【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，特別是涉及一種脫脂月見草籽蛋白水解物及其制備方法和在防治糖尿病視網膜病變中的應用。
技術介紹
1、月見草是一種柳葉科植物，具有多種生物學特性，月見草籽大部分被用來榨油，內含豐富的不飽和脂肪酸γ-亞麻酸。月見草籽榨油后的副產物富含蛋白質，大部分被用作普通肥料或者直接丟棄，沒有得到充分有效的利用，不僅對資源造成了嚴重的浪費而且還會造成環境污染。從這個角度看，如何實現月見草籽榨油后副產物附加值的最大化成為一個重要的研究方向。研究表明，月見草籽具有很高的營養價值，從月見草籽中分離出的蛋白含量高達75％，蛋白質的氨基酸種類齊全，富含谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸氨基酸等。多項研究發現，通過酶解蛋白水解物具有抗氧化、抗炎、抗糖尿病的生物活性。然而，現有技術中關于月見草籽油的研究很多，但關于研究月見草籽蛋白水解物的研究卻很少。
2、dr(糖尿病視網膜病變)是最常見的微血管并發癥，常伴隨著視網膜血管損傷、氧化應激、以及新血管生成等癥狀，也是視力失明的主要原因，嚴重影響了糖尿病患者的健康，降低了其生活質量。雖然可以通過控制血糖延緩糖尿病并發癥的發生，但是無法阻止糖尿病并發癥的發生，因此改善糖尿病性視網膜血管損傷可能是治療dr的一個重要策略。目前月見草籽的諸多生物活性已經被報道，發現月見草的化學成分特別月見草籽油在慢性炎癥的治療中是有益的。并且有研究報道酶解蛋白水解物普遍具有抗氧化、抗炎、抗糖尿病的生物活性。然而，關于脫脂月見草籽蛋白水解物的研究卻很少。
3、堿提酸沉法是一種傳統的蛋白質提取方法，它利用蛋白
4、本專利技術以斑馬魚為實驗動物模型，探討脫脂月見草籽蛋白水解物對糖尿病視網膜血管損傷的干預作用，并表征deppr(脫脂月見草籽蛋白復合蛋白酶水解物)的理化性質和毒性，初步探究deppr對高糖誘導斑馬魚視網膜血管損傷干預作用機制，為deppr在糖尿病性視網膜血管損傷防治中的應用提供新的數據參考。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種脫脂月見草籽蛋白水解物及其制備方法和在防治糖尿病視網膜病變中的應用，以解決上述現有技術存在的問題，本專利技術優化了脫脂月見草籽蛋白水解物的制備方法，該蛋白水解物對高糖誘導的斑馬魚視網膜血管損傷具有顯著的干預作用，為dr的預防和治療提供了新的數據參考和作用機制。
2、為實現上述目的，本專利技術提供了如下方案：
3、本專利技術提供一種脫脂月見草籽蛋白水解物，利用復合蛋白酶水解脫脂月見草籽蛋白得到；
4、所述脫脂月見草籽蛋白由脫脂月見草籽經堿提酸沉制備得到。
5、本專利技術還提供一種所述脫脂月見草籽蛋白水解物的制備方法，包括以下步驟：
6、將脫脂月見草籽粉末混合于水中，調節溶液ph至11.5，經超聲處理、第一次離心，得脫脂月見草籽的堿提液；
7、將所述脫脂月見草籽堿提液的ph調節至3.0，靜置，第二次離心，收集沉淀得脫脂月見草籽蛋白；
8、所述脫脂月見草籽蛋白用復合蛋白酶水解得所述脫脂月見草籽蛋白水解物；
9、所述復合蛋白酶的cas為：9014-01-1。
10、優選的是，所述脫脂月見草籽粉末與水的料液比為1g：20ml；所述超聲處理的條件為250w處理60min；所述第一次離心的條件為4℃，3000r/min離心20min。
11、優選的是，所述靜置的條件為4℃靜置2h；所述第二次離心的條件為4℃，3000r/min離心30min。
12、優選的是，所述復合蛋白酶的酶活性為3000u/g；
13、優選的是，所述水解的條件為溫度50℃，ph?7，200r/min下震蕩3h。
14、本專利技術還提供所述的脫脂月見草籽蛋白水解物在制備防治糖尿病視網膜病變的藥物中的應用。
15、本專利技術還提供一種防治糖尿病視網膜病變的藥物，包含所述的脫脂月見草籽蛋白水解物。
16、所述脫脂月見草籽蛋白水解物的濃度為10μg/ml-50μg/ml。
17、可選的是，還包含藥學上可接受的輔料。
18、可選的是，所述藥物的劑型包括液體劑型。
19、本專利技術公開了以下技術效果：
20、本專利技術優化了脫脂月見草籽蛋白提取方法：通過實驗確定了最適合脫脂月見草籽蛋白的堿提酸沉技術條件，提高了蛋白的提取效率和質量。
21、通過實驗找到了最適合水解脫脂月見草籽蛋白的酶(復合蛋白酶)及最佳水解條件(溫度50℃、ph7、酶活性3000u/g、恒溫震蕩時間3小時)，在這些條件下得到的水解物抗氧化活性最佳。deppr(復合蛋白酶水解物)相比于原始的dep(脫脂月見草籽蛋白)，具有更低的分子量、平均粒徑和多分散指數，這表明復合蛋白酶水解改善了dep的溶解性和穩定性，使其更適合作為食品或藥物成分使用。通過傅里葉變換紅外光譜(ftir)、圓二色譜(cd)和紫外光譜分析，deppr顯示出與dep不同的二級和三級結構，表明復合蛋白酶水解改變了dep的蛋白質結構，可能增強了其生物活性。deppr的表面疏水性顯著高于dep，這可能有助于提高其在生物體內的吸收和利用，從而增強其生物活性。
22、通過將月見草籽榨油后的副產物轉化為富含蛋白質的脫脂月見草籽蛋白水解物，提高了月見草籽的利用效率，減少了資源浪費和環境污染。
23、經實驗證實，通過使用dep制備的deppr，對高糖誘導的斑馬魚視網膜血管損傷具有顯著的干預作用。具體表現為，與高糖暴露組相比，deppr處理組的斑馬魚視網膜血管直徑顯著降低，從5.89μm降至4.27μm；通過非靶向代謝組學技術，發現deppr可能通過調節氨基酸代謝來減輕高糖誘導的斑馬魚視網膜血管損傷，為dr的預防和治療提供了新的數據參考和作用機制，顯示出對dr的潛在治療效果。
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1.一種脫脂月見草籽蛋白水解物，其特征在于，其是利用復合蛋白酶水解脫脂月見草籽蛋白得到；
2.一種權利要求1所述脫脂月見草籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述脫脂月見草籽粉末與水的料液比為1g：20mL；所述超聲處理的條件為250W處理60min；所述第一次離心的條件為4℃，3000r/min離心20min。
4.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述靜置的條件為4℃靜置2h；所述第二次離心的條件為4℃，3000r/min離心30min。
5.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述復合蛋白酶的酶活性為3000U/g；
6.如權利要求1所述的脫脂月見草籽蛋白水解物在制備防治糖尿病視網膜病變的藥物中的應用。
7.一種防治糖尿病視網膜病變的藥物，其特征在于，包含權利要求1所述的脫脂月見草籽蛋白水解物。
8.如權利要求7所述的藥物，其特征在于，所述脫脂月見草籽蛋白水解物的濃度為10μg/mL-50μg/mL。
9.如權
10.如權利要求7所述的藥物，其特征在于，所述藥物的劑型包括液體劑型。
...【技術特征摘要】
1.一種脫脂月見草籽蛋白水解物，其特征在于，其是利用復合蛋白酶水解脫脂月見草籽蛋白得到；
2.一種權利要求1所述脫脂月見草籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述脫脂月見草籽粉末與水的料液比為1g：20ml；所述超聲處理的條件為250w處理60min；所述第一次離心的條件為4℃，3000r/min離心20min。
4.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述靜置的條件為4℃靜置2h；所述第二次離心的條件為4℃，3000r/min離心30min。
5.如...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王志強，閆宏遠，韓丹丹，馬蕾，韓雪，楊春柳，
申請(專利權)人：河北大學，
類型：發明
國別省市：
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