【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及植物生物。具體的說，涉及一種水稻轉化事件rn85zn-eh的核酸分子和檢測方法，特別是涉及一種抗蟲和耐受草銨膦除草劑施用的轉基因水稻事件rn85zn-eh和用于檢測生物樣品中是否包含特定轉基因水稻事件rn85zn-eh的核酸分子及其檢測方法。
技術介紹
1、水稻是我國種植面積最廣的農(nóng)作物之一。水稻的整個生育期會受到多種蟲害的影響，其中，二化螟是水稻的主要害蟲之一，其危害面積廣泛，每年在全球范圍內(nèi)對大量水稻田構成嚴重威脅。特別是在水稻生長的關鍵季節(jié)，如夏季和秋季，二化螟的肆虐往往導致水稻產(chǎn)量大幅下降。培育抗蟲耐除草劑轉基因水稻品種，推廣轉基因水稻將是我們提升單產(chǎn)，保證糧食安全的有效手段。
2、使用單一bt蛋白防治策略容易造成靶標害蟲產(chǎn)生抗藥性，因此有必要開發(fā)新的殺蟲蛋白來提高殺蟲效率和延長防治效果。lc85-ac蛋白是一種可用于控制包括草地貪夜蛾、二化螟、東方粘蟲、甜菜夜蛾、斜紋夜蛾、小地老虎、二點委夜蛾等鱗翅目害蟲的新型殺蟲蛋白（專利申請?zhí)?02410332785.6）。
3、田間雜草與作物競爭水、肥、光能及生長空間，直接影響農(nóng)作物產(chǎn)量與質(zhì)量。同時許多雜草又是作物病原菌及害蟲的中間寄主，是作物增產(chǎn)的重要生物限制因子之一。據(jù)聯(lián)合國糧食與農(nóng)業(yè)組織統(tǒng)計，全球因雜草導致的糧食生產(chǎn)損失每年高達950億美元，相當于損失了3.8億噸小麥，約合2009年全球小麥產(chǎn)量的半數(shù)以上。在950億美元的經(jīng)濟損失中，貧困的發(fā)展中國家承受了大約700億美元（fao.?the?lurking?menace?of?weeds
4、本專利技術將抗蟲基因表達盒與耐除草劑基因表達盒串聯(lián)，使其在轉基因水稻中高效表達，兼具抗蟲和耐除草劑性狀，進一步增強了產(chǎn)品的應用和經(jīng)濟價值。
5、已知外源基因在植物體內(nèi)的表達受到它們的染色體位置的影響，可能是由于染色質(zhì)結構（如異染色質(zhì)）或轉錄調(diào)節(jié)元件（如增強子）接近整合位點。為此，通常需要篩選大量的事件才有可能鑒定出可以商業(yè)化的事件（即導入的目標基因得到最優(yōu)表達的事件）。例如，在植物和其他生物體中已經(jīng)觀察到導入基因的表達量在事件間可能有很大差異；在表達的空間或時間模式上可能也存在差異，如在不同植物組織之間轉基因的相對表達存在差異，這種差異表現(xiàn)在實際的表達模式可能與根據(jù)導入的基因構建體中的轉錄調(diào)節(jié)元件所預期的表達模式不一致，從而導致了轉化事件在性狀表現(xiàn)上存在差異。因此，通常需要產(chǎn)生成百上千個不同的事件并從這些事件中篩選出具有以商業(yè)化為目的所預期的轉基因表達量和表達模式的單一事件。具有預期的轉基因表達量和表達模式的事件可用于采用常規(guī)育種方法通過有性異型雜交將轉基因滲入到其他遺傳背景中。通過這種雜交方式產(chǎn)生的后代保持了原始轉化事件的轉基因表達特征。應用這種策略模式可以確保在許多品種中具有可靠的基因表達，而這些品種能很好地適應當?shù)氐纳L條件。因此，需要對更多的轉化事件進行性狀鑒定和篩選，以獲得綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)異，具有商業(yè)化前景的優(yōu)異轉化事件。
6、能夠檢測特定事件的存在以確定有性雜交的后代是否包含目的基因?qū)⑹怯幸娴摹４送猓瑱z測特定事件的方法還將有助于遵守相關法規(guī)，例如來源于重組農(nóng)作物的食物在投入市場前需要獲得正式批準和進行標記。通過任何熟知的多核苷酸檢測方法來檢測轉基因的存在都是可能的，例如聚合酶鏈式反應（pcr）。這些檢測方法通常集中于常用的遺傳元件，例如啟動子、終止子、標記基因等。因此，除非與插入的轉基因dna相鄰的染色體dna（“側翼dna”）的序列是己知的，上述這種方法就不能夠用于區(qū)別不同的事件，特別是那些用相同的dna構建體產(chǎn)生的事件。所以，目前常利用跨越了插入的轉基因和側翼dna的接合部位的一對引物通過pcr來鑒定轉基因特定事件，具體地說是包含側翼序列的第一引物和包含插入序列的第二引物。
技術實現(xiàn)思路
1、本專利技術的目的是提供一種抗蟲耐除草劑性狀優(yōu)異的水稻轉化事件（也叫轉化體）以及用于檢測水稻rn85zn-eh的核酸分子及其檢測方法。轉基因水稻事件rn85zn-eh抗蟲性狀優(yōu)良并對草銨膦除草劑具有較好的耐受性，且檢測方法可以準確快速地鑒定生物樣品中是否包含特定轉基因水稻事件rn85zn-eh的dna分子。
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術使用pbwa(v)hs-bar-lc85aca5表達載體，通過農(nóng)桿菌介導的方法轉化水稻日本晴，獲得了一批陽性轉化事件。通過抗蟲和耐除草劑性狀鑒定發(fā)現(xiàn)，轉化事件rn85zn-eh是除草劑耐受性和抗蟲性表現(xiàn)優(yōu)異的轉化體，能夠用來改良水稻的抗蟲和耐除草劑性狀。
3、為了表征rn85zn-eh的身份特征，本專利技術提供了一種核酸分子，所述核酸分子包含seq?id?no:?1和/或seq?id?no:?2所示序列，或其反向互補序列。
4、進一步地，所述核酸分子包含seq?id?no:?3和/或seq?id?no:?4所示序列，或其反向互補序列。
5、更進一步地，所述核酸分子包含seq?id?no:?6和/或seq?id?no:?7所示序列，或其反向互補序列。
6、更進一步地，所述核酸分子包含seq?id?no:?5所示序列或其反向互補序列。
7、本專利技術還提供了用于檢測水稻轉化事件的探針，其特征在于，包括seq?id?no:?1或seq?id?no:?2或seq?id?no:?3或seq?id?no:?4或seq?id?no:?6或seq?id?no:?7所示序列或其片段或其變體或其反向互補序列。
8、本專利技術還提供了用于檢測水稻轉化事件的引物對，其特征在于，所述引物對的擴增產(chǎn)物包含seq?id?no:?1或seq?id?no:?2或seq?id?no:?3或seq?id?no:?4或seq?id?no:6或seq?id?no:?7所示序列或其片段或其變體或其反向互補序列。
9、在一些實施方案中，上述引物對為seq?id?no:?8和seq?id?no:?9所示的序列；或者seq?id?no:?10和seq?id?no:?11所示的序列。
10、本專利技術還提供了用于檢測水稻轉化事件的試劑盒或微陣列，其特征在于，包含上述的探針和/或引物對。
11、本專利技術還提供了檢測水稻轉化事件的方法，其特征在于，包括利用上述的探針本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
1.一種核酸分子，其特征在于，包括如下任意一種：
2.用于檢測水稻轉化事件的探針，其特征在于，包括SEQ?ID?NO:?1或SEQ?ID?NO:?2或SEQ?ID?NO:?3或SEQ?ID?NO:?4或SEQ?ID?NO:?6或SEQ?ID?NO:?7所示序列或其片段或其變體或其反向互補序列。
3.用于檢測水稻轉化事件的引物對，其特征在于，所述引物對的擴增產(chǎn)物包含權利要求2所述的序列。
4.根據(jù)權利要求3所述的引物對，其特征在于，所述引物對為SEQ?ID?NO:?8和SEQ?IDNO:?9所示的序列；或者SEQ?ID?NO:?10和SEQ?ID?NO:?11所示的序列。
5.用于檢測水稻轉化事件的試劑盒或微陣列，其特征在于，包含權利要求2所述的探針和/或權利要求3-4任一項所述的引物對。
6.檢測水稻轉化事件的方法，其特征在于，包括利用以下任一項來檢測待測樣品中是否存在所述轉化事件：
7.對水稻進行育種的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包
9.由權利要求7-8任一項的方法獲得的制品，其特征在于，所述制品是由水稻植物、種子、植物細胞、后代植物或植物部分制成的，包括食品、飼料或工業(yè)原料。
10.一種保護水稻植物免受由除草劑引起的損傷的方法，其特征在于，包括將含有有效劑量草銨膦除草劑施加到種植至少一種轉基因水稻植物的大田中，所述轉基因水稻植物在其基因組中依次包含SEQ?ID?NO:?1、SEQ?ID?NO:?5第654-6844位核酸序列和SEQ?ID?NO:2，或者所述轉基因水稻植物的基因組中包含SEQ?ID?NO:?5；所述轉基因水稻植物具有對草銨膦除草劑的耐受性。
11.一種保護水稻植物免于昆蟲侵襲的方法，其特征在于，包括在靶昆蟲的膳食中提供至少一種轉基因水稻植物細胞，所述轉基因水稻植物細胞在其基因組中依次包含SEQ?IDNO:?1、SEQ?ID?NO:?5第654-6844位核酸序列和SEQ?ID?NO:?2，或者所述轉基因水稻植物細胞的基因組中包含SEQ?ID?NO:?5；攝食所述轉基因水稻植物細胞的靶昆蟲被抑制進一步攝食所述水稻植物。
...【技術特征摘要】
1.一種核酸分子，其特征在于，包括如下任意一種：
2.用于檢測水稻轉化事件的探針，其特征在于，包括seq?id?no:?1或seq?id?no:?2或seq?id?no:?3或seq?id?no:?4或seq?id?no:?6或seq?id?no:?7所示序列或其片段或其變體或其反向互補序列。
3.用于檢測水稻轉化事件的引物對，其特征在于，所述引物對的擴增產(chǎn)物包含權利要求2所述的序列。
4.根據(jù)權利要求3所述的引物對，其特征在于，所述引物對為seq?id?no:?8和seq?idno:?9所示的序列；或者seq?id?no:?10和seq?id?no:?11所示的序列。
5.用于檢測水稻轉化事件的試劑盒或微陣列，其特征在于，包含權利要求2所述的探針和/或權利要求3-4任一項所述的引物對。
6.檢測水稻轉化事件的方法，其特征在于，包括利用以下任一項來檢測待測樣品中是否存在所述轉化事件：
7.對水稻進行育種的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：對權利要求7所述步驟2）所獲得的后代植物進行抗蟲...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：李輝，李弘婧，霍東博，張韜帷，王暉，
申請(專利權)人：萊肯生物科技海南有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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