【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于核酸提取，具體涉及一種血液基因組dna提取試劑盒及提取方法。
技術介紹
1、真核細胞高分子量dna提取質量是影響后續實驗重要因素，尤其在疾病診斷的基因分型試驗中，模板dna高質量是后期實驗結果準確的重要保證，另外，提取速度的快慢和操作是否簡單亦為多數實驗室考慮的主要因素，得到高純完整的全血基因組dna可用于科研、臨床、pcr實驗室快速分析要求。人類dna對疾病診斷或輔助診斷，遺傳疾病基因序列分析生物多樣性研究等有重要意義。
2、隨著現代分子生物學技術的迅速發展，用于提取高純度血液dna的試劑盒已經商品化生產，但是價格較高，在實驗室普及使用尚有難度。目前，各地實驗室常用的提取血液基因組dna的方法有ctab法、傳統dna提取方法、酚-氯仿法及試劑盒法，這些方法都是經過大量試驗證明其可行性，但并不是所有方法都能提取到純度較高的血液基因組dna。主要原因在于雖然哺乳動物血液中存在大量的紅細胞，但是沒有細胞核，只能從血液中含量極少的白細胞中提取。如何在不破壞白細胞的情況下去除血液中的紅細胞是試驗成功的關鍵。
3、目前，采用試劑盒提取血液基因組dna雖然被廣泛使用，但現有的用于血液基因組dna的提取試劑盒存在提取效率低、提取得到的dna純度較低等問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種血液基因組dna提取試劑盒及提取方法。用于解決現有的用于血液基因組dna的提取試劑盒存在提取效率低、提取得到的dna純度較低等問題。
2、在第一方
3、本專利技術中，專利技術人研究發現，裂解液中的鹽酸胍能夠破壞細胞膜，?使蛋白質變性并沉淀，?從而使核酸擺脫蛋白質的纏繞，充分釋放出來，?有利于后續的提取過程；?在適當的濃度下，?nacl可以降低dna在水中的溶解度，?有助于dna的沉淀和分離?，nacl在降低dna溶解度的同時，?不會破壞dna的結構，?保證了提取的dna的完整；edta在基因組提取中的主要作用是?抑制dnase（?dna酶）?的活性，防止dna的降解；葡聚糖具有?良好的水溶性和生物相容性，能夠提升提取得到的dna的純度；triton?x-100能進一步破壞細胞膜，進一步使核酸分子釋放出來；二硫蘇糖醇能減少和破壞二硫鍵，以及降低dna的二聚化，從而提高dna提取的效率和純度，為后續的分子生物學研究提供高質量的dna樣本；tween-20能夠與鹽酸胍結合，有效地釋放dna；海藻糖能保護提取得到的核酸分子結構的完整性；上述組分之間協同作用，在顯著提升細胞裂解效率的同時，還能得到純度更高、結構更完整和提取產量更高的dna分子。
4、本專利技術提供的血液基因組dna提取試劑盒中，裂解液中鹽酸胍例如可以為5.5m、5.6m、5.7m、5.8m、5.9m、6m或該范圍內的其他數值；nacl例如可以為0.2m、0.22m、0.25m、0.28m、0.3m或該范圍內的其他數值；edta例如可以為0.01m、0.011m、0.012m、0.013m、0.014m、0.015m或該范圍內的其他數值；葡聚糖例如可以為0.010m、0.011m、0.012m、0.013m、0.014m、0.015m或該范圍內的其他數值；triton?x-100的體積濃度（v/v）例如可以為1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2%或該范圍內的其他數值；二硫蘇糖醇例如可以為0.06m、0.07m、0.08m、0.09m、0.10m或該范圍內的其他數值；tween-20的體積濃度（v/v）例如可以為5%、6%、7%、8%、9%、10%或該范圍內的其他數值；海藻糖例如可以為10mm、20mm、30mm、40mm、50mm或該范圍內的其他數值。
5、在一些實施方案中，第一漂洗液包括如下組分：4.5-5m（例如可以為4.5m、4.6m、4.7m、4.8m、4.9m、5m或該范圍內的其他數值）鹽酸胍、10-15mm（例如可以為10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm或該范圍內的其他數值）tris-hcl、1-2mm（例如可以為1mm、1.2mm、1.5mm、1.8mm、2mm或該范圍內的其他數值）edta、0.1-0.3mm（例如可以為0.1mm、0.15mm、0.2mm、0.25mm、0.3mm或該范圍內的其他數值）苯甲基磺酰氟、體積濃度為10-25%（例如可以為10%、15%、20%、25%或該范圍內的其他數值，v/v）的peg?8000。
6、本專利技術中，專利技術人進一步研究發現，第一漂洗液中鹽酸胍能使dna分子進一步釋放出來；edta能進一步防止dna的降解；苯甲基磺酰氟作為蛋白酶抑制劑，能防止在漂洗的過程中，dna分子被降解，提高dna分子的提取效率和保持其結構完整性；peg?8000能夠去除雜質，?提高dna分子的純度；上述物質之間協同作用，能明顯的提高dna洗脫效率，去除dna中的蛋白分子。
7、在一些實施方案中，第二漂洗液包括如下組分：0.15-0.25m（例如可以為0.15m、0.17m、0.2m、0.23m、0.25m或該范圍內的其他數值）tris、0.01-0.02m（例如可以為0.01m、0.012m、0.015m、0.018m、0.02m或該范圍內的其他數值）sds、0.3-0.5m（例如可以為0.3m、0.35m、0.4m、0.45m、0.5m或該范圍內的其他數值）nacl、0.005-0.06m（例如可以為0.005m、0.01m、0.03m、0.05m、0.06m或該范圍內的其他數值）edta、體積濃度為0.01-0.03%（例如可以為0.01%、0.015%、0.02%、0.025%、0.03%或該范圍內的其他數值，v/v）的疊氮化鈉。
8、本專利技術中，專利技術人進一步研究發現，第二漂洗液中sds能與蛋白質結合形成沉淀，?有助于去除樣品中的蛋白質雜質，?提高dna的純度；tris通過其緩沖作用，?能夠保護dna免受酸性物質或其他降解因素的影響，?確保提取的dna質量；通過控制nacl的濃度，?可以選擇性地沉淀dna，?同時去除溶液中的蛋白質、?多糖等雜質，?提高dna的純度；疊氮化鈉能進一步?純化dna；上述物質之間通過協同作用，能顯著提高洗脫效率，并進一步提高dna純度和濃度。
9、在一些實施方案中，洗脫液包括如下組分：3-10mm（例如可以為3mm、5mm、7mm、9mm、10mm或該范圍內的其他數值）tris-hcl、1-2mm（例如可以為1mm、1.2mm、1.5mm、1.8mm、2mm或該范圍內的其他數值本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種血液基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液和洗脫液；
2.?根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述第一漂洗液包括如下組分：4.5-5M鹽酸胍、10-15mM?Tris-HCl、1-2mM?EDTA、0.1-0.3mM苯甲基磺酰氟、體積濃度為10-25%的PEG?8000。
3.?根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述第二漂洗液包括如下組分：0.15-0.25M?Tris、0.01-0.02M?SDS、0.3-0.5M?NaCl、0.005-0.06M?EDTA、體積濃度為0.01-0.03%的疊氮化鈉。
4.?根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述洗脫液包括如下組分：3-10mM?Tris-HCl、1-2mM?EDTA，pH?7.2-8.2。
5.據權利要求1所述的血液基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述血液基因組DNA提取試劑盒還包括蛋白酶K溶液和磁珠溶液；
6.一種使用權利要求1-5中任一項所述的
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S1中，所述待提取血液樣本、所述裂解液和所述蛋白酶K溶液的體積比為（8-12）:（0.5-1.5）:（13-17），孵育的溫度為60-70℃，時間為10-20min。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S2中，所述有機溶劑、所述磁珠溶液和所述待提取血液樣本的體積比為（1-2）:（0.05-0.15）:1；
9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S3中，所述第一漂洗液和所述待提取血液樣本的體積比為（2-3）:1，所述第二漂洗液和所述待提取血液樣本的體積比為（2-4）:1。
10.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S4中，所述烘干的溫度為37-56℃，時間為3-5min；所述洗脫液和所述待提取血液樣本的體積比為（0.25-0.5）:1，振蕩混勻后進行孵育的溫度為50-60℃，時間為5-10min。
...【技術特征摘要】
1.一種血液基因組dna提取試劑盒，其特征在于，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液和洗脫液；
2.?根據權利要求1所述的血液基因組dna提取試劑盒，其特征在于，所述第一漂洗液包括如下組分：4.5-5m鹽酸胍、10-15mm?tris-hcl、1-2mm?edta、0.1-0.3mm苯甲基磺酰氟、體積濃度為10-25%的peg?8000。
3.?根據權利要求1所述的血液基因組dna提取試劑盒，其特征在于，所述第二漂洗液包括如下組分：0.15-0.25m?tris、0.01-0.02m?sds、0.3-0.5m?nacl、0.005-0.06m?edta、體積濃度為0.01-0.03%的疊氮化鈉。
4.?根據權利要求1所述的血液基因組dna提取試劑盒，其特征在于，所述洗脫液包括如下組分：3-10mm?tris-hcl、1-2mm?edta，ph?7.2-8.2。
5.據權利要求1所述的血液基因組dna提取試劑盒，其特征在于，所述血液基因組dna提取試劑盒還包括蛋白酶k溶液和磁珠溶液；<...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊帆，
申請(專利權)人：武漢合測基因科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。