溶劑，重復(fù)脫脂至上層液體澄清，所述過敏原原材料與脫脂溶劑的重量體積比為1：5～1:1，所述脫脂溶劑為丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或環(huán)己烷中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉塵螨純螨體過敏原原材料及其浸提液的制備方法...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王雅玲，蘇繼姣，朱杰麟，高彥紅，
申請(專利權(quán))人：深圳市華仁醫(yī)學(xué)科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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