用于治療增生性疾病的方法和組合物技術

本發明專利技術的特征在于包含中間鏈球菌溶素（ＩＬＹ）蛋白結構域４的肽及其片段，以及這些肽在使癌細胞對基于抗體的抗癌治療敏感化中的用途。ＣＤ５９受體活性與對治療性抗體降低的敏感性有關。期望地，ＩＬＹ結構域４多肽的給予足以抑制ＣＤ５９受體活性，同時避免與全長ＩＬＹ有關的一般毒性。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及增生性疾病的治療。
技術介紹
癌癥是一種疾病，其特點在于異常細胞的無節制生長。癌細胞已克服了在正常細胞(其具有有限的壽命)中施加的對無限生長的屏障。隨著癌細胞的生長持續進行，遺傳改變可以持續存在直到癌細胞已將其自身顯現為追隨更具攻擊性的生長表型。如果不加以治療，則通過淋巴系統或血流，可能接著發生轉移，即癌細胞擴散到身體的更遠區域，破壞健康的組織。CD59是一種糖基磷脂酰肌醇(GPI)連接的膜蛋白，其在一些癌細胞中過表達。通過結合于補體蛋白C8和C9以及防止C9并入和聚合，CD59活性抑制補體的膜攻擊復合物(MAC)的形成。補體是一種用于抗體介導的癌細胞溶解的主要介質。CD59的上調節和高表達被認為是對抗體介導的腫瘤治療的抗性，包括對用于治療B細胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的抗CD20嵌合MAb利妥昔單抗(rituximab)的抗性的主要原因之一。中間鏈球菌溶素(streptococcus?intermedius?intermedilysin，ILY)是一種膽固醇依賴性細胞溶素，其由中間鏈球菌(SI)分泌，長期被懷疑在傳染病的發病機制中起重要作用。SI，一種革蘭氏陽性菌，可以在口腔和內部器官中，尤其是在大腦和肝臟中引起化膿性感-->染。在大腦和肝臟中由于SI的感染可以導致膿腫。ILY屬于膽固醇依賴性細胞溶素家族，作為由肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)分泌的肺炎球菌溶血素，并且僅對人紅細胞而不對其他動物紅細胞顯示特異性溶血活性。
技術實現思路
在一個方面，本專利技術的特征在于一種基本上純的多肽，其包括ILY結構域4多肽。在另一個方面，本專利技術的特征在于一種藥物組合物，其包括基本上純的ILY結構域4多肽和治療性抗體。在另一個方面，本專利技術的特征在于一種用于在需要其的患者(例如人)體內治療增生性疾病(例如，特征在于表達CD59的贅生細胞的增生性疾病)的方法，其中通過給予該患者基本上純的ILY結構域4多肽和治療性抗體。可以同時給予ILY結構域4多肽和治療性抗體、或彼此在14天內給予，所給予的量一起足以治療增生性疾病。在這個方面，可以一起或分開地配制ILY結構域4多肽和治療性抗體。在上述的任何方面，基本上純的ILY結構域4多肽可以包括選自SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2的序列、或其片段。在這個方面，片段的長度可以是至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100個、或更多的氨基酸。片段的長度可以少于531、500、400、300、200、100、50、40、30、20、10個、或更少的氨基酸。在上述的任何方面，治療性抗體可以是，例如，利妥昔單抗、MT201、17-1A、赫賽汀(herceptin)、阿侖單抗(alemtuzumab)、-->lym-1、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、或針對IL-2受體α的單克隆抗體。“患者”是指任何哺乳動物，例如，人、小鼠、豬、馬、狗、貓或大鼠。“中間鏈球菌溶素(intermedilysin)”或“ILY”是指一種多肽，其具有中間鏈球菌溶素多肽的活性。ILY可以純化自中間鏈球菌，或可以重組地產生。對應于ILY的核酸序列的示例性Genbank登錄號是AB029317，以及對應于ILY的多肽序列的示例性Genbank登錄號是BAE16324。ILY還指一種多肽，其與ILY多肽具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、或99％的百分比序列同一性。另外和可替換地，ILY被定義為由在高嚴格條件下雜交于ILY的核酸的核酸編碼的多肽。ILY可以分離自任何中間鏈球菌菌株(例如，菌株1208-1、UNS35、UNS46、以及ATCC27335)。“ILY多肽的結構域4”或“ILY結構域4多肽”是指一種蛋白質，該蛋白質包含具有ILY結構域4多肽的活性的ILY片段。該定義特別排除了Genbank登錄號為BAE16324的全長ILY蛋白。這個術語用來包括這樣的蛋白質，其包含肽序列GALTLNHDGAFVARFYVYWEELGHDADGYETIRSRSWSGNGYNRGAHYSTTLRFKGNVRNIRVKVLGATGLAWEPWRLIYSKNDLPLVPQRNISTWGTTLHPQFEDKVVKDNTD(SEQ?ID?NO：1)或RNIRVKVLGATGLAWEPWRLIYSKNDLPLVPQRNISTWGTTLHPQFEDKVVKDNTD(SEQ?ID?NO：2)、或具有ILY結構域4活性的片段。ILY結構域4多肽還指與SEQ?ID?NO：1或2具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、或99％的百分比序列同一性的多肽。另外和可替換地，ILY結構域4多肽被定義為由在高嚴格條件下雜交于ILY結構域4多肽的核酸的核酸編碼的多肽。這些術語還用來包括在ILY結構域4多肽中的氨基酸殘基的任何保守取代。術語“保-->守取代”是指氨基酸殘基被化學上類似的殘基替換，例如，疏水殘基用另外的疏水殘基替換、帶電殘基用另外的帶電殘基替換等。用于非極性R基團的保守取代的實例是丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、以及色氨酸。用于極性但不帶電R基團的取代的實例是甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、或谷氨酰胺。用于帶負電R基團的取代的實例是天門冬氨酸或谷氨酸。用于帶正電R基團的取代的實例是賴氨酸、精氨酸、或組氨酸。此外，術語ILY結構域4多肽包括用非天然氨基酸進行的保守取代。該術語明確地排除全長ILY。“片段”是指多肽的一部分，其包含，優選地，全長參比多肽(reference?polypeptide)的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或更多。片段可以包含至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、或114個氨基酸或更多。“ILY結構域4活性”是指拮抗人CD59但在本文描述的溶解測定中并不直接引起人紅血細胞(RBC)的顯著溶解的肽的活性。“拮抗人CD59”是指降低人CD59與補體蛋白C8和C9的結合，導致增加的補體的膜攻擊復合物(MAC)的形成。如本文描述的，“蛋白質”或“多肽”或“肽”是指多于兩個的天然或非天然氨基酸的任何鏈，不考慮翻譯后修飾(例如，糖基化或磷酸化)，其構成全部或部分的天然產生或非天然產生的多肽或肽。如在本文中所使用的，天然氨基酸是具有L-構型的天然α-氨基酸，如通常在天然蛋白質中出現的那些。非天然氨基酸是指這樣的氨基酸，其通常并不在蛋白質中出現，例如，具有L構型的天然α-氨基酸的差向異構體，也就是具有非天然D-構型的氨基酸、或其(D，L)-同分異構體混合物；或這樣的氨基酸的同系物，例如，β-氨-->基酸、α，β-氨基酸、α，α-二取代氨基酸、或其中氨基酸側鏈被縮短一個或兩個亞甲基基團或被加長至多達10個碳原子的α-氨基酸，如在直鏈中具有5至10個(包括10個)碳原子的α-氨基鏈烷酸，未取代或取代的芳族(α-芳基或α-芳基低級烷基)，例如，取代的苯丙氨酸或苯甘氨酸。如在本文中所使用的，“本專利技術的肽”是指線性化合物，其包括ILY結構域4多肽的氨基酸序列并且僅包含通過肽鍵本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種基本上純的多肽，包含ＩＬＹ結構域４多肽。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】US 2007-3-30 60/921,1691.一種基本上純的多肽，包含ILY結構域4多肽。2.根據權利要求1所述的基本上純的多肽，其中，所述ILY結構域4多肽包含選自SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2的序列、或其片段，其中，所述片段具有ILY結構域4活性。3.根據權利要求2所述的基本上純的多肽，其中，所述片段的長度為至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、或100個氨基酸。4.根據權利要求2所述的基本上純的多肽，其中，所述片段的長度為少于531、500、400、300、200、100、50、40、30、20、或10個氨基酸。5.根據權利要求1-4中任一項所述的基本上純的多肽，其中，所述基本上純的多肽是融合蛋白。6.根據權利要求1所述的基本上純的多肽，其中，所述ILY結構域4多肽包含選自SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2的序列。7.一種藥物組合物，包含權利要求1-6中任一項所述的基本上純的多肽以及治療性抗體。8.根據權利要求7所述的藥物組合物，其中，所述治療性抗體選自由利妥昔單抗、MT20...

【專利技術屬性】
技術研發人員：秦學斌，胡維國，
申請(專利權)人：哈佛大學校長及研究員協會，
類型：發明
國別省市：US[美國]