【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植物育種，涉及轉基因玉米事件lp112-2及其檢測方法。
技術介紹
1、玉米(zea?mays?l.)在世界上很多地區都是主要的糧食作物。生物技術已經應用于玉米以改善其農藝性狀和品質。在玉米生產中昆蟲抗性是一項重要的農藝性狀，特別是對鱗翅目昆蟲(例如玉米螟、棉鈴蟲、草地貪夜蛾、黏蟲等)的抗性。玉米對鱗翅目昆蟲的抗性可以通過轉基因的方法使鱗翅目昆蟲的抗性基因在玉米植物中表達而獲得。另一個重要的農藝性狀是除草劑耐受性，特別是耐受草甘膦除草劑。玉米對草甘膦除草劑的耐受性可以通過轉基因的方法使草甘膦除草劑耐受型基因(如epsps)在玉米植物中表達而獲得。
2、已知外源基因在植物體內的表達受到它們的染色體位置的影響，可能是由于染色質結構(如異染色質)或轉錄調節元件(如增強子)接近整合位點。為此，通常需要篩選大量的事件才有可能鑒定出可以商業化的事件(即導入的目標基因得到最優表達的事件)。例如，在植物和其他生物體中已經觀察到導入基因的表達量在事件間可能有很大差異；在表達的空間或時間模式上可能也存在差異，如在不同植物組織之間轉基因的相對表達存在差異，這種差異表現在實際的表達模式可能與導入的基因構建體中的轉錄調節元件所預期的表達模式不一致。因此，通常需要產生成百上千個不同的事件并從這些事件中篩選出具有以商業化為目的所預期的轉基因表達量和表達模式的單一事件。這樣的轉化事件具有優異的鱗翅目害蟲(如亞洲玉米螟、草地貪夜蛾、東方黏蟲、草地貪夜蛾、棉鈴蟲、小地老虎和桃蛀螟等)和草甘膦除草劑抗性且不影響玉米產量，可采用常規育種方法通
3、能夠檢測特定事件的存在以確定有性雜交的后代是否包含目的基因將是有益的。此外，檢測特定事件的方法還將有助于遵守相關法規，例如來源于重組農作物的食物在投入市場前需要獲得正式批準和進行標記。通過任何熟知的多核苷酸檢測方法來檢測轉基因的存在都是可能的，例如聚合酶鏈式反應(pcr)或利用多核苷酸探針的dna雜交。這些檢測方法通常集中于常用的遺傳元件，例如啟動子、終止子、標記基因等。因此，除非與插入的轉基因dna相鄰的染色體dna(“側翼dna”)的序列是己知的，否則上述這種方法不能用于區別不同的事件，特別是那些用相同的dna構建體產生的事件。所以，目前常利用跨越了插入的t-dna和側翼dna的接合部位的一對引物通過pcr來鑒定轉基因特定事件，具體地說是包含于側翼序列的第一引物和包含插入序列的第二引物。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種轉基因玉米事件lp112-2以及用于檢測玉米植物lp112-2事件的核酸序列及其檢測方法，可以準確快速的鑒定生物樣品中是否包含特定的轉基因玉米事件lp112-2的dna分子。
2、為實現上述目的，本專利技術提供一種用于轉基因玉米事件lp112-2檢測的核酸分子，所述核酸分子的序列包含選自序列seq?id?no:1-5及其互補序列中的任意一種的序列，所述核酸分子來源于包含轉基因玉米事件lp112-2的轉基因玉米的植株、種子或細胞，包含所述轉基因玉米事件lp112-2的玉米種子已以保藏編號cctcc?no:p202429保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱cctcc，地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號武漢大學校內，武漢大學保藏中心，郵編430072)，分類命名：玉米種子lp112-2(zea?mays?l.lp112-2)，保藏時間：2024年11月25日。
3、在一些實施方式中，所述核酸分子的序列如seq?id?no:1-2、seq?id?no:3-4、seqid?no:5或其互補序列中的一組或多組所示，所述核酸分子來源于轉基因玉米事件lp112-2，包含所述轉基因玉米事件lp112-2的玉米種子已以保藏編號cctcc?no:p202429保藏于中國典型培養物保藏中心。
4、在一些實施方式中，所述核酸分子來源于包含轉基因玉米事件lp112-2的植物、種子或細胞。
5、在本專利技術的一些實施方式中，本專利技術提供了一種核酸分子，其包含seq?id?no:3或其互補序列中至少11個連續的核苷酸、和/或seq?id?no:4或其互補序列中至少11個連續的核苷酸。在一些實施方式中，所述核酸序列包括seq?id?no:1或其互補序列、和/或seq?idno:2或其互補序列。在一些實施方式中，所述核酸序列包括seq?id?no:3或其互補序列、和/或seq?id?no:4或其互補序列。在一些實施方式中，所述核酸序列包括seq?id?no:5或其互補序列。
6、所述seq?id?no:1或其互補序列為轉基因玉米事件lp112-2中在插入序列的5’末端位于插入接合部位附近的一個長度為22個核苷酸的序列，所述seq?id?no:1或其互補序列跨越了玉米插入位點的側翼基因組dna序列和插入序列的5’末端的dna序列，包含所述seq?id?no:1或其互補序列即可鑒定為轉基因玉米事件lp112-2的存在。所述seq?id?no:2或其互補序列為轉基因玉米事件lp112-2中在插入序列的3’末端位于插入接合部位附近的一個長度為22個核苷酸的序列，所述seq?id?no:2或其互補序列跨越了插入序列的3’末端的dna序列和玉米插入位點的側翼基因組dna序列，包含所述seq?id?no:2或其互補序列即可鑒定為轉基因玉米事件lp112-2的存在。
7、本專利技術提供的核酸分子可以為所述seq?id?no:3或其互補序列中轉基因插入序列的任何部分的至少11個或更多個連續多核苷酸(第一核酸序列)，或者為所述seq?id?no:3或其互補序列中5’側翼玉米基因組dna區域的任何部分的至少11個或更多個連續多核苷酸(第二核酸序列)。所述核酸分子進一步可以為同源于或互補于包含完整的所述seq?id?no:1的所述seq?id?no:3的一部分。當第一核酸序列和第二核酸序列一起使用時，這些核酸序列在產生擴增產物的dna擴增方法中包括dna引物對。使用dna引物對在dna擴增方法中產生的擴增產物是包括seq?id?no:1的擴增產物時，可以診斷轉基因玉米事件lp112-2或其后代的存在。本領域技術人員熟知，第一和第二核酸序列不必僅僅由dna組成，也可包括rna、dna和rna的混合物，或者dna、rna或其它不作為一種或多種聚合酶模板的核苷酸或其類似物的組合。此外，本專利技術中所述探針或引物應該是至少大約11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22個連續核苷酸的長度，其可以選自seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于轉基因玉米事件LP112-2檢測的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的序列如SEQ?ID?NO:1-2、SEQ?ID?NO:3-4、SEQ?ID?NO:5或其互補序列中的一組或多組所示，所述核酸分子來源于轉基因玉米事件LP112-2，包含所述轉基因玉米事件LP112-2的玉米種子已以保藏編號CCTCC?NO:P202429保藏于中國典型培養物保藏中心。
2.一種DNA引物對，包含第一引物和第二引物，其特征在于，當所述第一引物和所述第二引物與含有轉基因玉米事件LP112-2的DNA一起用于擴增反應時，產生檢測樣品中轉基因玉米事件LP112-2的擴增子；
3.一種檢測樣品中轉基因玉米事件LP112-2的DNA存在的方法，其特征在于，包括：
4.一種DNA檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求2所述的DNA引物對。
5.一種保護玉米植物免于昆蟲侵襲的方法，其特征在于，包括在靶標昆蟲的膳食中提供包含轉基因玉米事件LP112-2的轉基因玉米植物細胞；攝食所述轉基因玉米植物細胞的靶標昆蟲被抑制進一步攝食所述玉米植物，包含所述轉基因玉米
6.一種保護玉米植物免受由草甘膦除草劑引起的損傷的方法，其特征在于，種植包含轉基因玉米事件LP112-2的轉基因玉米植物，施加有效劑量草甘膦除草劑，包含所述轉基因玉米事件LP112-2的玉米種子已以保藏編號CCTCCNO:P202429保藏于中國典型培養物保藏中心。
7.一種控制種植玉米植物的大田中雜草的方法，其特征在于，包括將有效劑量草甘膦除草劑施加到種植轉基因玉米植物的大田中，所述轉基因玉米植物包含轉基因玉米事件LP112-2，包含所述轉基因玉米事件LP112-2的玉米種子已以保藏編號CCTCC?NO:P202429保藏于中國典型培養物保藏中心。
8.一種培養對昆蟲具有抗性，和/或對草甘膦除草劑具有耐受性的玉米植物的方法，其特征在于，包括：種植包含轉基因玉米事件LP112-2的玉米種子；
...【技術特征摘要】
1.一種用于轉基因玉米事件lp112-2檢測的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的序列如seq?id?no:1-2、seq?id?no:3-4、seq?id?no:5或其互補序列中的一組或多組所示，所述核酸分子來源于轉基因玉米事件lp112-2，包含所述轉基因玉米事件lp112-2的玉米種子已以保藏編號cctcc?no:p202429保藏于中國典型培養物保藏中心。
2.一種dna引物對，包含第一引物和第二引物，其特征在于，當所述第一引物和所述第二引物與含有轉基因玉米事件lp112-2的dna一起用于擴增反應時，產生檢測樣品中轉基因玉米事件lp112-2的擴增子；
3.一種檢測樣品中轉基因玉米事件lp112-2的dna存在的方法，其特征在于，包括：
4.一種dna檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求2所述的dna引物對。
5.一種保護玉米植物免于昆蟲侵襲的方法，其特征在于，包括在靶標昆蟲的膳食中提供包含轉基因玉米事件lp112-2的轉基因玉米植物細胞；攝食所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李曉嬌，劉楓，張念，王強，賈慧琳，趙麗媛，林黎彥，郭賀鵬，李斌，
申請(專利權)人：隆平生物技術海南有限公司，
類型：發明
國別省市：
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