具有抗真菌活性的肽制造技術

本發明專利技術涉及抗真菌的和／或抗細菌的肽，特別是從昆蟲（特別是鱗翅昆蟲）中獲得的抗真菌活性的肽。本發明專利技術也提供了使用這些抗真菌肽治療或預防真菌生長的方法，所述方法可以被用于各種目的，例如預防植物的真菌感染，治療動物（特別是人）的真菌感染，和預防食物腐敗變質。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及抗真菌肽和/或抗細菌肽，特別是從昆蟲中獲得的抗真菌肽，所述昆 蟲特別是鱗翅昆蟲(l印idopterans)。本專利技術也提供了應用這些抗真菌肽治療或預防真 菌生長的方法，所述方法被用于各種目的，例如預防植物的真菌感染、治療動物(特別是人 類)的真菌感染、以及預防食物腐敗變質。
技術介紹
真菌是真核細胞生物，它們可以有性或無性地繁殖，并且可以是雙相形式的，其在 自然環境是一種形式，而在感染宿主體內是另一種不同的形式。植物和動物的真菌感染都 是農業、醫學和食品生產/儲存領域的重大問題。因為多種原因，真菌感染正成為主要的關 注點，所述原因包括有限數目的可用的抗真菌劑、耐較老抗真菌劑的物種的發生率的增加、 以及對機會性真菌感染高危的免疫缺陷患者人群的增長。 人類的真菌病被稱作霉菌病。 一些霉菌病是地方性的，其中只在作為真菌的天然 棲息地的地理區域內才會獲得感染。這些地方性霉菌病通常是自限的，并且很少有癥狀。一 些霉菌病主要是機會性的，出現于免疫缺陷患者體內，例如器官移植患者、進行化療的腫瘤 患者、燒傷患者、AIDS患者、或糖尿病酮癥患者。 真菌引起了多種植物疾病，例如但不限于霉變、腐爛、銹病、黑穗病、和枯萎病 等。例如，土壤中所帶有的真菌性植物病原體在農業和園藝業上都造成了巨大的經濟 損失。具體地，立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)是表現出強致病性的主要的真菌性 植物病原體之一，它與多種植物物種及品種的幼苗性疾病及葉疾病例如種子腐爛、根部 腐爛、猝倒病、葉和莖的腐爛有關，造成了巨大的經濟損失。另一個實例是辣椒疫霉菌 (Phytophthorac即sici)，它是廣泛分布的以及高度損害性的土壤傳播真菌性植物病原體， 它造成了辣椒(Capsicum a皿皿m L.)的根部腐爛和根莖腐爛以及葉、果實和莖的氣生性枯 萎病。 植物的真菌感染是潮濕氣候中的特殊問題，它可以成為谷物儲存中的主要問題。 植物可以發育出某些程度的對致病性真菌的天然抗性，但是現代的生長方法、收獲和儲存 系統時常給植物病原體提供良好的環境。 抗真菌劑包括多烯衍生物，例如兩性霉素B和結構相關的化合物如制霉菌素和 匹馬菌素。此外，已經從多種天然存在的來源中分離出了抗真菌肽(DeLucca and Walsh， 1999)。但是，仍需要鑒定出更多的具有能在醫學、農業和工業相關應用中所使用的抗真菌 活性的化合物，以便控制和/或預防真菌生長。
技術實現思路
專利技術人以前鑒定了 moricin肽家族成員具有抗真菌活性(W02005/080423)。這些 以前的研究包括了對大蠟螟(Galleria mellonella)肽組(p印tidome)的詳細分析以鑒定 蠟螟moricin肽。然而，專利技術人還令人吃驚地鑒定了大蠟螟moricin肽，其在結構上與以前描述的moricin相關肽不同。 因此，在本專利技術的第一個部分，提供了基本上純化的肽，其包括選自以下一組的序 列 i)SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列； ii)與SEQ ID NO :1和/或SEQ ID NO :3具有至少85%相同性的氨基酸序列； iii)SEQ ID NO :5所示的氨基酸序列; iv)與SEQ ID NO :5具有至少98%相同性的氨基酸序列；v)SEQ ID NO :7或SEQ ID NO :9所示的氨基酸序列;vi)與SEQ ID NO :7和/或SEQ ID NO :9具有至少64%相同性的氨基酸序列; vii)i)-vi)中任一項的生物活性片段； viii)包含i)到viii)中任一項的氨基酸序列的前體， 其中所述肽或其片段具有抗真菌的和/或抗細菌的活性。 在第一個部分的優選實施方式中，有關的肽與SEQ ID NO :1， SEQ IDN0:3、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7和/或SEQ ID NO :9所示的序列具有至少65% 、更優選地至少70% 、更 優選地至少75 % 、更優選地至少80 % 、更優選地至少85 % 、更優選地至少90 % 、更優選地至 少92%、更優選地至少95%、更優選地至少97%、以及甚至更優選地至少99%相同性。 優選地，SEQ ID NO :1的前體是SEQ ID NO :2， SEQ ID NO :3的前體是SEQ ID NO : 4， SEQ ID NO :5的前體是SEQ ID NO :6， SEQ ID NO :7的前體是SEQ ID NO :8， SEQ ID NO : 9的前體是SEQ ID NO :10。 優選地，可以從昆蟲中純化出所述肽。更優選地，可以從鱗翅昆蟲中純化出所 述肽。更優選地，可以從螟蛾科(Pyralidae)的鱗翅昆蟲中純化出所述肽。更優選地， 可以從蠟螟(Galleria sp.)中純化出所述肽。甚至更優選地，可以從大蠟螟(Galleria mellone 11a)中純化出所述肽。 在特別優選的實施方式中，可以從已經被暴露于真菌或細菌感染的昆蟲中純化 出所述肽。對于鱗翅昆蟲而言，優選地可以從已經暴露于細菌(例如但不限于大腸桿菌 (Escherichia coli)和/或藤黃微球菌(Micrococcusluteus))的末齡幼蟲中純化出所述 肽。 在另一個實施方式中，優選地，肽具有約4. 5kDa到約3. 3kDa之間的分子量。更優 選地，肽具有約3. 9kDa或約3. 8kDa的分子量。 仍在更優選的實施方式中，肽包括N末端的包括螺旋結構的兩親性區域(至少相 對于C末端)、C末端的也包括螺旋結構和酸性殘基的疏水性區域(至少相對于N末端)、 和帶電荷的C末端的尾部。 在更優選的實施方式中，與SEQ ID N0:1和SEQ ID NO :3具有至少85%相同性的 肽包括氨基酸序列 Xaa工Lys Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Ala lie Lys Lys Gly Gly Xaa6 Xaa7 lie Xaa8Xaa9Xaa工o Xaa工i Xaa工2 Xaa工3 Xaa工4 Xaa工s Xaa工6 Ala Xaa Thi* Ala His XaaigXaa^ Xaa^o Xaa^iXa&22 Xa&23 Xa&24 Xaa^s Xaa犯Xaa^7 Xaa^s Xaa^g Xaa30Xaa31 (SEQ ID NO :21)。 優選地，Xaai是Gly、 Pro、 Ala或缺失，更優選地是Gly或缺失； 優選地，Xaa2是Ile、 Val、 Ala、 Leu、 Met或Phe，更優選地是lie或Val ; Asn ; Ser ; 優選地，Xaa3是Pro, Gly， Asn， Gin或His,更優選地是Pro或Asn ; 優選地，Xaa4是11e、Val、Ala、Leu、Met或Phe，更優選地是lie或Val ; 優選地，Xaa5是Lys、 Arg、 Gly、 Pro、 Ala、 Asn、 Gin或His,更優選地是Lys、 Gly或優選地，Xaa6是Gln、 Asn、 His、 Lys或Arg，優選地是Gin或Lys ; 優選地，Xaa7是Il本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種基本上純化的肽，其包括選自以下一組的序列：　　ｉ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１和ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３所示的氨基酸序列；　　ｉｉ）與ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１和／或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３具有至少８５％相同性的氨基酸序列；　　ｉｉｉ）ＳＥＱ　ＩＤＮＯ：５所示的氨基酸序列；　　ｉｖ）與ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５具有至少９８％相同性的氨基酸序列；　　ｖ）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９所示的氨基酸序列；　　ｖｉ）與ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７和／或ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９具有至少６４％相同性的氨基酸序列；　　ｖｉｉ）ｉ）到ｖｉ）中任一項的生物學活性片段；和　　ｖｉｉｉ）包括ｉ）到Ｖｉｉ）中任一項的氨基酸序列的前體，　　其中所述肽或其片段具有抗真菌的和／或抗細菌的活性。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】AU 2007-3-26 2007901600一種基本上純化的肽，其包括選自以下一組的序列i)SEQ ID NO1和SEQ ID NO3所示的氨基酸序列；ii)與SEQ ID NO1和/或SEQ ID NO3具有至少85％相同性的氨基酸序列；iii)SEQ ID NO5所示的氨基酸序列；iv)與SEQ ID NO5具有至少98％相同性的氨基酸序列；v)SEQ ID NO7或SEQ ID NO9所示的氨基酸序列；vi)與SEQ ID NO7和/或SEQ ID NO9具有至少64％相同性的氨基酸序列；vii)i)到vi)中任一項的生物學活性片段；和viii)包括i)到Vii)中任一項的氨基酸序列的前體，其中所述肽或其片段具有抗真菌的和/或抗細菌的活性。2. 權利要求l的肽，其可純化自昆蟲。3. 權利要求1或2的肽，其可純化自螟蛾科的鱗翅昆蟲。4. 權利要求1到3中任一項的肽，其中所述肽具有針對真菌的抗真菌活性，所述真菌選自禾谷嫌抱(Fusarium graminearum)、尖抱嫌抱(Fusarium oxysporum)、狂犬殼二抱(Ascochyta rabiei)禾口十字花禾斗小球腔菌(Leptosphaeria maculans)。5. 權利要求1到4中任一項的肽，其與至少一種其它的多肽/肽序列融合。6. —種分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括選自以下一組的序列i) SEQ ID NO :11-20之一所示的核苷酸序列;ii) 編碼權利要求1到5中任一項的肽的序列；iii) 與SEQ ID NO :11-14中至少一個具有至少85%相同性的核苷酸序列；iv) 與SEQ ID NO :15禾P /或SEQ ID NO :16具有至少98%相同性的核苷酸序列；v) 與SEQ ID NO :17-20中至少一個具有至少64%相同性的核苷酸序列；禾口vi) 在嚴格條件下與i)到v)中任一項雜交的序列。7. 權利要求6的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼具有抗真菌和/或抗細菌活性的肽。8. —種載體，其包括權利要求6或權利要求7的多核苷酸。9. 一種宿主細胞，其包括權利要求6或權利要求7的多核苷酸、或權利要求8的載體。10. 權利要求9的宿主細胞，其是植物細胞。11. 制備權利要求1到5中任一項的肽的方法，所述方法包括在使得編碼所述肽的多核苷酸表達的條件下培育權利要求9或10的宿主細胞，以及回收所表達的肽。12. 特異性結合權利要求1到5任一項的肽的抗體。13. —種組合物，其包括權利要求l到5中任一項的肽，權利要求6或7的多核苷酸，權利要求8的載體，權利要求9或10的宿主細胞和/或權利要求12的抗體，以及一種或多種可接受的載體。14. 一種用于殺死真菌和/或細菌、或抑制真菌和/或細菌生長和/或繁殖的方法，所述方法包括將所述真菌和/或細胞暴露于權利要求1到5中任一項的肽。15. —種轉基因植物，所述植物...

【專利技術屬性】
技術研發人員：PD伊斯特，SE布朗，
申請(專利權)人：聯邦科學技術研究組織，糧食研究發展公司，
類型：發明
國別省市：AU[澳大利亞]