【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及模式動物線蟲研究，尤其涉及一種用于捕獲并以統一體位固定線蟲的微流控芯片及制備方法。
技術介紹
1、模式動物秀麗隱桿線蟲(caenorhabditis?elegans)具有生長繁殖迅速，易于培養，個體微小，結構簡單，方便進行分子生物學操作等優勢。線蟲體微小，成蟲體長1mm，寬約80μm，對其進行捕獲操作、固定觀察操作等有一定難度，蓬勃發展的微流控芯片技術以其在微納尺度出色的操控能力，已經廣泛應用于線蟲的操控，使用微流控芯片固定線蟲能較好保持其活性，是目前公認對線蟲傷害最小的固定技術。線蟲個體微小透明度較好與微流控芯片均適于顯微成像，光學成像是研究線蟲的常用方法，線蟲個體微米級尺寸正好處于微流控芯片及光學成像工作范圍，三者匹配完好，例如微流控芯片能夠線蟲固定對線蟲進行光學成像分析。微流控芯片技術較大地促進線蟲研究的發展的同時，也拓展了自身的應用空間，許多應用于線蟲研究的微流控芯片可以被開發成線蟲研究工具。
2、常用于微流控芯片固定線蟲的方法有單通道法、側面吸附通道吸附固定法、薄膜下壓法等，后兩者較多使用。吸附法操作簡便，固定效果好，只影響線蟲局部表層，薄膜下壓法會影響線蟲整體，吸附固定法有獨特的優勢。
3、液態環境中線蟲會本能地行“c”型擺動運動，擺動頻率固定，在固態培養基上體現為“s”型(正弦函數曲線)爬行運動。線蟲的擺動行為與其平行于脊線、腹線縱向肌肉相關，這里，與常見的爬行動物不同線蟲爬行時其脊線、腹線在身體兩側，而非上下分布，其側線為上下分布，自然狀態下線蟲是側身爬行，此為線蟲自然體位是
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了解決現有技術中線蟲無法倍同一體位進行固定的技術問題。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用了如下技術方案：
3、一種微流控芯片，包括方形結構、吸附通道、進樣孔及出樣孔，其中所述進樣孔及所述出樣孔位于所述方形結構長度方向兩端，所述方形結構內設有主通道，所述主通道與所述出樣孔及所述進樣孔連通設置，所述主通道與所述吸附通道連通設置，所述吸附通道用于連接40到70kpa壓力可調負壓源，所述方形結構的主通道上背離所述吸附通道一側設置有線蟲調頭單通道，所述線蟲調頭單通道設置有兩個，兩個所述線蟲調頭單通道分別位于所述進樣孔與所述吸附通道之間及所述出樣孔與所述吸附通道之間，所述線蟲調頭單通道用于連通40kpa負壓源。
4、優選的，所述線蟲調頭單通道在靠近所述方形結構一端的開口處寬度為20μm，其余區域寬度大于20μm，其高度為40μm。
5、優選的，所述吸附通道包括主吸附通道及輔助吸附通道，所述輔助吸附通道設置有兩個，兩個所述輔助吸附通道分別位于所述主吸附通道的寬度方向的兩側，兩個輔助吸附通道與所述主吸附通道之間呈45°夾角，并且，所述主吸附通道與所述輔助吸附通道的總寬度為1mm。
6、優選的，所述主吸附通道垂直于所述方形結構的邊緣，所述主吸附通道寬度為740μm，所述主吸附通道靠近方形結構邊緣400μm范圍內的高度為40μm，所述主吸附通道其余部分高度為80μm，所述輔助吸附通道的寬度與所述主吸附通道一致，其靠近方形結構邊緣處的開口寬度為20μm，其余區域寬度大于20μm，所述輔助吸附通道的高度為40μm。
7、優選的，還包括一pdms薄膜，所述薄膜在方形結構切除，所述方形區域的底面為玻璃基層，所述吸附通道的開口在所述玻璃基層上方70至80μm處。
8、優選的，所述主通道在所述線蟲調頭單通道開口的左右兩側各900μm范圍通道寬度120μm，其余部分均為高度80μm，寬80μm。
9、優選的，所述進樣孔呈圓形設置，所述進樣孔的直徑為4mm，從進樣孔出發，通道寬度自150μm寬度逐漸變窄至80μm，然后連通所述主通道，再與所述出樣孔連接設置。
10、優選的，所述進樣孔與出樣孔之間還連接有一緩沖通道，所述緩沖通道與所述主通道相互平行，所述緩沖通道位于所述方形結構的下方。
11、優選的，還包括沖洗通道，所述沖洗通道位于所述方形結構背離所述吸附通道一側，所述沖洗通道設置有兩個，兩個所述沖洗通道位于所述兩側所述線蟲調頭單通道之間。
12、本申請還提供了一種微流控芯片的制備方法，用于制備上述所述的微流控芯片，選用pdms和24*40mm規格蓋玻片，按照流程進行芯片的制作，先在方形結構區域下方的pdms使用11號手術刀片在體式顯微鏡下切除，切割時應注意保持主吸附通道及左右輔助吸附通道開口處切割平整。
13、本申請中所提供的一種微流控芯片，實現了微流控芯片上高效捕獲線蟲、不同線蟲個體以同一體位(自然體位)被固定，消除因線蟲體位不同造成的實驗結果差異，實驗數據更為精確。圍繞線蟲的個別生理特征而“量身制作”芯片裝置以完成對線蟲的特定效果實驗操作：將線蟲自由擺動時其體位為自然體位的生理特征，轉化為微流控芯片上統一自然體位固定線蟲的實驗操作結果，是微流控技術用于操作線蟲的細化及深一步分工，具有完整而獨立的功能，可以被開發成線蟲研究工具。此技術方法有利于線蟲操作的自動化、智能化與高通量。
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1.一種微流控芯片，包括方形結構、吸附通道、進樣孔及出樣孔，其中所述進樣孔及所述出樣孔位于所述方形結構長度方向兩端，所述方形結構內設有主通道，所述主通道與所述出樣孔及所述進樣孔連通設置，所述主通道與所述吸附通道連通設置，所述吸附通道用于連接40到70KPa壓力可調負壓源，其特征在于：所述方形結構的主通道上背離所述吸附通道一側設置有線蟲調頭單通道，所述線蟲調頭單通道設置有兩個，兩個所述線蟲調頭單通道分別位于所述進樣孔與所述吸附通道之間及所述出樣孔與所述吸附通道之間，所述線蟲調頭單通道用于連通40KPa負壓源。
2.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述線蟲調頭單通道在靠近所述方形結構一端的開口處寬度為20μm，其余區域寬度大于20μm，其高度為40μm。
3.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述吸附通道包括主吸附通道及輔助吸附通道，所述輔助吸附通道設置有兩個，兩個所述輔助吸附通道分別位于所述主吸附通道的寬度方向的兩側，兩個輔助吸附通道與所述主吸附通道之間呈45°夾角，并且，所述主吸附通道與所述輔助吸附通道的總寬度為1mm。>
4.根據權利要求3所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述主吸附通道垂直于所述方形結構的邊緣，所述主吸附通道寬度為740μm，所述主吸附通道靠近方形結構邊緣400μm范圍內的高度為40μm，所述主吸附通道其余部分高度為80μm，所述輔助吸附通道的寬度與所述主吸附通道一致，其靠近方形結構邊緣處的開口寬度為20μm，其余區域寬度大于20μm，所述輔助吸附通道的高度為40μm。
5.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：還包括一PDMS薄膜，所述薄膜在方形結構切除，所述方形區域的底面為玻璃基層，所述吸附通道的開口在所述玻璃基層上方70至80μm處。
6.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述主通道在所述線蟲調頭單通道開口的左右兩側各900μm范圍通道寬度120μm，其余部分均為高度80μm，寬80μm。
7.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述進樣孔呈圓形設置，所述進樣孔的直徑為4mm，從進樣孔出發，通道寬度自150μm寬度逐漸變窄至80μm，然后連通所述主通道，再與所述出樣孔連接設置。
8.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述進樣孔與出樣孔之間還連接有一緩沖通道，所述緩沖通道與所述主通道相互平行，所述緩沖通道位于所述方形結構的下方。
9.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：還包括沖洗通道，所述沖洗通道位于所述方形結構背離所述吸附通道一側，所述沖洗通道設置有兩個，兩個所述沖洗通道位于所述兩側所述線蟲調頭單通道之間。
10.一種微流控芯片的制備方法，用于制備權利要求1-9任意一項所述的微流控芯片，其特征在于：選用PDMS和24*40mm規格蓋玻片，按照流程進行芯片的制作，先在方形結構區域下方的PDMS使用11號手術刀片在體式顯微鏡下切除，切割時應注意保持主吸附通道及左右輔助吸附通道開口處切割平整。
...【技術特征摘要】
1.一種微流控芯片，包括方形結構、吸附通道、進樣孔及出樣孔，其中所述進樣孔及所述出樣孔位于所述方形結構長度方向兩端，所述方形結構內設有主通道，所述主通道與所述出樣孔及所述進樣孔連通設置，所述主通道與所述吸附通道連通設置，所述吸附通道用于連接40到70kpa壓力可調負壓源，其特征在于：所述方形結構的主通道上背離所述吸附通道一側設置有線蟲調頭單通道，所述線蟲調頭單通道設置有兩個，兩個所述線蟲調頭單通道分別位于所述進樣孔與所述吸附通道之間及所述出樣孔與所述吸附通道之間，所述線蟲調頭單通道用于連通40kpa負壓源。
2.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述線蟲調頭單通道在靠近所述方形結構一端的開口處寬度為20μm，其余區域寬度大于20μm，其高度為40μm。
3.根據權利要求1所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述吸附通道包括主吸附通道及輔助吸附通道，所述輔助吸附通道設置有兩個，兩個所述輔助吸附通道分別位于所述主吸附通道的寬度方向的兩側，兩個輔助吸附通道與所述主吸附通道之間呈45°夾角，并且，所述主吸附通道與所述輔助吸附通道的總寬度為1mm。
4.根據權利要求3所述的一種微流控芯片，其特征在于：所述主吸附通道垂直于所述方形結構的邊緣，所述主吸附通道寬度為740μm，所述主吸附通道靠近方形結構邊緣400μm范圍內的高度為40μm，所述主吸附通道其余部分高度為80μm，所述輔助吸附通道的寬度與所述主吸附通道一致，其靠近方形結構邊緣處的開口寬度為20μm，其余區域寬度大...
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