【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物藥抗體制備領(lǐng)域，特別涉及一種靶向igm的鯊魚納米抗體的制備方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、免疫球蛋白m（igm）在疾病干預(yù)中發(fā)揮著重要作用，igm可以改善腎臟病理學(xué)和器官損傷的減少，在癌癥治療中，其與癌前細(xì)胞的識別和清除有關(guān)，未發(fā)現(xiàn)天然糖基的天然igm可被用作診斷和預(yù)后標(biāo)志物，尤其是針對于乳腺癌。igm還是診斷各種疾病的靶分子，一些以低丙種免疫球蛋白為特征的遺傳性免疫缺陷病，如高igm綜合征疾病和常見變異型免疫缺陷（cvid），可以通過測定血清免疫球蛋白（ig）類水平來診斷，其特征表現(xiàn)為igm水平異常高，以及血清中iga和igg的含量在血清中發(fā)生變化，故檢測iga、igm和igg在血清中的變化，可將其與其他原發(fā)性免疫缺陷病區(qū)分開來。ig檢測可以在血清學(xué)實(shí)驗(yàn)中通過檢測抗體來判斷是否感染，由于igm是機(jī)體發(fā)生體液免疫應(yīng)答時(shí)首先產(chǎn)生的抗體，其檢測對于急性感染的早期診斷尤其重要，一些病毒，如戊型肝炎病毒、巨細(xì)胞病毒、麻疹病毒、腺病毒，對上述病毒進(jìn)行igm含量的檢測可以確定感染狀態(tài)并及時(shí)進(jìn)行正確診斷。酶聯(lián)免疫吸附法（elisa）等方法通常通過直接或間接監(jiān)測igm含量水平來檢測免疫應(yīng)答。
2、傳統(tǒng)抗體在診斷和治療領(lǐng)域已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用，但盡管有許多成功的例子，但其也有很多局限性，如其尺寸大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、生產(chǎn)耗時(shí)長。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，重組抗體工程可以將常規(guī)的igg抗體減小到它們的最小抗原結(jié)合片段，不僅可以降低重組蛋白的生產(chǎn)成本，還可以減少fc的脫靶效應(yīng)。但這些形式表現(xiàn)出了較差的穩(wěn)定性、甚至抗原活性喪失。基于此，
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是提供了一種靶向igm的鯊魚納米抗體的制備方法和應(yīng)用，本專利技術(shù)通過篩選得到了全新的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e，其對igm具有高親和力和高特異性。
2、本專利技術(shù)保護(hù)靶向igm的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e，其氨基酸序列如seq?idno.1－seq?id?no.3所示。
3、進(jìn)一步的，所述鯊魚納米抗體包含框架區(qū)、互補(bǔ)決定區(qū)和高變區(qū)；
4、所述框架區(qū)為fr1、fr2、fr3a、fr3b和fr4；
5、所述fr1的氨基酸序列如seq?id?no.4－seq?id?no.6所示；
6、所述fr2的氨基酸序列如seq?id?no.7－seq?id?no.9所示；
7、所述fr3a的氨基酸序列如seq?id?no.10－seq?id?no.12所示；
8、所述fr3b的氨基酸序列如seq?id?no.13－seq?id?no.15所示；
9、所述fr4的氨基酸序列如seq?id?no.16－seq?id?no.18所示；
10、所述互補(bǔ)決定區(qū)為cdr1和cdr3；
11、所述cdr1的氨基酸序列如seq?id?no.19－seq?id?no.21所示；
12、所述cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.22－seq?id?no.24所示；
13、所述高變區(qū)為hv2和hv4；
14、所述hv2的氨基酸序列如seq?id?no.25－seq?id?no.27所示；
15、所述hv4的氨基酸序列如seq?id?no.28－seq?id?no.30所示。
16、本專利技術(shù)還保護(hù)編碼所述鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e的基因，所述基因的核苷酸序列為seq?id?no.31－seq?id?no.33。
17、本專利技術(shù)又保護(hù)一種重組載體，所述重組載體含有上述編碼基因。
18、本專利技術(shù)又保護(hù)一種重組菌株，所述重組菌株含有上述編碼基因或者所述的重組載體。
19、本專利技術(shù)還保護(hù)所述的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e在制備igm蛋白靶向劑中的應(yīng)用。
20、本專利技術(shù)還保護(hù)所述的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e在病毒檢測試劑盒中的應(yīng)用。
21、本專利技術(shù)的有益效果：
22、1、本專利技術(shù)制備得到的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e分子量與傳統(tǒng)的單克隆抗體相比較更小，只有15?kda左右。
23、2、本專利技術(shù)制得的鯊魚納米抗體穩(wěn)定性高、理化穩(wěn)定性強(qiáng)，在極端環(huán)境中仍穩(wěn)定（高溫、強(qiáng)酸強(qiáng)堿），且與igm具有良好的親和力和特異性。
24、3、本專利技術(shù)制得的鯊魚納米抗體可作為elisa檢測試劑盒與膠體金法檢測試劑盒的原料等作用于疾病的早期診斷。
25、4、本專利技術(shù)選擇條紋斑竹鯊作為抗體制備的模式動物來進(jìn)行vnar的制備，其不屬于瀕危鯊魚種類，且體型小、易于人工繁養(yǎng)，適合用于抗體開發(fā)。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種靶向IgM的鯊魚納米抗體1-1D、1-3G、1-5E，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?IDNo.1－SEQ?ID?No.3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯊魚納米抗體1-1D、1-3G、1-5E，其特征在于，所述鯊魚納米抗體包含框架區(qū)、互補(bǔ)決定區(qū)和高變區(qū)；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯊魚納米抗體1-1D、1-3G、1-5E，其特征在于，編碼基因的核苷酸序列為SEQ?ID?No.31－SEQ?ID?No.33。
4.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體含有權(quán)利要求3所述的基因。
5.一種重組菌株，其特征在于，所述重組菌株含有權(quán)利要求3所述的基因或者權(quán)利要求4所述的重組載體。
6.權(quán)利要求1所述的鯊魚納米抗體1-1D、1-3G、1-5E在制備IgM蛋白靶向劑中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1所述的鯊魚納米抗體1-1D、1-3G、1-5E在病毒檢測試劑盒中的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向igm的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e，其特征在于，其氨基酸序列如seq?idno.1－seq?id?no.3所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e，其特征在于，所述鯊魚納米抗體包含框架區(qū)、互補(bǔ)決定區(qū)和高變區(qū)；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯊魚納米抗體1-1d、1-3g、1-5e，其特征在于，編碼基因的核苷酸序列為seq?id?no.31－se...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：顧玉超，陳進(jìn)，崔靜婷，王倩倩，郭新晨，趙晟凱，
申請(專利權(quán))人：青島科技大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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