【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體涉及一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡及在提高成纖維細胞功能性上的應用。
技術介紹
1、細胞外囊泡(extracellularvesicles，evs)是細胞分泌到細胞外環境中的雙層膜球狀結構，通過內體途徑和非內體途徑分泌。研究者們通常將細胞外囊泡分為三類：外泌體、微囊泡和凋亡小體，外泌體的直徑為30-150nm，微囊泡的直徑為150-1000nm，凋亡小體的直徑為1-5μm。細胞外囊泡可攜帶多種生物分子，如蛋白質、脂質、核酸和代謝產物，并作為細胞間通訊手段，影響目標細胞。evs作為細胞間通訊的重要媒介，近年來在攜帶mrna方面的研究取得了顯著進展。evs不僅能夠攜帶蛋白質、脂質和代謝產物，還能包裹并傳遞mrna分子。這一特性使得evs在基因表達調控、疾病診斷和治療等領域展現出廣闊的應用前景。目前的研究表明，細胞外囊泡攜帶的mrna可以在接收細胞中翻譯成功能性蛋白質，進而影響接收細胞的生理狀態。因此，探索細胞外囊泡在攜帶mrna方面的潛力，不僅推動了基礎生物學研究的發展，還為開發新型診斷和治療手段提供了重要的科學依據。真皮成纖維細胞分為2個亞群，即乳頭狀成纖維細胞和網狀成纖維細胞，他們主要的功能是合成膠原蛋白，彈性蛋白和蛋白多糖以保持皮膚及其功能的完整，并參與創傷修復。在皮膚衰老的過程中，以光致衰老為例，紫外線誘導皮膚氧化應激增強，激活tnf-α和nf-κb信號通路，使mmp上調而導致膠原蛋白降解衰老和并抑制tgfbeta使得新膠原的合成減少，以至皮膚發生衰老。
2、整合素是一類由兩個亞單位組成
3、irgd多肽在最近的研究中發現，成纖維細胞內的nrp-1與在成纖維細胞中有著高表達，且在腫瘤的轉移上發揮作用，總結出irgd多肽能與納米載體結合有效的靶向具有整合素的細胞，因此在未來的治療研究有著重要的意義
4、ms2衣殼蛋白可以與ms2噬菌體的rna中的結構動態區域相互作用，與ms莖環特異性結合，因此我們可以將目的rna上帶上ms莖環與ms2衣殼蛋白特異性結合并富集。
技術實現思路
1、本專利技術針對現有技術的不足，提供一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡來解決現有技術中無法特異性靶向成纖維細胞以及mrna載量較少的問題。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用的技術方案如下：
3、一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡，同時攜帶irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣殼蛋白。
4、優選地，所述工程化囊泡能夠將mrna安全地且高效率地遞送至受體細胞。
5、優選地，所述工程化囊泡通過hek-293t細胞分泌。
6、優選地，所述irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣殼蛋白在hek-293t細胞中同時表達。
7、一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡，包括以下步驟提取得到：
8、步驟(1)、構建目的質粒；
9、選取質粒載體：pcdna3.1-ha-irgd-10-lamp2b質粒和pcdna3.1-10-lamp2b-ha質粒；
10、1.1獲取目標基因；
11、根據構建的質粒需求以及引物設計原則，設計出相應的引物，質粒的引物的dna序列和lamp2b膜蛋白、irgd多肽、ms2衣殼蛋白的氨基酸序列如下：
12、pcdna3.1-ha-irgd-10-lamp2b質粒的上游引物序列如seq?id?no.1所示：
13、tgtcgtggtgacaaaggtcccgactgtggcagtggatctggatccggt?gg；
14、pcdna3.1-ha-irgd-10-lamp2b質粒的下游引物序列如seq?id?no.2所示：
15、ggacctttgtcaccacgacatccactgcccatagtcgagttacctgc；pcdna3.1-10-lamp2b-ha質粒的上游引物序列如seq?id?no.3所示：
16、ggcagtggaggcagtggatctggatccggtgg；
17、pcdna3.1-10-lamp2b-ha質粒的下游引物序列如seq?id?no.4所示：
18、tccactgcctccactgcccatagtcgagttacctgc；
19、lamp2b膜蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.5所示：
20、mnftvryettnktyktvtisdhgtvtyngsicgddqngpkiavqfgpgfswianftkaastysidsvsfsyntgdnttfpdaedkgiltvdellairiplndlfrcnslstlekndvvqhywdvlvqafvqngtvstneflcdkdktstvaptihttvpsptttptpkekpeagtysvnngndtcllatmglqlnitqdkvasvininpntthstgscrshtallrlnsstikyldfvfavknenrfylkevnismylvngsvfsiannnlsywdaplgssymcnkeqtvsvsgafqintfdlrvqpfnvtqgkystaqecsldddtilipiivgaglsgliiviviayvigrrksyagyqtl；
21、irgd多肽的氨基酸序列如seq?id?no.6所示：
22、crgdkgpdc；
23、ms2衣殼蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.7所示：
24、asnftqfvlvdnggtgdvtvapsnfangvaewissnsrsqaykvtcsvr?qssaqkrkytikvevpkvatqtvggvelpvaawrsylnmeltipifatnsdcel?ivkamqgllkdgnpipsaiaansgiy；
25、1.2重組反應；
26、1.3重組反應產物轉化、涂板和挑取單克隆；
27、1.4質粒提取；
28、步驟(2)、細胞轉染；
29、步驟(3)、囊泡提取。
30、優選地，一種如上所述的攜帶mrna靶向的工程化囊泡本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種攜帶mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，同時攜帶iRGD多肽、lamp2b膜蛋白、MS2衣殼蛋白。
2.根據權利要求1所述的一種攜帶mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述工程化囊泡通過HEK-293T細胞分泌。
3.根據權利要求2所述的一種攜帶mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述iRGD多肽、lamp2b膜蛋白、MS2衣殼蛋白在HEK-293T細胞中同時表達。
4.根據權利要求1所述的一種攜帶mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，包括以下步驟提取得到：
5.根據權利要求4所述的一種攜帶mRNA靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述步驟(1)中獲取目標基因時，還包括PCR反應；
6.一種如根據權利要求1-5任一項所述的攜帶mRNA靶向的工程化囊泡在提高成纖維細胞功能性上的應用。
7.根據權利要求6所述的攜帶mRNA靶向的工程化囊泡在提高成纖維細胞功能性上的應用，其特征在于，所述利用攜帶mRNA靶向的工程化囊泡提高成纖維細胞功能性的方法，包括以下步驟：
8.根據權利要求6所述的攜帶mR
...【技術特征摘要】
1.一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，同時攜帶irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣殼蛋白。
2.根據權利要求1所述的一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述工程化囊泡通過hek-293t細胞分泌。
3.根據權利要求2所述的一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，所述irgd多肽、lamp2b膜蛋白、ms2衣殼蛋白在hek-293t細胞中同時表達。
4.根據權利要求1所述的一種攜帶mrna靶向的工程化囊泡，其特征在于，包括以下步驟提取得到：
5.根據權利要求4所述的一種攜帶mrna靶...
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