包含抗體替代輕鏈序列的構(gòu)建體和文庫制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及包含抗體替代輕鏈序列的構(gòu)建體和文庫。具體地，本發(fā)明專利技術(shù)涉及包含ＶｐｒｅＢ序列（任選地，與另一多肽諸如例如抗體重鏈可變域序列配偶的）的構(gòu)建體及含有其的文庫。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】包含抗體替代輕鏈序列的構(gòu)建體和文庫專利
本專利技術(shù)涉及包含抗體替代輕鏈序列的構(gòu)建體和文庫。具體地，本專利技術(shù)涉及包含VpreB序列(任選地，與另一多肽諸如例如抗體重鏈可變域序列配偶的)的構(gòu)建體及含有其的文庫。
技術(shù)介紹
由B淋巴細(xì)胞所生成的抗體(Ig)分子是由重(H)鏈和輕(L)鏈構(gòu)成的。H和L鏈的氨基端域的氨基酸序列是可變的(Vh和Vl),尤其在形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的三個(gè)高變區(qū)(CDR1、 CDR2、 CDR3)處。H和L鏈的裝配物通過L鏈的恒定區(qū)(CO和重鏈的第 一恒定區(qū)(Cm)之間的二硫鍵及通過VH和Vt域之間的非共價(jià)相互作用而穩(wěn)定化。在人和許多動(dòng)物(諸如小鼠)中，編碼抗體H和L鏈的基因是通過編碼V區(qū)各部分的基因片段的逐步體細(xì)胞重排而裝配的。B淋巴細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)階段以Ig基因基因座的重排狀態(tài)表征(參見例如Melchers， R和Rolink, A.，《B-Lymphocyte Development and Biology》，Paul,W.E.編,1999, Lippincott,Philadephia)。B細(xì)胞的前體(前B細(xì)胞)已經(jīng)在骨髓中凈皮鑒定為這樣的淋巴細(xì)胞，它們生成p重鏈，但是不是完全形成的輕鏈，而是表達(dá)一組分別稱為VpreB(l-3)和入5的B譜系特異性基因。人VpreBl的主要同等型(CAG30495)是一種長145個(gè)氨基酸的多肽(SEQIDNO:l)。它具有IgV域樣的結(jié)構(gòu)，但是缺乏典型V域的最后的(3鏈((37)，并且具有與任何其它蛋白質(zhì)沒有顯示序列同源性的羧基端末端。VpreB2具有數(shù)種同等型，包括142個(gè)氨基酸的小鼠VpreB2多肽(P13373;SEQIDNO:2)、和長171個(gè)氨基酸的小鼠VpreB2序列剪接變體(CAA019641 SEQ ID NO: 3)。VpreBl和VpreB2序列已經(jīng)披露于EP 0 269 127和美國專利No. 5,182,205;Collins等，Genome Biol. 5(10):R84 (2004);及Hollins等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA 86(14):5552-5556 (1989)。人VpreB3的主要同等型(SEQ ID NO: 4)是一種7長123個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)(CAG30496),其披露于Collins等，Genome Biol.5(10):R84 (2004)。VpreB(l-3)與另一種蛋白質(zhì)人5非共價(jià)結(jié)合。人X5是一種209個(gè)氨基酸的多肽(CAA01962; SEQ ID NO: 5),它攜帶與抗體輕鏈具有強(qiáng)烈同源性的Ig C域樣結(jié)構(gòu)和朝向其氨基端末端的兩個(gè)功能上獨(dú)特的區(qū)域，其中之一與W或的(37鏈顯示了強(qiáng)烈的同源性。人X5樣蛋白具有213個(gè)氨基酸(NP—064455; SEQ IDNO: 6),而且與抗體人輕鏈恒定區(qū)顯示約84%的序列同一性。關(guān)于進(jìn)一步的詳情，參見下列綜述文章Karasuyama等，Adv. Immunol.63:1-41 (1996); Melchers等，Immunology Today 14:60-68 (1993);及Melchers,Pro" Natl. Acad. Sci. USA 96:2571-2573 (1999)。VpreB和X5多肽一起形成非共價(jià)結(jié)合的Ig輕鏈樣結(jié)構(gòu)，其稱為替代輕鏈(surrogate light chain)或j艮專至鏈(pseudo light chain)。在早期前B纟田月包表面上，替代輕鏈與膜結(jié)合Ig p重鏈以二硫一建連接，并與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)物CD79a/CD79b異二聚物結(jié)令以形成B細(xì)胞受體樣結(jié)構(gòu)，所謂的前B細(xì)胞受體(preBCR)。專利技術(shù)概述一方面，本專利技術(shù)涉及包含與異質(zhì)氨基酸序列偶聯(lián)的VpreB序列或X5序列的多肽，其中所述多肽能夠結(jié)合靶物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含VpreB序列，其中VpreB可以是任何天然VpreB,包括人VpreBl (SEQ ID NO: 1)、小鼠VpreB2 (SEQ ID NO:2和3)和人VpreB3 (SEQ ID NO: 4),或其在另 一種哺乳動(dòng)物物種中的同源物，或其片段或變體，只要所述多肽保留結(jié)令靶物的能力。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述異質(zhì)氨基酸序列是X5序列，其可以是任何天然X5序列，或其任何片段或變體，包括SEQIDNO: 5的天然人入5序列、SEQ ID NO: 6的人入5樣序列、及其片段和變體。所述VpreB序列和所述異質(zhì)氨基酸序列(例如人5序列)可以是彼此直接融合的，或者可以是非共價(jià)結(jié)合的。在前一種情況中，優(yōu)選地，所述融合分別在VpreB和X5的CDR3類似區(qū)處或周圍發(fā)生。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述異質(zhì)氨基酸序列是或包含抗體輕鏈可變區(qū)序列。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述抗體輕鏈可變區(qū)序列是在與抗體輕鏈CDR3區(qū)類似的位點(diǎn)處與所述VpreB序列融合的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述融合在抗體輕鏈的CDR3區(qū)和VpreB的CDR3類似區(qū)之間。在所有的實(shí)施方案中，所述抗體輕鏈可以是X鏈或K鏈。在具體的實(shí)施方案中，本文中的多肽可以 進(jìn)一步與包含抗體重鏈可變區(qū)序列(諸如抗體重鏈可變區(qū))或完整抗體重鏈 (包括可變區(qū))的序列結(jié)合。在所述多肽包含X5序列時(shí)，X5可以是任何天然X5，包括SEQIDNO:5的 人人5和SEQ ID NO: 6的人X5樣蛋白，或另 一種哺乳動(dòng)物物種中的同源物，或 其任何片段或變體，只要所述多肽保留結(jié)合靶物的能力。在一個(gè)具體的實(shí)施 方案中，與所述X5序列偶聯(lián)的所述異質(zhì)氨基酸序列是VpreB序列。在本專利技術(shù)的多肽構(gòu)建體中，VpreB和人5序列(若都存在的話)可以是通 過任何手段得到的偶聯(lián)物，包括直接融合、通過接頭序列(例如肽接頭)實(shí) 現(xiàn)的共價(jià)連接、和非共價(jià)結(jié)合。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，VpreB序列和X5序列的融合物通過非共價(jià)結(jié) 合而與抗體重鏈序列偶聯(lián)，以形成二聚體復(fù)合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過VpreB序列、人5序列和抗體重鏈序列的非共 價(jià)結(jié)合而形成三聚體復(fù)合物。在某些實(shí)施方案中，在這些結(jié)構(gòu)(它們也被稱 為"SURROBODYTM變體，，的變異型替代輕鏈結(jié)構(gòu))中，VpreB和人5部分之一 或兩者的特征性尾部(附屬物)可以(但非必須)保留。有可能將別的功能 性(functionality)附著于此類附屬物。另外，在多個(gè)實(shí)施方案中，可以設(shè)計(jì)并 制備有益的附屬融合物，以便改善構(gòu)建體的各種特性，諸如PK和/或效力。在所有的實(shí)施方案中，在存在包含可變區(qū)序列的抗體重鏈時(shí)，4^專利技術(shù)的 多肽和抗體重鏈可變區(qū)序列可結(jié)合相同的或不同的靶物。另一方面，本專利技術(shù)涉及此類多肽的文庫。又一方面，本專利技術(shù)涉及與包含可變區(qū)序列的抗體重鏈或其片段結(jié)合的此 類多肽的文庫。在一個(gè)進(jìn)一步的方面，本專利技術(shù)涉及包含任選地與抗體重鏈可變區(qū)序列結(jié) 合的替代輕鏈序列的集合的文庫。在所有的方面，所述文庫可以處于展示形式，諸如例如噬菌體展示、細(xì) 菌展示、酵母展示、核糖體展示、mRNA展示、DNA^l示、哺乳動(dòng)物細(xì)胞上 的展示、孢子展示、病毒展示、基于蛋白質(zhì)-DNA連接的展示、和微珠展示。本專利技術(shù)進(jìn)一步涉及此類多肽和含有此類多肽的文庫的各種用途，例如用 有重要的治療應(yīng)用。附圖簡(jiǎn)述圖l顯示了人VpreBl (SEQ ID NO本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種多肽，其包含與異質(zhì)氨基酸序列偶聯(lián)的ＶｐｒｅＢ序列和／或λ５序列，其中所述多肽能夠結(jié)合靶物。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：勞倫斯霍羅威茨，徐麗，拉梅什巴特，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：航道生物技術(shù)有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：US[美國]