【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于小麥遺傳育種的，具體地，涉及一種用于高通量鑒定小麥赤霉病位點 qfhb7el的分子標記及其應用。
技術介紹
1、赤霉病（fhb）是一種真菌型病害，會導致小麥、玉米、大麥等作物減產，還會污染糧食、飼料等制品，給食品安全等帶來巨大隱患。小麥赤霉病抗性受多基因控制，目前在小麥及其近緣種中已定位到超過600多個與赤霉病抗性相關的qtls，通過meta-qtl分析得到77個高置信度的qtls，但大多數qtls作用微效，只有8個qtls在國際上被正式命名為 fhb1- fhb8。但目前在小麥抗赤霉病育種中被廣泛利用的只有 fhb1。
2、抗赤霉病基因 fhb7，是由山東農大孔令讓教授團隊從十倍體長穗偃麥草中克隆，并揭示其編碼的gst可以催化don與gsh形成gsh-don偶聯物，從而降低don的毒性，提高小麥赤霉病抗性。另外，將攜帶 fhb7的7el2l?染色體片段導入到小麥中，可以提高小麥的赤霉病抗性，這說明攜帶 fhb7的7el2l?染色體片段在抗小麥赤霉病育種方面具有潛在利用價值。此前，也有研究發現，來自于二倍體長穗偃麥草的7el染色體上也攜帶抗小麥赤霉病的基因，且將7el染色體片段導入到普通小麥中同樣可以提供赤霉病抗性，表明二倍體長穗偃麥草的7el染色體片段在抗小麥赤霉病
3、之前對于7el的鑒定采用的是瓊脂糖電泳的標記，瓊脂糖凝膠電泳是一種常用于分子生物學研究的電泳技術，其原理主要是利用帶電分子在電場作用下的移動速度差異對dna進行分離鑒定。瓊脂糖凝膠電泳操作雖然簡單，但當對成千上萬份材料進行鑒定時就顯得尤為耗時。因此，開發出能夠快速高通量鑒定目的基因的方法，對7el的鑒定具有重要的意義。
技術實現思路
1、針對上述瓊脂糖電泳方法鑒定小麥7el染色體片段耗時耗力的問題，本專利技術提供了一種用于高通量鑒定小麥赤霉病位點 qfhb7el的分子標記及其應用，該分子標記能夠高通量快速鑒定7el染色體片段，為培育高產、優質小麥品種提供有實用價值的分子檢測新工具，加快育種進程。
2、為了實現上述目的，本專利技術一方面提供一種用于高通量鑒定小麥赤霉病位點 qfhb7el的分子標記，其引物的核苷酸序列如seq?id?no.1-seq?id?no.4所示。
3、seq?id?no.1（parms-actin-hex）：
4、gaaggtcggagtcaacggattcaacttggcctgacctcatgt
5、seq?id?no.2（parms-actin-?common）：
6、ggctacctaacgatcaatcagc
7、seq?id?no.3（parms-fhb7-fam）：
8、gaaggtgaccaagttcatgctctacacaaccacctgggtcaag
9、seq?id?no.4（parms-fhb7-common）：
10、gacgctgctgatgtctggc。
11、本專利技術利用二倍體長穗偃麥草中 fhb7基因的同源序列設計特異引物，與小麥的actin基因組成引物對，在不同熒光的識別下實現群體分型，并通過分子實驗對標記的可靠性進行驗證。結果表明，本專利技術提出的方法可快速、精確、高通量的地實現小麥背景中抗小麥赤霉病位點 qfhb7el的鑒定，對輔助選擇抗小麥赤霉病新品種具有很高的應用價值。
12、該分子標記與功能位點緊密連鎖，具有分辨率高、分型精準的優點，非常契合在育種實踐中對大規模遺傳品系優異基因型的高效檢測需求，也可輔助實現抗赤霉病多位點/基因型與其他優良性狀進行聚合，加快選育綜合性狀優良的小麥新品種。
13、本專利技術第二方面提供上述的分子標記在小麥抗赤霉病育種中的應用。
14、本專利技術第三方面提供用于高通量鑒定二倍體長穗偃麥草抗小麥赤霉病位點 qfhb7el的方法，該方法利用上述的引物對待測小麥材料的dna進行pcr擴增，若待測小麥材料出現parms引物組的正向競爭性引物parms-actin-hex的熒光基團信號，而不含有正向競爭性引物parms-fhb7-fam的熒光基團信號，則認為該待測小麥材料所提取的dna不含有抗赤霉病的位點 qfhb7el；若待測小麥材料出現parms引物組的正向競爭性引物parms-actin-hex的熒光基團信號，同時也出現正向競爭性引物parms-fhb7-fam的熒光基團信號，則認為該待測小麥材料所提取的dna含有抗赤霉病的位點 qfhb7el。
15、具體地，待測小麥材料出現parms引物組的正向競爭性引物parms-actin-hex的熒光基團信號，而不含有正向競爭性引物parms-fhb7-fam的熒光基團信號的信號值聚合在接近y軸、顯示綠色；待測小麥材料出現parms引物組的正向競爭性引物parms-actin-hex的熒光基團信號，同時也出現正向競爭性引物parms-fhb7-fam的熒光基團信號的信號值聚合在接近x軸和y軸的對角線處、顯示紅色。
16、具體地，pcr擴增反應體系包括：5μl的2×parms?master?mix，0.15μl濃度為10μm的引物parms-fhb7-fam，0.2μl濃度為10μm的引物parms-fhb7-common，0.15μl濃度為10μm的引物parms-actin-hex，0.2μl濃度為10μm的引物parms-actin?-common，10-100ng的基因組dna，最后用ddh2o補至10μl。
17、具體地，pcr擴增程序包括：94℃熱激活20min；94℃變性20?s，65～57℃退火和延伸1?min，10個touch-down循環，每次循環降低0.8℃；94℃變性20?s，57℃復性1?min，32個循環。
18、通過上述技術方案，本專利技術實現了以下有益效果：
19、本專利技術所提供的抗赤霉病的位點 qfhb7el位于二倍體長穗偃麥草7el染色體的末端，將該位點導入到小麥中可顯著提高小麥的赤霉病抗性，利用該位點上fhb7基因的同源序列開發適用于parm系統的標記，用于鑒定抗赤霉病的位點 qfhb7el。開發出的標記，具有擴增穩定，檢測方便快捷、結本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.?一種用于高通量鑒定小麥赤霉病位點Qfhb7EL的分子標記，其特征在于，其引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1-SEQ?ID?No.4所示。
2.權利要求1所述的分子標記在小麥抗赤霉病育種中的應用。
3.用于高通量鑒定二倍體長穗偃麥草抗小麥赤霉病位點Qfhb7EL的方法，其特征在于，包括：利用權利要求1所述的引物對待測小麥材料的DNA進行PCR擴增，若待測小麥材料的熒光基團信號值聚合在接近Y軸、顯示綠色，則認為該待測小麥材料所提取的DNA不含有抗赤霉病的位點Qfhb7EL；若待測小麥材料的熒光基團信號值聚合在接近X軸和Y軸的對角線處、顯示紅色，則認為該待測小麥材料所提取的DNA含有抗赤霉病的位點Qfhb7EL。
4.?根據權利要求3所述的方法，其特征在于，PCR擴增反應體系包括：5μL的2×PARMSmaster?mix，0.15μL濃度為10μM的引物PARMS-Fhb7-FAM，0.2μL濃度為10μM的引物PARMS-Fhb7-Common，0.15μL濃度為10μM的引物PARMS-Actin-HEX，0.2μL濃度為10μM的
5.?根據權利要求3所述的方法，其特征在于，PCR擴增程序包括：94℃熱激活20min；94℃變性20?s，65～57℃退火和延伸1?min，10個touch-down循環，每次循環降低0.8℃；94℃變性20?s，57℃復性1?min，32個循環。
...【技術特征摘要】
1.?一種用于高通量鑒定小麥赤霉病位點qfhb7el的分子標記，其特征在于，其引物的核苷酸序列如seq?id?no.1-seq?id?no.4所示。
2.權利要求1所述的分子標記在小麥抗赤霉病育種中的應用。
3.用于高通量鑒定二倍體長穗偃麥草抗小麥赤霉病位點qfhb7el的方法，其特征在于，包括：利用權利要求1所述的引物對待測小麥材料的dna進行pcr擴增，若待測小麥材料的熒光基團信號值聚合在接近y軸、顯示綠色，則認為該待測小麥材料所提取的dna不含有抗赤霉病的位點qfhb7el；若待測小麥材料的熒光基團信號值聚合在接近x軸和y軸的對角線處、顯示紅色，則認為該待測小麥材料所提取的dna含有抗赤霉病的位點qfhb7el。
4.?根據權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：戴毅，馬鴻翔，費雯琳，王永剛，馬海港，高玉姣，
申請(專利權)人：揚州大學，
類型：發明
國別省市：
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