提供了一種本發明專利技術的底物，其包括一種式Ａ－Ｂ１－Ｂ２－Ｂ３－Ｂ４的底物化合物，其中Ａ為糖部分；Ｂ１為能使Ａ部分與底物的剩余結構連接的連接部分；Ｂ２為含有反應性自由氨基的連接部分，以便與羧酸或可測標記反應；Ｂ３含有一種永久帶電元素，例如季銨基團，以便增加質譜分析的靈敏性；Ｂ４具有在檢測方法中賦予各個底物特異性的不同碳鏈。還提供了一種式Ｂ１－Ｂ２－Ｂ３－Ｂ４的分子，其與通過將目標酶作用于本發明專利技術底物而生成的酶產物具有相似的結構特征。此外還提供了用本發明專利技術底物檢測酶活性的方法。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及用于使用例如質譜、免疫測定和高效液相色譜等檢測方法檢測酶活 性的分析試劑。在一個方面中，本專利技術涉及用于檢測溶酶體酶活性的底物。
技術介紹
溶酶體貯積癥是一種遺傳病，其特征在于體內缺乏特異性酶，從而導致身體無 法分解代謝物。例如，法布里病是一種每40000人中就有一人患有的溶酶體貯積癥。它 是由于缺乏α-半乳糖苷酶造成的，這種缺乏導致人體無法分解稱為神經酰胺三己糖苷 (globotriaosylceramides)的特定脂肪類物質。第二個實例為戈謝病，其為一種由于無法分 解稱為葡糖苷酰鞘氨醇(也稱為葡糖腦苷脂)的脂肪類物質或類脂類物質而引起的溶酶體 貯積癥。患有戈謝病的個體不產生分解這些脂肪類物質所需的葡糖腦苷脂酶。因而這些 脂肪類物質就蓄積在肝、脾和骨髓細胞中。第三個實例是龐皮病，其為一種由于缺乏分 解稱為糖原的特定糖類所需的酸性α-葡萄糖苷酶而引起的溶酶體貯積癥。當酸性α-葡 萄糖苷酶缺失時，糖原就會蓄積在體內的各種組織和器官中。溶酶體貯積癥大多是兒童期疾病，但也有一些顯露于成年期。在大部分這些疾 病中，患者出生時是正常的，之后才開始漸進性神經系統惡化。其臨床表型取決于生化 缺陷的類型及嚴重程度。一些溶酶體癥，例如龐皮病及克拉伯病，主要顯露于嬰兒期。 在出現臨床癥狀之前檢測這類疾病以便能夠開始介入治療的方法正在努力研發中。在過去的十年中，檢測代謝疾病的試驗室人員已將串聯質譜引入其新生兒篩查 程序中。串聯質譜法在臨床中不斷普及，因為這項技術能對單一樣品中的多種代謝物進 行測定。例如，這項技術已成為利用干燥血斑樣品檢測新生兒遺傳性代謝異常的常規臨 床方法而被采用(Schulze Aetal.，Pediatrics, 2003 ； 111 1399-406)。雖然溶酶體酶 活性可使用串聯質譜進行定量(Gelb MH et al.，Clinical Chemistry 50 10，1785-1796， 2004)，但是由于繁瑣的過程和苛刻的測定成分，例如氯仿，所公開的測定方法還不能容 易地適應臨床環境。第二個常用的臨床測定方案是酶聯免疫吸附測定法(ELISA)。目前使用一些 生物標記物來檢測并監控戈謝病(參見例如Aerts，JM, andHollack, CD, Bailliere' s Clin.Haematol, 1997 ； 10: 691-709; Deegan PB，etal.，Blood Cells Mol Dis, 2005 ； 35: 259-67 ； Beutler，Ε, etal., J ExpMed，1976 ； 143 975-80)。用于檢測其中活性 成分為修飾葡糖腦苷脂酶的阿糖苷酶的抗體的ELISA法也有報道(Richards SM, et al., Blood, 1993 ； 82: 1402 ； Rosenberg, M.，etal., Blood, 1999 ； 93: 2081-2088)。然 而，這些測定方法并不直接檢測溶酶體酶的活性，而是檢測疾病間接標志物的水平。因此，仍需改進檢測溶酶體疾病的方法及組合物。
技術實現思路
本專利技術實施方案提供了用于使用例如質譜、免疫測定和高效液相色譜等檢測系 統檢測酶反應的改進的組合物及方法。本專利技術提供了可用于評估樣品中溶酶體酶活性水平的化學化合物。溶酶體酶 活性測試可用于例如對新生兒的代謝疾病進行篩查，以及對處于影響酶活性的病癥中的 個體或接受例如酶替代療法、基因療法、或骨髓移植等醫學治療的個體進行評估。此處 所述化學化合物包括用于目標酶的底物以及可在酶測定中用作對照物或標準物的相關分子。本專利技術的底物具有通式A-CB1-B2-B3-B4),其中A為單糖或二糖；B1SC1-C2tl 烷基、具有取代的C6-C2tl芳基的C1-C2P含有N、O或S雜原子WC6-C2tl雜環；B2為氨 基酸、2，6-二氨基己酸或權利要求1.一種用于分析酶的底物，具有下式A-(B1-B2-B3-B4) ⑴其中A為單糖或二糖；B1為C1-C2tl烷基、具有取代的C6-C2tl芳基的C1-Cf含有 N、O或S雜原子WC6-C2tl雜環基；B2為氨基酸、2，6-二氨基己酸或-RV-XRz1(Y)n其中R/ SC1-C2tl烷基、C4-C2tl醚基、具有N、O或S取代基的C1-C2tl烷基、雜原 子C6-C2tl芳基、C1-C2tl羰基、C1-C2tl酰氨基、C1-C2tl醚基、C6-C2tl芳基、含有N、O或 S雜原子WC6-C2tl雜環基；X為不存在，或為氧、硫或氮；R2'為不存在，或為C1-C2tl 烷基、C4-C2tl醚基、含有N、O或S取代基的C1-C2tl烷基、C1-C2tl酯基、C1-C2tl醇基、 C1-C2tl烯基、雜原子C6-C2tl芳基、含有N、O或S雜原子WC6-C2tl雜環基；Y為碳、氮、 氧或硫親核基團；η為1至30的整數。B3為~^l-(XR3)dR4——N+(R2)3其中R1 SC1-C2tl烷基、C4-C2tl醚基、具有N、O或S取代基WC1-C2tl烷基、雜原 子C6-C2tl芳基、C1-C2tl羰基、C1-C2tl酰氨基、C1-C2tl醚基、C6-C2tl芳基、含有N、O或 S雜原子WC6-C2tl雜環基；R2各自獨立地為H、C1-C2tl烷基、具有C1-C2tl烷基取代基的 C2-C2tl烷基；X各自獨立地為不存在的基團、氧、硫或氮；R3各自獨立地為不存在的基 團、C1-C2tl烷基、具有取代的C6-C2tl芳基的C1-C,含有N、O或S雜原子WC6-C2tl雜 環基；η為0至30的整數，包括0和30; R4各自獨立地為不存在的基團、C1-C2tl烷基、 具有取代的C6-C2tl芳基的CfQ。、C1-C2tl羰基、C1-C2tl酰氨基、C1-C2tl醚基、C6-C2tl芳 基、含有N、O或S雜原子WC6-C2tl雜環基；B4為不存在的基團或C1-C2tl烷基、C4-C2tl 醚基、含有N、O或S取代基的C1-C2tl烷基、C1-C2tl酯基、C1-C2tl醇基、C「C2Q烯基、 雜原子C6-C2tl芳基、含有N、O或S雜原子WC6-C2tl雜環基。2.權利要求1的底物，其中A和(B1-B2-B3-B4)通過所述酶的作用而分離。3.權利要求1的底物，其中A為己醛糖或己酮糖。4.權利要求1的底物，其中A為D-葡萄糖或D-半乳糖。5.權利要求1的底物，其中B1為具有從環延伸出的取代基的C6芳基。6.權利要求1的底物，其中B2為賴氨酸。7.權利要求1的底物，其中B2通過加入熒光團衍生。8.權利要求1的底物，其中B3為肉堿基。9.權利要求8的底物，其中B4為具有一個以羰基形式存在的O取代基的C2-C2tl烷基。10.權利要求1的底物，其中A和(B1-B2-B3-B4)部分各自包含一種元素的穩定二級 同位素。11.權利要求10的底物，其中所述穩定二級同位素各自選自2D、13C、15N、170、 180、31P 和 34s。12.—種具有下式的分子B1-B2-B3-B4 (I)其中B1 SC1-C2tl烷基、具有取代的C6-C2tl芳基的C1-Cf含有N、O或S雜原子的C6-C2tl雜環基；B2為氨基酸、2，6-本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于分析酶的底物，具有下式：Ａ－（Ｂ↑［１］－Ｂ↑［２］－Ｂ↑［３］－Ｂ↑［４］） （Ⅰ）其中Ａ為單糖或二糖；Ｂ↑［１］為Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、具有取代的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］、含有Ｎ、Ｏ或Ｓ雜原子的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］雜環基；Ｂ↑［２］為氨基酸、２，６－二氨基己酸或－＊↓［１］’－ＸＲ↓［２］’（Ｙ）↓［ｎ］其中Ｒ↓［１］’為Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、Ｃ↓［４］－Ｃ↓［２０］醚基、具有Ｎ、Ｏ或Ｓ取代基的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、雜原子Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］羰基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］酰氨基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］醚基、Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基、含有Ｎ、Ｏ或Ｓ雜原子的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］雜環基；Ｘ為不存在，或為氧、硫或氮；Ｒ２’為不存在，或為Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、Ｃ↓［４］－Ｃ↓［２０］醚基、含有Ｎ、Ｏ或Ｓ取代基的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］酯基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］醇基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烯基、雜原子Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基、含有Ｎ、Ｏ或Ｓ雜原子的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］雜環基；Ｙ為碳、氮、氧或硫親核基團；ｎ為１至３０的整數。Ｂ↑［３］為－＊↑［１］－（ＸＲ↑［３］）↓［ｎ］Ｒ↑［４］－其中Ｒ↑［１］為Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、Ｃ↓［４］－Ｃ↓［２０］醚基、具有Ｎ、Ｏ或Ｓ取代基的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、雜原子Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］羰基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］酰氨基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］醚基、Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基、含有Ｎ、Ｏ或Ｓ雜原子的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］雜環基；Ｒ↑［２］各自獨立地為Ｈ、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、具有Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基取代基的Ｃ２－Ｃ２０烷基；Ｘ各自獨立地為不存在的基團、氧、硫或氮；Ｒ３各自獨立地為不存在的基團、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、具有取代的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］、含有Ｎ、Ｏ或Ｓ雜原子的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］雜環基；ｎ為０至３０的整數，包括０和３０；Ｒ↑［４］各自獨立地為不存在的基團、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］烷基、具有取代的Ｃ↓［６］－Ｃ↓［２０］芳基的Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］羰基、Ｃ↓［１］－Ｃ↓［２０］...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：B瑟達，MN鮑勃饒，
申請(專利權)人：珀金埃爾默健康科學有限公司，
類型：發明
國別省市：US[美國]
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