新的10-羥基脫鎂葉綠素a制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了式（１）１０－羥式脫鎂葉綠素ａ或其藥學(xué)上可接受的鹽。這些化合物用作光動(dòng)力癌癥療法中的光敏劑。（*該技術(shù)在2012年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)是關(guān)于新的10-羥基脫鎂葉綠素a(以下有時(shí)稱之為“CpD-Ⅰ”)和其藥學(xué)上可接受的鹽，以及該化合物的制備方法。本專利技術(shù)還涉及含有作為活性成份的上述化合物的光敏劑組合物，以及利用上述光動(dòng)力治療癌癥的方法。近年來(lái)，“光動(dòng)力療法(PDT)”已引起醫(yī)學(xué)界的興趣和關(guān)注，所謂“光動(dòng)力療法(PDT)”是指利用光化射線殺死腫瘤細(xì)胞的療法。T.J.Dougherty已報(bào)道了具有代表性的這種光動(dòng)力療法。此光動(dòng)力療法包括使用光敏劑，該光敏劑被優(yōu)先吸收在實(shí)心腫瘤生長(zhǎng)迅速的組織部分。光敏劑一旦被注入，便富集在腫瘤部位周圍。然后對(duì)腫瘤施用光敏劑本身固有的最大吸收波長(zhǎng)的光，以便選擇性地殺死腫瘤細(xì)胞而不損傷腫瘤細(xì)胞周圍的健康細(xì)胞。利用光動(dòng)力療法治療癌癥時(shí)，關(guān)鍵在于選擇所用的光敏劑。光敏劑應(yīng)具有優(yōu)先與腫瘤細(xì)胞結(jié)合并發(fā)射熒光的特異性。通過(guò)利用這些性質(zhì)可以定位癌癥細(xì)胞。當(dāng)光敏劑注入被檢查的身體體內(nèi)，然后在身體內(nèi)放置內(nèi)窺鏡后，很容易觀察到熒光部位，即腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)部位。照射時(shí)，處于基態(tài)的光敏劑吸收光。光敏劑的光激發(fā)態(tài)向體內(nèi)的分子氧轉(zhuǎn)移能量，產(chǎn)生單線態(tài)氧。單線態(tài)氧氧化各種生物化合物，包括細(xì)胞結(jié)構(gòu)組分如甾族化合物和具有不飽和酰基鏈的磷脂，氨基酸如色氨酸，組氨酸，光胱氨酸和蛋氨酸;以及核酸組分如鳥苷和胞苷等等。因此，一旦單線態(tài)氧與腫瘤細(xì)胞作用，它將通過(guò)氧化腫瘤組織的細(xì)胞組分殺死腫瘤細(xì)胞。如上所述，光動(dòng)力療法可用于癌癥的診斷和治療領(lǐng)域。光動(dòng)力療法優(yōu)于其它類型的治療方法。這種治療方法具有良好的治療效果和很寬的應(yīng)用范圍，因?yàn)榧词故翘幱谌魏纹h(yuǎn)部位的腫瘤(不管是什么腫瘤)也可以通過(guò)光穿過(guò)內(nèi)竊鏡而得到成功地治療。這種治療方法還具有另一優(yōu)點(diǎn)，即它對(duì)于正常細(xì)胞只產(chǎn)生較小的副作用，因而可重復(fù)施用。迄今為止，已經(jīng)開發(fā)了大量光敏劑，其中既有天然的也有合成的。這些光敏劑包括補(bǔ)骨脂靈、黃素、卟啉、吖啶、吩噻嗪、呫噸、醌、多烯、鹵代芳族化合物，以及無(wú)機(jī)離子。許多這種光敏劑現(xiàn)已被作為光動(dòng)力抗腫瘤劑用于臨床試驗(yàn)。少量光敏劑已可從市場(chǎng)上買到用于PDT。其代表性實(shí)例包括血卟啉衍生物(HpD)(由The Quadra Logic Technology Inc(Vancouver，Canada)出售，商品名稱為“Photofrin-Ⅰ”，一中聚血卟啉的醚和酯的混合物，和“Photofrin-Ⅱ”，一種更純的產(chǎn)品。本專利技術(shù)的專利技術(shù)者集中進(jìn)行了一系列試驗(yàn)，以便尋求一種具有良好治療效果的有效的光敏劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)從蠶提取物中分離出的新的脫鎂葉綠素衍生物能極大地改進(jìn)光敏性，從而完成了本專利技術(shù)。因此，本專利技術(shù)的目的是提供新的脫鎂葉綠素衍生物，該衍生物可作為光敏劑用于光動(dòng)力療法治療癌癥。本專利技術(shù)的另一目的是提供制備本專利技術(shù)新的脫鎂葉綠素衍生物的方法。本專利技術(shù)又一目的是提供光敏劑組合物，它包括作為活性成分的本專利技術(shù)新的脫鎂葉綠素衍生物，和與其混合和結(jié)合的常用組分，如載體，賦形劑，膨脹劑等等。本專利技術(shù)再一目的是提供用本專利技術(shù)新的脫鎂葉綠素衍生物光動(dòng)力治療癌癥的方法。本專利技術(shù)的其它目的通過(guò)閱讀說(shuō)明書的其余部分將十分清楚。附附圖說(shuō)明圖1A和1B表示各種蠶提取物，波菜和桑子的薄層色譜(TLC);附圖2A，2B和2C表示附圖1A和1B中所描繪的帶2的反相高效液體色譜(HPLC);其中附圖2A表示在熒光房間燈下曝光幾小時(shí)后的帶2的反相高效液體色譜，它表示由CpD-1光轉(zhuǎn)換得到CpD-2;附圖2B表示在燈下曝光5分鐘后帶2的反相高效液體色譜;附圖2C表示未經(jīng)曝光的帶2的反相高效液體色譜;附圖3A表示CpD-1和葉綠素a的各自1H-NMR光譜，其中箭頭指示C10-OH和C10-H的位置;附圖3B表示CpD-1(CpD-1與重水(D2O)混合)和葉綠素a的1H-NMR光譜，與CpD-1混合的重水是用于測(cè)定C10-OH的1H共振;附圖3C表示CpD-1的13C-NMR光譜;附圖3D表示CpD-1的1H二維COZY NMR光譜;附圖4表示CpD-1的傅利葉變換紅外光譜;附圖5表示在295°K下1，3-苯基異苯并呋喃(DPBF)最大初始光氧化速率時(shí)產(chǎn)生的單重態(tài)氧數(shù)量的圖表;附圖6表示腫瘤和正常細(xì)胞中CpD-1和HpD的可吸收性;以及附圖7A和7B表示用CpD-1和HpD分別處理人體T-4淋巴瘤細(xì)胞系(MOLT-4)和人體末稍血液淋巴細(xì)胞(PBL)，然后曝光于紅光(附圖7A)和黃光(附圖7B)后上述細(xì)胞的存活百分率。本專利技術(shù)提供了具有下式的新的10-羥基脫鎂葉綠素或其藥學(xué)上可接受的鹽 本專利技術(shù)的脫鎂葉綠素衍生物能夠高產(chǎn)率產(chǎn)生光激化單重態(tài)氧，與其它常用光敏劑比較，在腫瘤組織中顯示出更好的選擇吸收。此外，在對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的選擇破壞癌細(xì)胞和治療腫瘤效率方面，本專利技術(shù)光敏劑比其它常用光敏劑更優(yōu)越。本專利技術(shù)化合物結(jié)構(gòu)類似于葉綠素a，但仍具有結(jié)構(gòu)特征，即葉綠素a中Mg++和C10位上氫原子分別被兩個(gè)氫原子和羥基取代。據(jù)專利技術(shù)人所知，本專利技術(shù)的10-羥基脫鎂葉綠素是結(jié)構(gòu)還未被確定過(guò)的新化合物，在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中還未被用作光敏劑。式(Ⅰ)化合物可轉(zhuǎn)換成其無(wú)毒鹽，即按照任何常規(guī)方法得到的其藥學(xué)上可接受的鹽。所述無(wú)毒鹽包括式(Ⅰ)化合物的無(wú)機(jī)鹽，如其金屬鹽，無(wú)機(jī)酸鹽及有機(jī)鹽。金屬鹽包括堿金屬鹽如鈉鹽，鉀鹽等，以及堿土金屬鹽，如鈣鹽，鎂鹽等。無(wú)機(jī)酸鹽可包括氫氯酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽等等。有機(jī)鹽可包括有機(jī)胺鹽，如三甲胺鹽，三乙胺鹽，吡啶鹽，普魯卡因鹽，甲基吡啶鹽，二環(huán)己基胺鹽，N，N-二芐基-1，2-乙二胺鹽，N-甲基葡糖胺鹽，二乙醇胺鹽，三乙醇胺鹽，三-(羥甲基氨基)甲烷鹽，苯基乙基芐胺鹽，二芐基乙二胺鹽等等。無(wú)毒鹽還包括有機(jī)羧酸或磺酸鹽，如甲酸鹽，乙酸鹽，馬來(lái)酸鹽，酒石酸鹽，甲磺酸鹽，苯磺酸鹽，甲苯磺酸鹽等，以及與堿性或酸性氨基酸如精氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，賴氨酸等形成的鹽。本專利技術(shù)還提供了制備本專利技術(shù)的新的脫鎂葉綠素衍生物的方法，包括步驟(a)用適宜溶劑從蠶提取物中提取葉綠素代謝物;(b)將提取得到的物質(zhì)溶解在適宜溶液中，至過(guò)飽和;(c)經(jīng)色譜法，從所得溶液中分離光敏劑組分;以及(d)收集表現(xiàn)出強(qiáng)光敏作用部分，隨后用常規(guī)方法純化。蠶提取物的提取(步驟(a))可按照常規(guī)溶劑提取法進(jìn)行，對(duì)于溶劑，可使用本專業(yè)已知的任何溶劑如酮，醇，及其混合物。提取出的物質(zhì)然后溶解在適宜溶劑中，得到一超飽和溶液(步驟(b))。任何溶劑均可用于溶解固體提取物。然而，為有效溶解，優(yōu)選叔丁醇，丙酮和戊烷的混合物。所得溶液然后經(jīng)色譜法，分離溶解在提取液中的固體組分(步驟(c))。本專業(yè)已知的任何制備色譜，如液相色譜(LC)，薄層色譜(TLC)，及其它類形色譜均可使用。分離完之后，收集具有強(qiáng)光敏性的部分，然后用常規(guī)純化方法純化(步驟(d))。本專利技術(shù)優(yōu)選使用高壓液相色譜(HPLC)。分析所得產(chǎn)物，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。可使用本領(lǐng)域已知的任何分析方法，如紅外光譜(IR)，傅利葉轉(zhuǎn)換紅外光譜(FT-IR)，紫外光譜(UV)，旋光色散和圓二色性光譜，熒光測(cè)定法，閃光光譜，質(zhì)譜，核磁共振光譜等。另外，式(Ⅰ)化合物也可通過(guò)利用葉綠素a作原料，用化學(xué)方法合成。制備式(Ⅰ)化合物的合成方法包括下述步驟(a)將葉綠素a于室溫下，在乙醇或氯仿中與HCl反應(yīng)，脫去其中的Mg離子;(b)在室溫和暗淡的安本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
式（Ⅰ）１０－羥基脫鎂葉綠素ａ或其藥學(xué)上可接受的鹽。＊＊＊（Ⅰ）。

【技術(shù)特征摘要】
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋淳，韓寶燮，李元榮，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：第一制糖株式會(huì)社，三星物產(chǎn)株式會(huì)社，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：KR[韓國(guó)]