選擇用于局部施用組合物的抗氧化劑的方法技術

用于給皮膚局部施用而配制的含抗氧化劑的組合物和確認組合物抗氧化劑活性的方法。測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的角質(zhì)層中活性氧形成的能力的方法。處理和預防皮膚光損傷的組合物和方法。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及局部施用到皮膚和頭發(fā)上用于防紫外線輻射的組合物。本專利技術還涉及 選擇這種組合物中所含的抗氧化劑的方法。本申請要求2008年1月25日提交的美國臨時申請61/023713和2008年11月14 日提交的美國臨時申請61/114758的優(yōu)先權。
技術介紹
皮膚暴露于紫外線輻射(UVR)會引起統(tǒng)稱為活性氧(reactiveoxygen species, R0S)的自由基和氧化劑(單態(tài)氧、羥基自由基、過氧化氫、過氧化亞硝酸鹽、過氧化物陰離 子等)的形成(Hanson KM, CleggRM. Photochemistry and Photobiology, 2002,76 (1) 57-63 ；Black HS. Photochem, Photobioi. 1987，46，213-221)。UV 引起的 ROS 的形成導致對 脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和 DNA 的氧化破壞(Vile GF and Tyrrell RM. Free Radic. Biol. Med，1995， 18，721-722 ；Chen Q 等，Proc. Natl. Acad. Sd. USA, 1995，92，4337-4341)。在正常情況下，低濃度的ROS被構成皮膚的抗氧化劑屏障所中和。但是，研究 表明，即使低紅疹(suberythermal)劑量的URV也會產(chǎn)生皮膚自身抗氧化劑屏障受不了 的大量R0S，導致可隨意引起氧化的ROS的積聚，這造成皮膚損害的急性(免疫抑制和光 敏性疾病)和慢性(光老化和皮膚癌)形式(Thiele JJ等，J. Invest. Dermatol, 1998， 110(5)，756-761 ；Sander C. S.等，J. Invest. Dermatol，2002，118 (4)，618-625 ；Thiele J. J =SkinPharmacol. Appl. Skin Physiol, 2001,14 (suppl. 1),87-91 ；Sander CS 等， International Soc, Dermatol，2004，43，326—335)。 EP1591104(STADAPharmaceuticals AG)描述了抗氧化劑在防紅外線輻射的藥物制劑中的應用。抗氧化劑(Aox)起中和ROS的作用。如果在正形成ROS的皮膚內(nèi)存在適宜的類型 和水平，Aox應能在ROS攻擊和氧化其它生物分子前中和R0S。因此，具有確定何種局部施 用抗氧化劑在皮膚內(nèi)中和UVR引起的活性氧(ROS)時非常有效的方法將是有用的。此外， 具有區(qū)分只在溶液中能有效清除自由基的化合物和在皮膚暴露于UVR時為對其非常有效 的抗氧化劑的化合物的方法將是有用的。此外，具有確定防曬產(chǎn)品中抗氧化劑適宜選擇和 使用水平以提供對UVR引起的ROS導致的皮膚損傷額外防護的方法是有用的。另外，具有 能在皮膚表面和表皮深處例如遠至基底層處都提供對UVR引起的ROS的防護的組合物是有 用的。這些和其它目標通過本文描述的專利技術來實現(xiàn)。因此，本文描述的專利技術尤其提供一種方法，其包括二種獨特的評估局部施用的Aox 在皮膚外層內(nèi)對UVR引起的ROS形成提供防護的能力的體外方法。第一種方法使用顯微鏡 例如熒光顯微鏡通過成像人皮膚的切片來對表皮內(nèi)層例如直到基底層(basal layer)中的 ROS形成進行成像和定量。第二種方法對含Aox的組合物抑制皮膚外層中脂質(zhì)過氧化的程 度進行量化。本說明書還證實，測量溶液中抗氧化劑清除自由基的效力的常用實驗室試驗 不是Aox對更復雜的生物基質(zhì)如暴露于UVR的皮膚有效作用的能力的指示。因此，本專利技術 提供超過選擇防曬劑產(chǎn)品中所用Aox的現(xiàn)有技術方法的優(yōu)點以確保它們提供保護益處。本文列舉的所有專利和非專利參考文獻全文被引入到本說明書中作為其參考。這 節(jié)或本說明書任何部分中任何參考文獻的標識或討論不應被認為是承認這類參考文獻作 為本申請的現(xiàn)有技術可用。專利技術概述本專利技術提供一種確認用于給皮膚局部施用而配制的組合物的抗氧化劑活性的方 法，該方法包括測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的 整個表皮內(nèi)活性氧形成的能力。本專利技術還提供一種篩選在被局部施用到皮膚的組合物中起抗氧化劑作用的化合 物的方法，該篩選方法包括測定化合物抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質(zhì)氫過氧化物形成和 紫外線輻射引起的整個表皮內(nèi)活性氧形成的能力。本專利技術還提供一種用于施用到對象皮膚或頭發(fā)上的組合物，該組合物包含抗氧化 劑化合物或多種抗氧化劑化合物的組合，其中抗氧化劑化合物或多種抗氧化劑化合物的組 合充分抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的整個表皮內(nèi)活性氧形 成。本專利技術還提供用于局部施用的組合物，該組合物包含至少一種能充分抑制紫外線 輻射引起的表皮上層中活性氧形成的抗氧化劑化合物和至少一種能充分抑制紫外線輻射 弓I起的表皮下層中活性氧形成的抗氧化劑化合物。附圖簡述附圖說明圖1-顯示了在不同類型和水平的Aox存在下，體外(ex vivo)使用帶條(tape strip)收集人皮膚脂質(zhì)時抗氧化劑(Aox)抑制UVR引起的脂質(zhì)氫過氧化物(LOOH)形成的程度。圖2-顯示了防曬劑中加入抗氧化劑大大減少了 UV引起的角質(zhì)層內(nèi)ROS形成。相 對于對照，SPF 30防曬劑配方減少ROS 39%，而具有0.5%維生素E和0. l%Emblica作為 抗氧化劑的SPF 30配方減少ROS 73%。賦予ROS形成程度顏色代碼，藍色代表低ROS水 平，橙色或紅色代表高ROS水平。圖3-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測(two photonf Iuorescence microscopy)來證實維生素E和Emblica抗氧化劑減少UV引起的表皮內(nèi)ROS形成的能力。 包含0. 5%維生素E和0. Emblica的組合物對表皮下面(基底)層中自由基形成防護 很少。圖4-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測來證實各種已知抗氧化劑減少UV弓丨 起的表皮內(nèi)ROS形成的效果。當暴露于UVR時，被檢測的抗氧化劑提取物實際增加而不是 減少了自由基。圖5-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測來證實IMED的UVR后各種已知抗氧 化劑減少UV引起的表皮內(nèi)ROS形成的效果。包含0. 5%維生素E和0. 9% Oxynex ST的組 合物顯示為抑制下面表皮層內(nèi)的ROS形成。圖6-顯示了皮膚層上的雙光子熒光顯微檢測來證實4MED的UVR后各種已知抗氧 化劑減少UV引起的表皮內(nèi)ROS形成的效果。包含0. 5%維生素E和0. 9% Oxynex ST的組 合物顯示為抑制下面表皮層內(nèi)的ROS形成。詳細描述本專利技術提供一種確認用于給皮膚局部施用而配制的組合物的抗氧化劑活性的方 法，該方法包括測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的 整個表皮內(nèi)活性氧形成的能力。本專利技術還提供一種篩選在被局部施用到皮膚的組合物中起抗氧化劑作用的化合 物的方法，該篩選方法包括測定化合物抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質(zhì)氫過氧化物形成和 紫外線輻射引起的整個表皮內(nèi)活性氧形成的能力。在本專利技術的方法的一些實施方案中，測定紫外線輻射引起的皮膚中活性氧形成的 抑制包括使用雙光子熒光強度成像(two本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種確認用于給皮膚局部施用而配制的組合物的抗氧化劑活性的方法，該方法包括測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的表皮中活性氧形成的能力。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】US 2008-1-25 61/023713;US 2008-11-14 61/114758一種確認用于給皮膚局部施用而配制的組合物的抗氧化劑活性的方法，該方法包括測試組合物抑制紫外線輻射引起的皮膚上脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的表皮中活性氧形成的能力。2.一種篩選在被局部施用到皮膚的組合物中起抗氧化劑作用的化合物的方法，該篩選 方法包括測定化合物抑制紫外線輻射引起的皮膚脂質(zhì)氫過氧化物形成和紫外線輻射引起 的表皮中活性氧形成的能力。3.權利要求2的方法，其中測定紫外線輻射引起的表皮中活性氧形成的抑制包括使用 雙光子熒光強度成像對皮膚組織成像。4.權利要求2的方法，其中測定UVR引起的皮膚脂質(zhì)氫過氧化物形成的抑制包括測定 化合物與空白對照劑相比的脂質(zhì)氫過氧化物抑制百分比。5.權利要求4的方法，該方法包括以下步驟將包含抗氧化劑的組合物和空白對照劑 組合物施用到對象皮膚的不同區(qū)域以產(chǎn)生包含抗氧化劑和皮膚脂質(zhì)的抗氧化劑皮膚部位 和包含空白對照劑和皮膚脂質(zhì)的空白對照劑皮膚部位；在所述抗氧化劑皮膚部位和空白對 照劑皮膚部位施加條以產(chǎn)生包含抗氧化劑和皮膚脂質(zhì)的抗氧化劑條樣品和包含空白對照 劑和皮膚脂質(zhì)的空白對照劑條樣品；從皮膚上取下所述條樣品并暴露所述條樣品到UVR以 在抗氧化劑條樣品上形成UVR引起的抗氧化劑/脂質(zhì)反應產(chǎn)物和在空白對照劑條樣品上形 成UVR引起的空白對照劑/脂質(zhì)反應產(chǎn)物；分別使抗氧化劑條樣品和空白對照劑條樣品接 觸溶劑來制備包含UVR引起的抗氧化劑/脂質(zhì)反應產(chǎn)物的第一提取物和包含UVR引起的空 白對照劑/脂質(zhì)反應產(chǎn)物的第二提取物；分析所述第一和第二提取物中每種提取物的脂質(zhì) 氫過氧化物含量；和比較第一提取物的脂質(zhì)氫過氧化物含量和第二提取物的脂質(zhì)氫過氧化 物含量。6.權利要求5的方法，還包括以下步驟在對象皮膚上的二個不同部位施用空白對照 劑；由每個部位產(chǎn)生條樣品；使來自二個空白對照劑部位中僅僅一個的條樣品經(jīng)受UVR以 產(chǎn)生受輻射空白對照劑條樣品的子組和未受輻射空白對照劑條樣品的子組；單獨使未受輻 射空白對照劑條樣品接觸溶劑以制備包含空白對照劑和皮膚脂質(zhì)的第三提取物；和分析所 述第三提取物的脂質(zhì)氫過氧化物含量以確定基礎脂質(zhì)氫過氧化物形成。7.權利要求6的方法，其中比較第一提取物的脂質(zhì)氫過氧化物含量與第二提取物的脂 質(zhì)氫過氧化物含量包括利用下式計算脂質(zhì)氫過氧化物形成百分比%LF = (LQQH1 - LOOH 3) X 100 (LOOH2 - LOOH3)其中％ LF為脂質(zhì)氫過氧化物形成百分比，LOOHl為第一提取物的脂質(zhì)氫過氧化物含 量，L00H2為第二提取物的脂質(zhì)氫過氧化物含量，L00H3為第三提取物的脂質(zhì)氫過氧化物含量。8.一種用于局部施用的組合物，該組合物包含抗氧化劑化合物或多種抗氧化劑化合物 的組合，其中抗氧化劑化合物或多種抗氧化劑化合物的組合充分抑制紫外線輻射引起的皮 膚脂質(zhì)過氧化和紫外線輻射引起的表皮中活性氧形成。9.權利要求8的組合物，其進一步包含至少一種防曬活性劑。10.權利要求9的組合物，其中防曬活性劑選自對氨基苯甲酸、阿伏苯宗、西諾沙酯、二 羥苯酮、原膜散酯、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、水楊酸辛酯、羥苯甲酮、帕地馬酯0、苯基苯并咪唑磺酸、磺異苯酮、水楊酸三乙硝胺、二氧化鈦、氧化鋅、二乙醇胺甲氧基肉桂酸鹽、三油酸二 沒食子酰基酯、乙基二羥基丙基PABA、氨基苯甲酸甘油酯、具有二羥基丙酮的2-羥基萘醌、 紅凡士林、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、丙二酸亞芐酯聚硅氧烷、對苯二亞甲 基二樟腦磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸二鈉、二乙基氨基羥基苯甲酰己基苯甲酸酯、雙二乙 基氨基羥基苯甲酰基苯甲酸酯、雙苯并11惡唑基苯基乙基己基亞氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧 烷、亞甲基雙苯并三唑基四甲基丁基苯酚和雙乙基己氧基苯酚甲氧基苯基三嗪、4-甲基亞 芐基樟腦和4-甲氧基肉桂酸異戊酯及它們的混合物。11.權利要求8的組合物，其包含約0.25襯％的維生素E作為抗氧化劑。12.權利要求8的組合物，其包含約0.5襯％...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：TA邁爾，DG比斯利，
申請(專利權)人：先靈普勞健康護理產(chǎn)品公司，
類型：發(fā)明
國別省市：US[美國]