【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物，涉及一種人工合成啟動子，尤其涉及包含該啟動子的菌株，還涉及包含該啟動子的質(zhì)粒及含有該質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)化子，以及他們在同源或異源蛋白表達方面和在產(chǎn)維生素b12菌株中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、啟動子是rna聚合酶識別和結(jié)合的dna序列，是基因表達必需的順式作用元件，它決定了基因在何時、何地以及以何種頻率被表達。轉(zhuǎn)錄是基因表達的第一步，而啟動子在轉(zhuǎn)錄的起始階段起著決定性作用，啟動子活性的強弱直接影響基因表達水平，在基因轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控中居于至關(guān)重要的地位。
2、在微生物代謝工程途徑改造過程中，常見的策略是利用不同強度的啟動子對目的基因表達進行精細的調(diào)控，實現(xiàn)各中間代謝產(chǎn)物在生成與利用之間的協(xié)調(diào)平衡，降低或阻止中間產(chǎn)物以及毒性物質(zhì)的積累，提高代謝產(chǎn)物的合成效率。然而，目前可獲得的天然啟動子很難滿足上述要求，在應(yīng)用上具有一定的缺陷性，因此需要構(gòu)建一些人工啟動子來滿足不同的基因表達需求[yasmeen?e,?wang?j,?riaz?m,?zhang?l,?zuo?k.?designingartificial?synthetic?promoters?for?accurate,?smart,?and?versatile?geneexpression?in?plants.?plant?commun.?2023?jul?10;4(4):100558.]。
3、維生素b12又被稱為鈷胺素/vb12，是目前已知的結(jié)構(gòu)最為復雜的維生素，是人體生長發(fā)育的必需營養(yǎng)素，廣泛應(yīng)用于食物添加劑、醫(yī)藥以及飼料等行業(yè)。維生素b12有
4、為了進一步研究產(chǎn)維生素b12菌種的生理特征與鈷胺素代謝機制，增強相應(yīng)菌種產(chǎn)維生素b12的能力，往往需要在菌體內(nèi)適量表達一個或多個基因，這時就需要一個合適的啟動子元件。然而，產(chǎn)維生素b12菌種中可用的啟動子數(shù)量非常有限。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)一段序列，這段序列為質(zhì)粒載體上的一段序列，本專利技術(shù)人無意中發(fā)現(xiàn)將其融合到天然啟動子前面，可增強天然啟動子的表達，于是人工合成了一個可以應(yīng)用于多種產(chǎn)維生素b12菌種中的啟動子。本專利技術(shù)的目的之一在于提供一種人工合成啟動子，該人工合成啟動子能夠驅(qū)動內(nèi)源或異源基因的表達。
2、本專利技術(shù)提供一種人工合成啟動子，其核苷酸序列任選自如下(a)、(b)或(c)所述的序列：
3、(a)人工合成啟動子為序列表seq?id?no：1所示的核苷酸序列；
4、(b)與序列表seq?id?no：1具有75%以上一致性，且具有啟動子功能的核苷酸序列；
5、(c)在高嚴謹條件下與(a)或(b)所述的核苷酸序列雜交且具有啟動子功能的核苷酸序列；
6、優(yōu)選地，所述(b)為與序列表seq?id?no：1具有90%以上同源性，且具有啟動子功能的核苷酸序列。
7、本專利技術(shù)進一步提供含有所述的人工合成啟動子的表達盒。
8、本專利技術(shù)也提供含有所述的人工合成啟動子，或所述的表達盒的重組載體。
9、具體地，所述重組載體的骨架載體為含有革蘭氏陰性菌均可識別的復制子和mob基因的廣泛宿主穿梭質(zhì)粒載體。
10、更具體地，所述重組載體的骨架載體為pbbr1mcs2或pme6032。
11、本專利技術(shù)含有所述的人工合成啟動子，或所述的重組載體的重組菌。
12、具體地，所述重組菌為產(chǎn)維生素b12菌株的脫氮假單胞桿菌（ pseudomonas? denitrificans）、黏著劍菌（ ensifer?adherents）或苜蓿中華根瘤菌（ sinorhizobium? meliloti）。
13、本專利技術(shù)還提供所述的人工合成啟動子在通過啟動目的基因表達中的應(yīng)用。
14、具體地，所述目的基因是合成維生素b12相關(guān)基因，通過啟動目的基因的表達以使得重組菌產(chǎn)維生素b12。
15、更具體地，所述重組菌是通過導入所述的重組載體而得到。
16、本專利技術(shù)所提人工合成啟動子，可以用于驅(qū)動內(nèi)源或異源基因的表達，尤其是增加了產(chǎn)維生素b12菌株中可用的啟動子數(shù)量，為啟動子工程更好的應(yīng)用于產(chǎn)維生素b12菌株代謝途徑基因的表達調(diào)控提供了更多的選擇。
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1.一種人工合成啟動子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.含有如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子的表達盒。
3.含有如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子，或如權(quán)利要求2所述的表達盒的重組載體。
4.如權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體的骨架載體為含有革蘭氏陰性菌均可識別的復制子和mob基因的廣泛宿主穿梭質(zhì)粒載體。
5.如權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體的載體骨架為PBBR1MCS2或pME6032。
6.含有如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子，或如權(quán)利要求3至5任一項所述的重組載體的重組菌。
7.如權(quán)利要求6所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌為產(chǎn)維生素B12菌株的脫氮假單胞桿菌（Pseudomonas?denitrificans）、黏著劍菌（Ensifer?adherents）或苜蓿中華根瘤菌（Sinorhizobium?meliloti）。
8.如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子在通過啟動目的基因表達中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求8所述
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述重組菌是通過導入如權(quán)利要求3至5任一項所述的重組載體而得到。
11.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，所述重組菌為產(chǎn)維生素B12菌株的脫氮假單胞桿菌（Pseudomonas?denitrificans）、黏著劍菌（Ensifer?adherents）或苜蓿中華根瘤菌（Sinorhizobium?meliloti）。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種人工合成啟動子，其特征在于，其核苷酸序列如seq?id?no：1所示。
2.含有如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子的表達盒。
3.含有如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子，或如權(quán)利要求2所述的表達盒的重組載體。
4.如權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體的骨架載體為含有革蘭氏陰性菌均可識別的復制子和mob基因的廣泛宿主穿梭質(zhì)粒載體。
5.如權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體的載體骨架為pbbr1mcs2或pme6032。
6.含有如權(quán)利要求1所述的人工合成啟動子，或如權(quán)利要求3至5任一項所述的重組載體的重組菌。
7.如權(quán)利要求6所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌為產(chǎn)維生素b12菌株的脫氮假單胞桿菌（pseudomonas?denitr...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張大偉，王會穎，董會娜，劉璇，丁冬芹，
申請(專利權(quán))人：中國科學院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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