【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，尤其涉及用于評估法醫案件檢材提取和擴增的質控方法。
技術介紹
1、法醫物證檢測?dna的研究和分析對象主要是dna多態性。一般來說，基因或非編碼區的?dna標記在染色體上的位置稱為基因座，位于同一個基因座上不同序列的基因被稱為等位基因。dna多態性就是指作為遺傳標記的基因座存在多個等位基因，分析基因座上等位基因的差異就是實現同一認定的生物學基礎。
2、法醫物證中常見的?dna?檢材是指人體與犯罪現場的物品接觸后，嫌疑人口腔、體表皮膚脫落的細胞以及各種分泌物與排泄物等。在入室搶劫、故意傷害、強奸、親子鑒定等等一系列的刑事和民事案件中，犯罪現場遺留下來嫌疑人的血斑、精斑、骨骼、肌肉、毛發、唾液斑、尿斑、指（趾）甲、汗液、指紋等一系列有關的生物物證都可以作為?dna鑒定的素材（檢材）。由此可見，依據dna?多態性的鑒定結論可以作為許多案件的強有力證據。然而，想要對dna進行采樣鑒定，要求是必須得到足量并且足夠純凈的?dna?樣本。
3、dna?提取純化技術是法醫?dna?檢驗的第一個步驟，也是至關重要的一步。然而，市面上常見的法醫案件樣本的核酸提取純化試劑盒不包含內質控，下游檢測結果異常時無法判斷核酸提取過程的可能存在的問題。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術要解決的技術問題在于提供用于評估法醫案件檢材提取和擴增的質控方法。
2、本專利技術提供了法醫檢材的提取和擴增的質控片段，其包括核苷酸序列如seq?idno:1所示的上游片
3、所述隨機片段與人源基因的同源性低于20%；
4、所述隨機片段包括長度為6~35nt的短片段和/或長度為300~650nt的長片段。
5、進一步的，本專利技術的具體實施例中，
6、所述短片段的核苷酸序列如seq?id?no:3所示（eqcs）；
7、所述長片段的核苷酸序列如seq?id?no:4所示（eqcl）。
8、本專利技術提供了質控品，其包括本專利技術所述的質控品片段和載體骨架。
9、進一步的，所述載體骨架來源于puc57。
10、本專利技術提供了質控試劑，其包括本專利技術所述的質控品和輔料。
11、進一步的，所述輔料用于所述質控品保存中維持其穩定和/或防止其降解，所述輔料包括穩定劑、防腐劑、緩沖液和/或抗氧化劑。
12、本專利技術提供了試劑盒，其包括本專利技術所述的質控品和/或本專利技術所述的質控試劑中的至少一種，提取試劑、擴增試劑和/或擴增引物。
13、進一步的，所述擴增引物包括核苷酸序列如seq?id?no:7所示的上游引物和核苷酸序列如seq?id?no:8所示的下游引物。
14、本專利技術提供了如下i）~iv）中的至少一種在法醫檢材的質控和/或檢測中的應用：
15、i）、本專利技術所述的質控片段；
16、ii）、本專利技術所述的質控品；
17、iii）、本專利技術所述的質控試劑；
18、iv）、本專利技術所述的試劑盒。
19、本專利技術提供了法醫檢材的質控和/或檢測方法，其包括利用如下i）~iv）所示中的至少一種對法醫檢材進行質控和/或檢測：
20、i）、本專利技術所述的質控片段；
21、ii）、本專利技術所述的質控品；
22、iii）、本專利技術所述的質控試劑；
23、iv）、本專利技術所述的試劑盒。
24、具體的，所述的質控和/或檢測方法，包括如下步驟：將所述質控品與樣本進行混合后，經提取、擴增和電泳，根據電泳結果實現法醫檢材的質控和/或檢測。進一步的，所述電泳為毛細管電泳。
25、本專利技術提供的質控品或質控試劑或試劑盒，其可用于法醫檢材檢測過程涉及的dna提取和pcr擴增的質控，eqcs和eqcl以質粒的形式進行提取和擴增，質粒為穩定的dna形式，當其摻入具體的樣本并隨樣本進行提取時，含有eqcs和eqcl的質粒在正常情況下是可以被提取和擴增出來的，可以通過檢查在分型圖譜上是否存在eqcs和eqcl產物峰來確認dna提取和pcr反應的成功或失敗，還可以通過評估eqcs和eqcl的相對峰高與樣本的不同片段大小的峰高確定dna是否降解；在具體的一次提取和擴增中，以含有eqcs和eqcl的質粒的擴增特征峰以及特征峰的峰高為對照，對樣本dna質量進行評估；具體的，提取試劑中混入本專利技術所述的質控品，然后所述質控品跟隨樣本dna一起進行擴增和毛細管電泳，根據毛細管電泳結果判定或實現樣本dna的質控和/或檢測；
26、具體的，判定或實現樣本的質控（dna的提取和質量）的標準為：
27、電泳圖譜中出現eqcs和eqcl的產物峰，且eqc峰高與各個基因座的等位基因峰高相對一致，則dna提取成功；
28、電泳圖譜中無eqcs和eqcl的產物峰檢出，且各個基因座無有效目的峰檢出，則dna提取失敗；
29、若電泳圖譜中出現eqcs和eqcl的產物峰，且eqc峰高相對一致，而各個基因座峰高呈現前高后低，或小片段基因座有目的峰，大片段無目的峰檢出時，可推斷樣本dna存在降解。
30、除此，本專利技術所述的eqcs和eqcl片段長度和序列也是經過篩選獲得的，跳出現有的設計長度，如設計太小或者太大的質粒序列，可能會導致毛細管電泳方法無法檢測到；序列與樣本序列過于相似或gc含量、發卡結構等過高則對擴增結果產生影響，經試驗發現，以本專利技術所述的eqcs和eqcl用于質控的效果最好。
31、現有技術用于法醫檢材的質控品只能說明擴增過程正常，卻無法判斷是檢材不包含dna，還是核酸提取過程出現問題導致的dna丟失。本專利技術提供了可用于法醫檢材提取和pcr檢測過程，這兩個過程同時進行質控的質控品；同時本專利技術所述的質控品，具有較高的普適性，其與市面常見常染色體str試劑盒的匹配度高；且質控過程無需增加額外的檢測方法或者組分，即可實現法醫dna檢驗過程的提取質控和pcr檢測質控。
32、本專利技術提供了可用于法醫檢材提取和擴增質控的質控品，所述質控品位分別含eqcs小片段和eqc大片段的質粒，將其應用于法醫檢材提取和檢測的質控，方法簡單可靠，與現有檢測試劑盒兼容度高，具有廣泛的應用前景。
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1.法醫檢材的提取和擴增的質控片段，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示的上游片段，核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示的下游片段，和位于上游片段和下游片段之間的隨機片段；
2.根據權利要求1所述的質控片段，其特征在于，
3.質控品，其特征在于，包括權利要求1或2所述的質控品片段和載體骨架。
4.根據權利要求3所述的質控品，其特征在于，所述載體骨架來源于pUC57。
5.質控試劑，其特征在于，包括權利要求3或4所述的質控品和輔料。
6.根據權利要求5所述的質控試劑，其特征在于，所述輔料包括穩定劑、防腐劑、緩沖液和/或抗氧化劑。
7.試劑盒，其特征在于，包括權利要求3或4所述的質控品和/或權利要求5或6所述的質控試劑中的至少一種、提取試劑、擴增試劑和/或擴增引物。
8.如下I）~IV）中的至少一種在法醫檢材的質控和/或檢測中的應用：
9.法醫檢材的質控和/或檢測方法，其特征在于，包括利用如下i）~iv）所示中的至少一種對法醫檢材進行質控和/或檢測：
10.
...【技術特征摘要】
1.法醫檢材的提取和擴增的質控片段，其特征在于，包括核苷酸序列如seq?id?no:1所示的上游片段，核苷酸序列如seq?id?no:2所示的下游片段，和位于上游片段和下游片段之間的隨機片段；
2.根據權利要求1所述的質控片段，其特征在于，
3.質控品，其特征在于，包括權利要求1或2所述的質控品片段和載體骨架。
4.根據權利要求3所述的質控品，其特征在于，所述載體骨架來源于puc57。
5.質控試劑，其特征在于，包括權利要求3或4所述的質控品和輔料。
6.根據權利要求5所述的質控試劑，其特征在于，所述輔料包括...
【專利技術屬性】
技術研發人員：伏東科，沙潔，劉旭，李康，畢萬里，
申請(專利權)人：蘇州新海生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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