【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，具體涉及一種具有降尿酸活性的四肽lilp及其應用。
技術介紹
1、尿酸（uricacid）是嘌呤代謝的最終產物，主要在肝臟中生成。為維持人體血尿酸的平衡，大約75%的尿酸通過腎臟排泄，剩下25%通過腸道排泄。尿酸的過多產生和過少排泄均會引起高血尿酸，長此以往便會導致高尿酸血癥。當人體血尿酸含量過飽和時，尿酸鹽（主要是msu晶體）便會在血液中析出，msu晶體在關節和其他身體組織（如滑囊和肌腱）中的沉積會引起人體自發的免疫反應，導致局部炎癥，這一伴隨著劇烈但是間歇性的疼痛的關節炎就是痛風。
2、目前臨床的降尿酸藥物主要分為3類：減少尿酸生成的藥物，如別嘌呤醇和非布司他；促進尿酸排泄的藥物，如丙磺舒和苯溴馬隆；加速尿酸分解的藥物，如聚乙二醇尿酸酶。然而，臨床上長期服用上述三類藥物均會有明顯的毒副作用，如消化道不適（惡心、嘔吐、腹瀉）、皮膚過敏、間歇性頭痛、肌肉疼痛和肝腎毒性等。因此，開發天然、高效且低毒副作用的藥物迫在眉睫。
3、食源性生物活性肽是一類通過酶解、發酵、分離和純化等技術手段從食品原料制備得到的具有有益生理功能的小分子肽類化合物。目前動物來源的生物活性肽研究較多，尤其是許多以海洋動物為原料酶解制備的肽展現出了優良的降尿酸活性，例如wan?h等的研究顯示兩種海參的水解物均在飲食誘導的高尿酸血癥小鼠模型中嫩鞏固抑制尿酸生物合成并促進尿酸排泄，從而緩解高尿酸血癥表型（comparisons?of?protective?effectsbetween?two?sea?cucumber?
4、天然來源的小分子生物活性肽具有較好的生物利用度，易被人體代謝和清除，毒副作用低，有潛力開發成為天然、安全且高效的新型降尿酸產品，因此，挖掘更多高效的小分子生物活性肽是本領域技術人員需要解決的技術問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種具有降尿酸活性的天然小分子生物肽，應用于開發安全且高效的新型降尿酸產品。
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、本專利技術通過體外模擬胃腸消化金槍魚肽和lc-ms/ms鑒定消化前后穩定存在的肽段，采用分子對接技術探究肽段與黃嘌呤氧化酶（xod）蛋白的相互作用，從中篩選出一個候選肽段lilp，其氨基酸序列為leu-ile-leu-pro。進一步人工合成四肽lilp，發現在高尿酸細胞模型中該四肽表現出高效的降尿酸活性。
4、因此，本專利技術提供了一種具有降尿酸活性的四肽lilp，所述四肽lilp的氨基酸序列為leu-ile-leu-pro。
5、本專利技術還提供了所述四肽lilp的制備方法，所述四肽lilp可以通過固相合成法制備得到，具體方法包括：采用采用fmoc固相合成策略，以fmoc保護的氨基酸為原料，選用wang樹脂作為固相載體，依次脯氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、亮氨酸殘基，使肽鏈從c端向n端延伸，固相合成四肽lilp。
6、所述四肽lilp也可以通過酶解金槍魚肉獲得。進一步的，以金槍魚背腹肉為原料，利用中性蛋白酶進行酶解，酶解溫度為30-60℃，反應體系ph控制在7-8，酶解時間為4-6?h。更進一步的，酶解條件為中性蛋白酶（500?u/g，ph=7）于50°c酶解5?h，得到多肽酶解液，所述多肽酶解液中含有所述四肽lilp。
7、本專利技術提供了所述四肽lilp在制備降尿酸的藥物或輔助降尿酸的食品中的應用。本專利技術提供的四肽lilp可以顯著降低高尿酸細胞模型中的尿酸含量，可以將其應用于開發治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物，或者輔助降低尿酸水平的食品。
8、所述高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂引起的代謝異常綜合征，通常指空腹血尿酸值長期高于臨界值（成年女性>6.0mg/dl，成年男性>7.0mg/dl，青少年>5.5mg/dl）。所述痛風是一種復雜的關節炎，表現為間歇性的疼痛的發作，是由人體對沉積的單鈉尿酸晶體天然免疫反應引起的。
9、進一步的，所述藥物或食品的作用包括：抑制黃嘌呤氧化酶活性、降低尿酸重吸收轉運體的mrna表達。
10、機理研究表明，本專利技術提供的四肽lilp具有高效的黃嘌呤氧化酶抑制活性，體外xod抑制活性ic50值為10.18±1.35?mmol/l，可以通過抑制黃嘌呤氧化酶活性減少肝臟代謝嘌呤生成尿酸，實現減少體內尿酸生成；同時所述四肽lilp能夠顯著降低尿酸重吸收轉運體的mrna表達，通過減少腎臟尿酸重吸收，增加尿酸排泄。本專利技術提供的四肽lilp可通過多靶點作用減少尿酸在體內的沉積，達到緩解高尿酸血癥和/或痛風的目的。
11、更進一步的，所述尿酸重吸收轉運體包括腎臟細胞中的葡萄糖轉運蛋白9和尿酸轉運蛋白1。腎近曲小管上皮細胞中的葡萄糖轉運蛋白9和尿酸轉運蛋白1負責尿酸重吸收，本專利技術提供的四肽lilp可顯著降低葡萄糖轉運蛋白9和尿酸轉運蛋白1的表達，減少腎臟對尿酸重吸收。
12、進一步的，所述藥物為緩解哺乳動物高尿酸血癥和/或痛風的藥物。所述哺乳動物可以為但不限于人類。
13、具體的，本專利技術提供了一種治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物組合物，所述藥物組合物包括有效作用劑量的氨基酸序列為leu-ile-leu-pro的四肽lilp和藥學上可接受的載體。
14、所述藥物組合物以四肽lilp為主要活性成分，添加藥劑學上可接受的載體制成，可按照藥劑學上記載的制劑制備方法制成制劑。本專利技術提供的藥物組合物中四肽lilp可以作為唯一的發揮降尿酸作用的活性成分，也可以與其他具有調節尿酸含量作用的活性成分進行復配，比如目前被報道的具有降尿酸活性的植物提取物（杜仲、葵花等）、維生素（例如維生素b）、多酚類物質、蛋白肽等。
15、所述藥學上可接受的載體包括：填充劑、潤濕劑、崩解劑、粘合劑或潤滑劑中的一種或多種。
16、進一步的，所述藥物組合物的制劑形式可以為但不限于口服制劑。本專利技術提供的四肽lilp為金槍魚肉的酶解產物，經胃腸道消化后仍能穩定存在。
17、所述藥物組合物可以制備為但不限于口服液、膠囊、微膠囊粉、片劑、顆粒或者乳液。具體給藥本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種具有降尿酸活性的四肽LILP，其特征在于，所述四肽LILP的氨基酸序列為Leu-Ile-Leu-Pro。
2.如權利要求1所述的四肽LILP的制備方法，其特征在于，所述四肽LILP通過固相合成法制備得到；或者通過酶解金槍魚肉獲得。
3.如權利要求1所述的四肽LILP在制備降尿酸的藥物或輔助降尿酸的食品中的應用。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物或食品的作用包括：抑制黃嘌呤氧化酶活性、降低尿酸重吸收轉運體的mRNA表達。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述尿酸重吸收轉運體包括腎臟細胞中的葡萄糖轉運蛋白9和尿酸轉運蛋白1。
6.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物為緩解哺乳動物高尿酸血癥和/或痛風的藥物。
7.一種治療高尿酸血癥和/或痛風的藥物組合物，其特征在于，包括有效作用劑量的氨基酸序列為Leu-Ile-Leu-Pro的四肽LILP和藥學上可接受的載體。
8.如權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥學上可接受的載體包括：填充劑、潤濕劑、崩解劑、粘合
9.如權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物的制劑形式為口服制劑。
10.一種輔助降低尿酸水平的食品，其特征在于，包括作為活性成分的氨基酸序列為Leu-Ile-Leu-Pro的四肽LILP和食品學上可接受的輔料。
...【技術特征摘要】
1.一種具有降尿酸活性的四肽lilp，其特征在于，所述四肽lilp的氨基酸序列為leu-ile-leu-pro。
2.如權利要求1所述的四肽lilp的制備方法，其特征在于，所述四肽lilp通過固相合成法制備得到；或者通過酶解金槍魚肉獲得。
3.如權利要求1所述的四肽lilp在制備降尿酸的藥物或輔助降尿酸的食品中的應用。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物或食品的作用包括：抑制黃嘌呤氧化酶活性、降低尿酸重吸收轉運體的mrna表達。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述尿酸重吸收轉運體包括腎臟細胞中的葡萄糖轉運蛋白9和尿酸轉運蛋白1。
6.如權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馮鳳琴，杜鵑，王晶，趙敏潔，吳俊豪，
申請(專利權)人：杭州康源食品科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。