【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及食品醫(yī)藥及保健品，具體涉及一種有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)的發(fā)病機理復(fù)雜且尚未完全明確，傳統(tǒng)治療方法如口服藥物、注射劑等在uc患者中的吸收效果不佳，導(dǎo)致藥物濃度難以達到治療所需水平，影響治療效果。且長期服用藥物可能導(dǎo)致全身性毒副作用，如腎毒性、骨質(zhì)疏松、易感染、消化道出血等。此外，一些患者對藥物產(chǎn)生耐藥性，需要更高劑量或更頻繁的用藥，增加了藥物治療的復(fù)雜性和患者的不適感。因此，開發(fā)一款治療效果好，毒副作用低，適用性廣泛的藥物是當前的研究熱點。而uc病發(fā)部位ros水平異常升高，針對這一情況，開發(fā)一種針對ros的靶向遞送系統(tǒng)，高效遞送活性物質(zhì)到炎癥部位，是提高藥物治療和減少毒副作用的關(guān)鍵。
2、姜黃素(cur)具有抗炎、抗氧化、降血脂、抗病毒、抗感染、抗腫瘤等廣泛的藥理活性，且毒性低，不良反應(yīng)小，近年來成為治療多種疾病潛在的候選藥物。而且多項研究發(fā)現(xiàn)，cur可以抑制tnf-α、il-6、γ干擾素(ifn-γ)等炎癥介質(zhì)、信號通路傳導(dǎo)和影響腸道菌群，具有治療uc的潛力。
3、已有研究利用天然聚合物制備各種活性化合物遞送系統(tǒng)，用于抵抗胃腸道消化過程中的活性物質(zhì)降解，提高其生物利用度。然而，這些遞送系統(tǒng)缺乏靶向性，不能特異性地識別炎癥部位，從而限制了其治療效果。此外，目前關(guān)于基于天然聚合物的結(jié)構(gòu)修飾，合成ros響應(yīng)性遞送載體的研究報道較少。現(xiàn)有使用的前體聚合物材料大多為合成高分子聚合物，在食品領(lǐng)域應(yīng)用受限。這些遞送系統(tǒng)的制備過程復(fù)雜，需要添加多種有機試劑
4、cn113577299b提出了一種ros響應(yīng)性的單抗類藥物口服納米粒及其制備方法。這種方法是通過透明質(zhì)酸包埋英夫利昔單抗用于治療結(jié)腸腸炎的實例。但是英夫利昔單抗具有惡心、嘔吐和不適等副作用。且沒有研究該納米粒穩(wěn)定性能、以及在體外探究是否能夠成功釋放的問題。
5、cn117919434a提出了一種自框架納米遞藥系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用。這種方法是將天然多酚、含二硒鍵的功能分子與六氯環(huán)三磷腈單體混合，通過聚合反應(yīng)得到納米系統(tǒng)。但是六氯環(huán)三磷腈本身具有腐蝕性，有一定的制備風險。且沒有研究該納米粒對ros的消除性能、以及在體外探究是否能夠成功釋放的問題。
6、綜上所述，現(xiàn)有的uc治療相關(guān)活性物質(zhì)采用的遞送系統(tǒng)存在組織選擇性差、合成原料具有潛在的安全隱患，不能在食品領(lǐng)域使用，制備過程復(fù)雜，很大程度上限制了活性物質(zhì)的靶向治療應(yīng)用。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于，公開了一種有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備及應(yīng)用。本專利技術(shù)主要應(yīng)用食品法規(guī)允許的原材料羧甲基纖維素，引入人體必需的微量金屬元素硒，構(gòu)建含雙硒的ros響應(yīng)性納米粒(cur@cmc-se)，提高姜黃素的生物利用度和靶向控釋性能。本研究所制備的cur@cmc-se成分安全，具有良好的藥物控制釋放、抵抗胃腸道消化、抵抗ph降解和熱降解的能力。體內(nèi)實驗結(jié)果證明，口服cur@cmc-se能夠有效降低小鼠結(jié)腸炎癥程度，恢復(fù)腸道健康。通過探究發(fā)現(xiàn)，cur@cmc-se不僅可以通過調(diào)節(jié)炎癥因子表達來促進腸道健康恢復(fù)。更重要的是cur@cmc-se可以通過調(diào)整腸道菌群結(jié)構(gòu)來調(diào)節(jié)失調(diào)狀態(tài)的腸道菌群，增強腸道屏障功能，從而促進恢復(fù)腸道健康。
2、方法包括：
3、1.ros響應(yīng)性納米載體cmc-se的構(gòu)建及表征：①cmc-se的構(gòu)建②ftir分析③dsc分析④硒元素含量及元素分布⑤粒徑分布及zeta電位測定；結(jié)果表明硒化物片段成功連接到羧甲基纖維素上，并且構(gòu)建的載體能形成一個穩(wěn)定的體系。
4、2.cmc-se氧化結(jié)構(gòu)變化探究：①ftir分析②電子能譜分析③dsc分析④粒徑分布及zeta電位測定⑤tem形貌觀察；cmc-se在h2o2環(huán)境下能夠進行響應(yīng)并導(dǎo)致結(jié)構(gòu)解離。
5、3.cur@cmc-se的制備、表征及功能探究：①制備及表征②體外氧化響應(yīng)功能探究③體外模擬消化穩(wěn)定性探究④ph穩(wěn)定性探究⑤熱穩(wěn)定性探究；cur@cmc-se具有精準遞送到uc高ros部位釋放藥物的潛力，能夠幫助cur抵抗胃腸道的消化降解和熱處理的穩(wěn)定性。
6、4.cur@cmc-se治療uc小鼠效果及機制探究：①生物安全性實驗②ros響應(yīng)性納米載體小鼠體內(nèi)分布情況③建立uc小鼠模型④uc小鼠模型評價⑤cur@cmc-se治療uc小鼠效果評價⑥cur@cmc-se治療uc機制探究；cur@cmc-se通過抗炎作用和調(diào)節(jié)腸道菌群的方式，有效治療uc，為相關(guān)疾病的治療提供了新的思路和方法。
7、本研究設(shè)計了一種針對uc的新型治療策略，通過構(gòu)建ros響應(yīng)型納米載體cmc-se，并將cur負載到其中形成cur@cmc-se，成功實現(xiàn)了藥物的精準控制釋放。且體內(nèi)實驗結(jié)果證明，口服cur@cmc-se能夠有效降低小鼠結(jié)腸炎癥程度，恢復(fù)腸道健康。并探究出可能機制是cur@cmc-se通過調(diào)節(jié)炎癥因子表達和腸道菌群組成來促進腸道健康恢復(fù)。這項研究為uc的治療提供了新思路和方法，并具有重要的臨床應(yīng)用前景。
8、為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
9、一種有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，包括以下步驟：
10、a、以二硒化合物為原料，與n-α-芴甲氧羰基-n-epsilon-叔丁氧羰基-d-賴氨酸進行酰胺反應(yīng)，得到se-nhboc；
11、b、將所述se-nhboc進行去保護反應(yīng)，除去boc基團，得到se-nh2；
12、c、將所述se-nh2與載體進行縮合反應(yīng)，并進行純化，得到納米粒。
13、優(yōu)選的，包括以下步驟：
14、a、在冰浴和惰性氣體保護下，以所述二硒化合物為原料，溶解于酰胺反應(yīng)溶劑中，之后加入輔助溶劑，攪拌，再加入所述n-α-芴甲氧羰基-n-epsilon-叔丁氧羰基-d-賴氨酸，攪拌溶解，最后加入催化劑以及縮合劑，攪拌溶解，轉(zhuǎn)移至室溫攪拌，進行所述酰胺反應(yīng)，純化后，得到所述se-nhboc；
15、b、將所述se-nhboc溶解于去保護溶劑中，之后加入去保護劑，進行所述去保護反應(yīng)，除去所述boc基團，純化后，得到所述se-nh2；
16、c、將所述載體溶于緩沖溶劑中，再加入縮合溶劑充分溶解，加入活化試劑和縮合試劑，攪拌，獲得載體溶液；將所述se-nh2溶于所述緩沖溶劑中，再加入所述縮合溶劑充分溶解，獲得se-nh2溶液；將所述se-nh2溶液逐滴緩慢加入到所述載體溶液中，進行所述縮合反應(yīng)，并進行純化，得到所述納米粒。
17、優(yōu)選的，步驟a中，所述二硒化合物包括硒代胱胺二鹽酸鹽，所述惰性氣體包括氮氣，所述酰胺反應(yīng)溶劑包括dmf，輔助溶劑所述催化劑包括1-羥基苯丙三唑，所述縮合劑包括1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；步驟b中，所述去保護溶劑包括二氯甲烷，所述去保護劑包括三氟乙酸；步驟c中，本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，步驟A中，所述二硒化合物包括硒代胱胺二鹽酸鹽，所述惰性氣體包括氮氣，所述酰胺反應(yīng)溶劑包括DMF，所述輔助溶劑包括N-甲基嗎啉，所述催化劑包括1-羥基苯丙三唑，所述縮合劑包括1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；步驟B中，所述去保護溶劑包括二氯甲烷，所述去保護劑包括三氟乙酸；步驟C中，所述載體包括CMC，所述緩沖溶劑包括MES，所述縮合溶劑包括DMSO，所述活化試劑包括NHS，所述縮合試劑包括EDCI。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，步驟A中，所述二硒化合物、所述酰胺反應(yīng)溶劑、所述輔助溶劑、所述N-α-芴甲氧羰基-N-epsilon-叔丁氧羰基-D-賴氨酸、所述催化劑、所述縮合劑的質(zhì)量體積比包括5～10g：100～200mL：5～10mL：15～20g：2～4g：5
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，步驟A中，純化操作包括萃取、干燥、洗滌、沉淀中的一種或多種；步驟B中，純化操作包括中和、過濾、干燥中的一種或多種；步驟C中，純化操作包括透析、冷凍干燥中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，步驟A中，純化操作包括：加入乙酸乙酯和水進行萃取，收集上層有機相，然后下層水相繼續(xù)添加乙酸乙酯進行萃取，重復(fù)3次，棄置水相，將上層有機相收集到一起，轉(zhuǎn)移至旋蒸瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至幾乎干，隨后用飽和氯化鈉溶液沖洗兩次除去雜質(zhì)，隨后加入無水硫酸鈉除去殘留的水分，隨后加入二氯甲烷至剛好溶解，隨后加入甲醇至溶液剛變渾濁即停下，靜置24h沉淀后過濾，得到所述Se-NHBoc；
8.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法獲得的有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求8所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的應(yīng)用，其特征在于，用于制備ROS的靶向遞送的制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的應(yīng)用，其特征在于，用于制備治療潰瘍性結(jié)腸炎的制劑。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，步驟a中，所述二硒化合物包括硒代胱胺二鹽酸鹽，所述惰性氣體包括氮氣，所述酰胺反應(yīng)溶劑包括dmf，所述輔助溶劑包括n-甲基嗎啉，所述催化劑包括1-羥基苯丙三唑，所述縮合劑包括1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；步驟b中，所述去保護溶劑包括二氯甲烷，所述去保護劑包括三氟乙酸；步驟c中，所述載體包括cmc，所述緩沖溶劑包括mes，所述縮合溶劑包括dmso，所述活化試劑包括nhs，所述縮合試劑包括edci。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述有效治療潰瘍性結(jié)腸炎納米粒的制備方法，其特征在于，步驟a中，所述二硒化合物、所述酰胺反應(yīng)溶劑、所述輔助溶劑、所述n-α-芴甲氧羰基-n-epsilon-叔丁氧羰基-d-賴氨酸、所述催化劑、所述縮合劑的質(zhì)量體積比包括5～10g：100～200ml：5～10ml：15～20g：2～4g：5～15g；步驟b中，所述去保護溶劑中與所述去保護劑的體積比包括1：4；步驟c中，所述緩沖溶劑與所述縮合溶劑的體積比包括5：1，所述緩沖溶劑的濃度包括50～100mm，所述載體溶液中所述載體的濃度包括1wt％，所述活化試劑的濃度包括50～10...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊瓊瓊，梁婉琪，戴文莉，蔡沃祺，張薄博，
申請(專利權(quán))人：汕頭大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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