【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法和應用，屬于醫藥。
技術介紹
1、骨質疏松癥是一種以骨密度低下、骨微結構惡化為特征的系統性骨病，骨形成和骨吸收之間的內穩態失衡是造成骨質疏松癥的主要原因（luhmann?t,?germershaus?o,groll?j,?meinel?l:?bone?targeting?for?the?treatment?of?osteoporosis.?jcontrol?release.?2012;?161:198-213.）。隨著世界范圍內人口老齡化加劇，骨質疏松癥發生率快速攀升（yu?b,?wang?c:?osteoporosis:?the?result?of?an?‘aged’?bonemicroenvironment.?trends?mol?med.?2016;?22:641-644.）。自由基的過量產生與身體抗氧化防御系統失衡被認為是衰老和多種慢性退行性疾病的致病因素，越來越多的研究表明，氧化應激是骨質疏松癥的重要發病機制之一。人體代謝過程中產生的活性氧（ros）包括羥基自由基（?oh）、過氧化氫（h2o2）和超氧化陰離子（），自由基的過度積累引起的氧化應激會加速成骨細胞衰老和凋亡，從而顯著阻礙成骨（zhao?m,?kang?m,?wang?j,?yang?r,zhong?x,?xie?q,?zhou?s,?zhang?z,?zheng?j,?zhang?y,?et?al:?stem?cell-derivednanovesicles?embedded?in?dual-lay
2、水果和蔬菜是抗氧化劑的豐富來源，在清除自由基和維持體內平衡中起著關鍵作用。天然抗氧化劑由于其分子量小、產率低、純化過程復雜、不穩定、生物利用度差，導致其臨床應用受到限制（cong?m,?tan?s,?li?s,?gao?l,?huang?l,?zhang?hg,?qiao?h:technology?insight:?plant-derived?vesicles-how?far?from?the?clinicalbiotherapeutics?and?therapeutic?drug?carriers??adv?drug?deliv?rev.?2022;?182:114108.）。從植物中提取的外泌體樣納米囊泡由于其資源豐富、免疫風險低和生物安全性好，作為潛在的治療候選藥物受到了廣泛關注。到目前為止，已經從水果和蔬菜中提取出含有各種生物活性物質（包括蛋白質、脂質、mrna和mirna）的納米囊泡，用于治療癌癥和各種炎癥（xu?x,?yuan?t,?dad?ha,?shi?m,?huang?y,?jiang?z,?peng?l:?plant?exosomes?asnovel?nanoplatforms?for?microrna?transfer?stimulate?neural?differentiation?ofstem?cells?in?vitro?and?in?vivo.?nano?lett.?2021;?21:8151-8159.；zhang?l,?lis,?cong?m,?liu?z,?dong?z,?zhao?m,?gao?k,?hu?l,?qiao?h:?lemon-derivedextracellular?vesicle-like?nanoparticles?block?the?progression?of?kidneystones?by?antagonizing?endoplasmic?reticulum?stress?in?renal?tubular?cells.nano?lett.?2023;?23:1555-1563.）。同時，外泌體樣納米囊泡富含黃酮和多酚等抗氧化劑，可以被脂質雙層膜保護，防止其快速氧化和降解（zeng?l,?wang?h,?shi?w,?chen?l,chen?t,?chen?g,?wang?w,?lan?j,?huang?z,?zhang?j,?chen?j:?aloe?derivednanovesicle?as?a?functional?carrier?for?indocyanine?green?encapsulation?andphototherapy.?j?nanobiotechnol.?2021;?19:439.）。因此，從植物中提取的外泌體樣囊泡有望成為新一代的納米抗氧化劑。
3、胡蘿卜富含類胡蘿卜素、維生素和其他營養物質，可以緩解氧化應激，但體內治療的高劑量要求及缺乏特異性靶向作用，限制了其臨床應用。而且，傳統的超速離心法在重復高壓純化的過程中易致囊泡結構變形、破壞及非均質顆粒聚集，影響了其進一步應用。
技術實現思路
1、本專利技術旨在提供一種酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法和應用，通過擠壓法制備出了胡蘿卜源納米抗氧化劑，能應用于改善氧化應激，促進良好的骨重建，有效治療骨質疏松癥。
2、本專利技術采用擠壓法，從含有各種生物活性物質（如蛋白質、脂質、有機氧化合物和有機酸）的胡蘿卜中獲得外泌體樣納米囊泡（即為“胡蘿卜衍生的納米抗氧化劑”）。得到的產物與超速離心法純度相同，形態完整，分散性好，成本效益低，適合規模化應用，有望成為一種很有前途的替代方法。胡蘿卜衍生的納米抗氧化劑（carrot-derivednanoantioxidants,?cns）表現出優異的穩定性、良好的生物相容性和優異的抗氧化性，由于骨結構內骨髓毛細血管的內皮細胞和小管通道之間的大量間隙，cns可以在酸性微環境下被動地靶向并聚集在骨組織中，可以改善氧化應激，促進良好的骨重建，可有效治療骨質疏松癥。
3、本專利技術提供的一種酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，步驟如下：
4、（1）清洗：用蒸餾水清洗胡蘿卜并去皮后切塊備用；
5、（2）破碎：將50-500?mg胡蘿卜與150-1000?ml預冷的磷酸鹽緩沖溶液（pbs）混合，使用破壁機破碎；緩沖溶液的ph為7.2-7.4,?濃度為0.01m；
6、（3）過濾：將胡蘿卜汁用100-150目紗布過濾除去較大（100-150μm）的殘渣，得到橙黃色透明溶液；
7、（4）梯度離本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：磷酸鹽緩沖溶液的pH范圍為7.2-7.4，濃度為0.01M。
3.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：破壁機的工藝參數為：轉速為35000-43000轉/分鐘，功率為2200W，開1min，關1min，如此進行4~5個循環。
4.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，紗布為100-150目。
5.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，用脂質體擠出器來代替微孔濾膜，擠出胡蘿卜來源的納米囊泡。
6.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：制得的胡蘿卜源納米抗氧化劑具有均一的圓形結構和特征性的脂質雙分子層，粒徑為50-200nm，Zeta電位為-30mV~-5mV；胡蘿卜源納米抗氧化劑在正常生理
7.一種權利要求1~6任一項所述的制備方法制得的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑在制備治療骨質疏松癥的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：磷酸鹽緩沖溶液的ph范圍為7.2-7.4，濃度為0.01m。
3.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：破壁機的工藝參數為：轉速為35000-43000轉/分鐘，功率為2200w，開1min，關1min，如此進行4~5個循環。
4.根據權利要求1所述的酸響應聚集的胡蘿卜源納米抗氧化劑的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，紗布為100-150目。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：張曉，彭姣，李貝貝，徐俊逸，姚英娟，
申請(專利權)人：山西醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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