【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，具體涉及一種脂質(zhì)激酶pik3c3作為靶標在監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的用途。
技術(shù)介紹
1、人體發(fā)育的最早階段，是嬰兒出生前在母體宮內(nèi)發(fā)育的階段，此期間由受精卵發(fā)育成胚胎，再繼續(xù)發(fā)育為成熟胎兒，從受孕到分娩共10個月左右，約280天。胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常是指胎兒在母體子宮內(nèi)的發(fā)育過程中出現(xiàn)的各種異常情況，包括生長遲緩、結(jié)構(gòu)畸形以及染色體異常等?！敖】蹬c疾病的發(fā)育起源”學說提示，胎兒宮內(nèi)發(fā)育時期的生長情況與圍產(chǎn)期結(jié)局、甚至成年期健康高度相關(guān)。然而胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的發(fā)生機制錯綜復雜，可能是母體營養(yǎng)、胎盤、人口學特征及社會環(huán)境因素等的共同影響，這也導致了胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的研究工作尚未取得明顯的進展。鑒于胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常問題的重要性和緊迫性，其病因和發(fā)病機制一直是圍產(chǎn)領(lǐng)域的研究熱點，也是亟待解決的難題。找到一種高靈敏、快速的宮內(nèi)發(fā)育監(jiān)測靶標已迫在眉睫。
2、細胞自噬(autophagy)是一種真核生物中高度保守的溶酶體降解途徑，以維持機體的代謝適應(yīng)和能量循環(huán)。因此，胚胎發(fā)育和胎兒生長的過程必然存在細胞自噬調(diào)控。近年來發(fā)現(xiàn)自噬在人類胎盤的生成及發(fā)育中發(fā)揮重要作用。目前研究證實，細胞自噬與病理妊娠有關(guān)，自噬異?？蓪е伦甜B(yǎng)細胞增殖、分化、凋亡和自噬等生物學行為異常，破壞母胎界面平衡紊亂，從而導致胎兒生長受限等一系列胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的發(fā)生。pik3c3基因(phosphatidylinositol?3-kinase?catalytic?subunittype?3)，也被稱為vps34或hvps34，位于第18號染色體長臂12區(qū)
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供pik3c3作為靶標在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育產(chǎn)品中的應(yīng)用。本專利技術(shù)發(fā)現(xiàn)pik3c3在胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常母體血液中差異表達顯著。
2、本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：
3、本專利技術(shù)提供了pik3c3作為靶標在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育產(chǎn)品中的應(yīng)用。本專利技術(shù)的pik3c3(gene?id:5289)的具體序列可在國際公共核酸序列數(shù)據(jù)庫genebank中查詢到。本專利技術(shù)發(fā)現(xiàn)pik3c3在胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的母體中差異表達顯著，可以作為胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常分子標志物的應(yīng)用。
4、本專利技術(shù)所述監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的產(chǎn)品通過檢測被測試者體內(nèi)pik3c3的表達水平，與正常水平相比較來監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育情況。
5、作為一種實施方式，本專利技術(shù)檢測被測試者組織或體液中pik3c3的表達水平，若pik3c3的表達量高于正常水平，則胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的風險高。本專利技術(shù)所述被測試者指孕育有胎兒的母體。本專利技術(shù)用于監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的pik3c3來源包括但不限于被測試者的組織或體液，體液包括血液、組織液等存在dna的體內(nèi)液體成分。在本專利技術(shù)的具體實施方案中，用于監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的pik3c3的來源是被測試者的血液。本專利技術(shù)正常水平指的是孕育有正常發(fā)育胎兒的被測試者體內(nèi)pik3c3的表達水平。
6、本專利技術(shù)中，所述產(chǎn)品包括通過反轉(zhuǎn)錄pcr、實時熒光定量pcr、原位雜交、芯片或高通量測序平臺檢測被測試者pik3c3的表達水平以監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的情況。作為一種實施方式，所述產(chǎn)品包括芯片、試劑、試劑盒或試紙，所述試劑盒包括pcr試劑盒或原位雜交試劑盒。
7、本專利技術(shù)還提供了檢測pik3c3表達水平的物質(zhì)在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常產(chǎn)品的應(yīng)用。
8、本專利技術(shù)中，與胎兒宮內(nèi)發(fā)育正常的相比，胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的被測試者體內(nèi)pik3c3的表達水平升高。
9、本專利技術(shù)還提供了一種監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的試劑或試劑盒，所述試劑或試劑盒包括至少包括一對特異擴增pik3c3的引物，通過反轉(zhuǎn)錄pcr或?qū)崟r定量pcr檢測pik3c3表達水平以監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育。
10、作為一種實施方式，所述引物的序列如seq?id?no.1和seq?id?no.2所示。
11、優(yōu)選的，所述試劑或試劑盒還包括rt-pcr試劑或?qū)崟r定量pcr試劑。
12、作為一種實施方式，所述試劑盒為原位雜交試劑盒，包括與pik3c3核酸序列雜交的探針，所述探針通過原位雜交檢測pik3c3表達水平以監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育。
13、本專利技術(shù)還提供了一種監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的芯片，所述芯片包括固相載體以及固定在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括用于檢測pik3c3轉(zhuǎn)錄水平的與pik3c3的核酸序列雜交的探針，通過芯片檢測pik3c3表達水平以監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育。
14、本專利技術(shù)中，與pik3c3核酸序列雜交的探針可以是dna、rna、dna-rna嵌合體、pna或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié)合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。
15、在本專利技術(shù)的上下文中，“監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育”指判斷受試者胎兒宮內(nèi)發(fā)育是否正常。
16、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)具有如下技術(shù)效果：
17、本專利技術(shù)通過rna測序發(fā)現(xiàn)pik3c3在胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常母體血液中差異表達顯著，通過設(shè)計特異性引物進行qpcr實驗進一步驗證了pik3c3在胎兒發(fā)育異常患者中的高表達。這使得pik3c3適用于快速和經(jīng)濟有效的早期胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的監(jiān)測。
18、pik3c3的發(fā)現(xiàn)有助于了解mrna在胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常中的作用機制，同時也為篩選胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常相關(guān)的新的生物標志物提供研究方向，為胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的監(jiān)測及干預治療提供新的靶點。
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1.PIK3C3作為靶標在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的產(chǎn)品通過檢測被測試者體內(nèi)PIK3C3的表達水平，與正常水平相比較來監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育情況。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測被測試者組織或體液中PIK3C3的表達水平，若PIK3C3的表達量高于正常水平，則胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的風險高。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括通過反轉(zhuǎn)錄PCR、實時定量PCR、原位雜交、芯片或高通量測序平臺檢測PIK3C3表達水平。
5.檢測PIK3C3表達水平的物質(zhì)在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常產(chǎn)品的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，與胎兒宮內(nèi)發(fā)育正常的相比，胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的被測試者體內(nèi)PIK3C3的表達水平升高。
7.一種監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的試劑或試劑盒，其特征在于，包括至少一對特異性擴增PIK3C3的引物，或者包括與PIK3C3核酸序列雜交的探針。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的試劑或試劑盒，其特征在于，還包括RT-PCR試劑或?qū)崟r定量PCR試劑。
10.一種監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的芯片，其特征在于，所述芯片包括固相載體以及固定在所述固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括用于檢測PIK3C3轉(zhuǎn)錄水平的與PIK3C3的核酸序列雜交的探針。
...【技術(shù)特征摘要】
1.pik3c3作為靶標在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育的產(chǎn)品通過檢測被測試者體內(nèi)pik3c3的表達水平，與正常水平相比較來監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育情況。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，檢測被測試者組織或體液中pik3c3的表達水平，若pik3c3的表達量高于正常水平，則胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常的風險高。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括通過反轉(zhuǎn)錄pcr、實時定量pcr、原位雜交、芯片或高通量測序平臺檢測pik3c3表達水平。
5.檢測pik3c3表達水平的物質(zhì)在制備監(jiān)測胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常產(chǎn)品的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：駱鶯，王聰，蔣晴晴，
申請(專利權(quán))人：上海市長寧區(qū)婦幼保健院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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