【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫學分子生物學，具體涉及降低klhl22基因表達量或抑制klhl22蛋白作用的產品及其在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用。
技術介紹
1、代謝相關脂肪性肝病（metabolic?dysfunction?associated?steatotic?liverdisease，masld），曾經被稱作非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic?fatty?liverdisease，nafld），是一組主要由肝細胞內異位脂質沉積引起的病理性疾病。masld全球患病率約為30%，截至2019年，估計全球約有16.6億人患有masld，已成為全球最常見的肝臟疾病。
2、肝臟是脂質代謝的重要器官，作為脂質平衡的中央調節器，肝臟負責協調新生脂肪酸的合成，它們的輸出和隨后的再分配到其他組織，以及它們作為能量底物的利用，這些過程受激素、核受體和轉錄因子之間復雜的相互作用和調節，使肝脂質穩態受到嚴格控制。這些途徑中的一種或多種途徑的破壞可能會導致脂肪在肝臟內的沉積和隨后的masld的發展，肝臟脂質積累是由于脂質獲取和脂質代謝之間的不平衡，主要通過四個主要途徑進行調節：循環脂質攝取、脂肪酸從頭合成（dnl）、脂肪酸氧化（fao）和極低密度脂蛋白（vldl）中的脂質外排。然而，肝臟內脂質病理性聚集的分子機制尚未完全闡明。masld一旦發展為終末期肝病，治療效果就會受到限制，可能需要肝移植。早期發現和干預至關重要。
3、masld管理的基石是生活方式干預，包括減少能量攝入和加強體育鍛煉，它可以減少代謝超載
4、蛋白泛素化是蛋白質翻譯后修飾的一種，是指將泛素分子添加到底物蛋白質上，泛素化最關鍵的蛋白是e3泛素連接酶。蛋白質泛素化可以參與調控dna損傷修復、細胞內吞、蛋白質運輸與降解等。在疾病發生發展中起著極其重要的作用，針對泛素化修飾靶點的藥物開發也在不斷受到重視。kelch樣蛋白22（kelch-like?protein22，klhl22）是cullin3ring結構域家族e3泛素連接酶的特異性蛋白適配器，由634個氨基酸組成，共有3個結構域，分別是n端btb、中間的back和c端kelch重復序列。klhl22通過n端的btb結構域與cullin3ring?e3泛素連接酶結合，通過c端的kelch重復序列結構域與底物蛋白結合，而cullin3-ring?通過與rbx1結合連接e2泛素結合酶，通過酶促級聯放大作用，最終使底物蛋白發生泛素化修飾。klhl22能與特定底物蛋白結合的特性使它成為極具吸引力的干預靶點。
技術實現思路
1、有鑒于上述現有技術，本專利技術研究發現，全身klhl22基因敲除小鼠（klhl22-/-）以及肝臟特異性klhl22基因敲除小鼠（aav-shklhl22）能抵抗高脂飲食誘導的代謝相關脂肪性肝病肝臟脂質沉積。細胞實驗表明干擾肝細胞klhl22的表達可以減少油酸誘導的肝細胞脂質沉積。本專利技術還發現與對照組小鼠相比，klhl22-/-?和aav-shklhl22小鼠葡萄糖耐量顯著改善，且aav-shklhl22小鼠的胰島素敏感性顯著增加。
2、基于以上研究結果，本專利技術的首要目的在于提供klhl22基因或其蛋白作為靶點的如下應用：
3、1）降低klhl22基因表達量的產品在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用，klhl22基因的cds序列如seq?id?no.1所示；所述的降低klhl22基因表達量的產品包括：敲除、突變失活、抑制klhl22基因的試劑中的至少一種。
4、進一步地，
5、所述的敲除klhl22基因的試劑包括：敲除klhl22基因的載體；所述的突變失活klhl22基因的試劑包括：突變失活klhl22基因的載體；所述的抑制klhl22基因的試劑包括：抑制klhl22基因表達的sirna。
6、更進一步地，
7、所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
8、2）抑制klhl22蛋白作用的產品在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用，
9、klhl22蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述的抑制klhl22蛋白作用的產品包括：抑制klhl22蛋白活性的抑制劑、阻斷klhl22與其他蛋白相互作用的抑制劑中的至少一種。
10、進一步地，
11、所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
12、本專利技術的次要目的是提供klhl22基因或其蛋白作為靶點的如下產品：
13、1）降低klhl22基因表達量的產品，是預防或治療代謝相關脂肪性肝病的藥物，包括：敲除、突變失活、抑制klhl22基因的試劑中的至少一種，klhl22基因的cds序列如seq?idno.1所示。
14、進一步地，
15、所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
16、2）抑制klhl22蛋白作用的產品，是預防或治療代謝相關脂肪性肝病的藥物，包括：抑制klhl22蛋白活性的抑制劑、阻斷klhl22與其他蛋白相互作用的抑制劑中的至少一種，klhl22蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
17、進一步地，
18、所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
19、本專利技術中，klhl22基因的核苷酸序列參見genbank:nc_000082.7。klhl22基因或其蛋白的缺失、抑制或失活klhl22可采用本領域常規手段來實現，如敲除klhl22基因的載體、使klhl22基因突變失活的載體和/或抑制klhl22蛋白活性的抑制劑、阻斷klhl22與其他蛋白相互作用的抑制劑等等。
20、本專利技術通過全身或者肝臟特異性敲除klhl22基因，發現klhl22基因缺失小鼠肝臟脂質沉積減少，并能抵抗高脂飲食誘導的胰島素抵抗。本專利技術還在細胞水平發現干擾klhl22的表達能減少油酸誘導的肝細胞內脂質沉積。本專利技術發現抑制klhl22蛋白可作為臨床代謝相關脂肪性肝病的治療靶點，為新型抗代謝相關脂肪性肝病藥物的研發提供新思路。
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1.?降低KLHL22基因表達量的產品在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用，其特征在于，KLHL22基因的CDS序列如SEQ?ID?NO.1所示；所述的降低KLHL22基因表達量的產品包括：敲除、突變失活、抑制KLHL22基因的試劑中的至少一種。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的敲除KLHL22基因的試劑包括：敲除KLHL22基因的載體；所述的突變失活KLHL22基因的試劑包括：突變失活KLHL22基因的載體；所述的抑制KLHL22基因的試劑包括：抑制KLHL22基因表達的siRNA。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
4.抑制KLHL22蛋白作用的產品在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用，KLHL22蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；所述的抑制KLHL22蛋白作用的產品包括：抑制KLHL22蛋白活性的抑制劑、阻斷KLHL22與其他蛋白相互作用的抑制劑中的至少一種。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，
6.降低KLHL22基因表達量的產品，其特征在于，是預防或治療代謝相關脂肪性肝病的藥物，包括：敲除、突變失活、抑制KLHL22基因的試劑中的至少一種，KLHL22基因的CDS序列如SEQ?ID?NO.1所示。
7.根據權利要求6所述的產品，其特征在于，所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
8.?抑制KLHL22蛋白作用的產品，其特征在于，是預防或治療代謝相關脂肪性肝病的藥物，包括：抑制KLHL22蛋白活性的抑制劑、阻斷KLHL22與其他蛋白相互作用的抑制劑中的至少一種，KLHL22蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
9.根據權利要求8所述的產品，其特征在于，所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
...【技術特征摘要】
1.?降低klhl22基因表達量的產品在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用，其特征在于，klhl22基因的cds序列如seq?id?no.1所示；所述的降低klhl22基因表達量的產品包括：敲除、突變失活、抑制klhl22基因的試劑中的至少一種。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的敲除klhl22基因的試劑包括：敲除klhl22基因的載體；所述的突變失活klhl22基因的試劑包括：突變失活klhl22基因的載體；所述的抑制klhl22基因的試劑包括：抑制klhl22基因表達的sirna。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物包括：增強胰島素敏感性的藥物。
4.抑制klhl22蛋白作用的產品在制備預防或治療代謝相關脂肪性肝病藥物中的應用，klhl22蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述的抑制klhl22蛋白作用的產品包括：抑制klhl22蛋白活性的抑制劑、阻斷klhl...
【專利技術屬性】
技術研發人員：胡芳，劉黎黎，程蕊棠，張峰，
申請(專利權)人：中南大學湘雅二醫院，
類型：發明
國別省市：
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