本發明專利技術涉及一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時定量新方法。其特征：以含水甲醇提取，氧化鋁柱除雜，含水甲醇洗脫，濾過，以濾液進樣的程序，取代了原方法的氨試液堿化、氯仿提取、氧化鋁柱除雜，氯仿與氯仿－甲醇（７∶３）洗脫，洗脫液蒸干，定容，濾過，濾液進樣的程序。首次以普通的反相色譜柱，非緩沖鹽體系，乙腈－甲醇－乙醇－０．１％磷酸（２．５～３∶２．５～３．５∶０．３～０．８∶９２．７～９４．７）為流動相，進行了苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿的同時定量測定，生物堿波峰分離良好。簡便的前處理方法與非緩沖鹽流動相體系，構成了苦參堿和氧化苦參堿同時定量新方法。簡便、快捷、準確，經濟、實用，流動相耐用性好、不損傷儀器及色譜柱。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及。
技術介紹
苦參為豆科植物Sophora flavescens Ait.的干燥根。是一種常用中藥，具清熱 燥濕，殺蟲，利尿之功效。用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚 瘙癢，疥癬麻風等癥。制劑系指復方鹿仙草片，為彝族用藥，其處方由鹿仙草1250g、九香蟲 (炒)500g、黃藥子325g、苦參125g、天花粉250g、土茯苓250g組成，制備方法是處方中的 六味藥材，鹿仙草、黃藥子、天花粉、土茯苓粉碎成粗粉，加水煎煮三次，每次1. 5小時，合并 煎液，靜置12小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1. 20(55°C )的清膏，噴霧干燥；苦參 粉碎成粗粉，加60%乙醇回流提取三次，每次1. 5小時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至 相對密度為1. 10(55°C )的清膏，噴霧干燥；九香蟲加60%乙醇回流提取三次，每次1. 5小 時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為0.95 1.00 (55°C)的清膏，備用。取上 述兩種噴霧干燥粉，加入適量淀粉、微晶纖維素，混勻，再加入九香蟲清膏，制粒，干燥，壓制 成1000片，包薄膜衣，即得。該藥的功能主治舒肝解郁，活血解毒。用于肝郁氣滯，毒瘀互 阻所致的原發性肝癌。苦參的主含苦參堿和氧化苦參堿，為喹諾里西啶類生物堿，具抗炎、抗腫瘤、鎮痛、 抗心率失常，鎮咳，殺菌等廣泛的生物活性。目前苦參藥材及其組成的成方制劑，其含量測 定都是控制苦參堿和氧化苦參堿總量，因為二者存在著互變異構現象。對苦參堿和氧化苦 參堿的含量測定，有薄層掃描法，毛細管電泳法，高效液相法等多種方法，最常用的多是高 效液相法。其特點第一，不論藥材還是制劑，前處理方法都比較繁瑣、復雜，需用三氯甲烷 等毒害溶劑純化處理，費時長，成本高、效率低、污染環境，危害健康，并直接影響測定結果 的準確性。第二，反相色譜中所用的流動相都是緩沖鹽中添加十二烷基硫酸鈉或十二烷基 磺酸鈉等，流動相中溶質增多，比重增大，壓力增高，稍不注意就會損傷儀器和色譜柱。第 三，如采用正相色譜，必須是特定的氨基柱，其流動相中的有機相要達90%以上，測定成本 升高。將目前有關苦參堿和氧化苦參堿的質量控制方法歸納、分析如下方法1取苦參藥材粉末約0. 3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0. 5ml，精 密加入三氯甲烷20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再 稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml，加在中性氧化鋁 柱(100 200目，5g，內徑Icm)上，依次用三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)混合溶液各 20ml洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，轉移至IOml量瓶 中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得。色譜柱氨基柱；流動相乙腈_無水乙醇磷酸溶 液(80 10 10)；測定成分苦參堿和氧化苦參堿(該方法為中國藥典2010年版一部苦 參藥材測定)。方法1分析本測定方法的樣品前處理需花費三氯甲烷等毒性溶劑70ml、時間約2. 5 4小時，并且要特定的氨基柱，有機相的比例為90%，其中磷酸的濃度達0. 3%。曾 測定過0. 的磷酸溶液的pH值為2. 3左右，依次類推0.3%的pH值應在2.0以下，酸度 太高，易損壞色譜柱。90%的有機相中較昂貴的乙腈比例占80%，可以說其測定成本最高。 在內徑Icm的色譜柱上，填加5g氧化鋁，其高度約4 5cm，氧化鋁粒度又是100 200目， 范圍太寬，各自比例又無規定，會因100目和200目的比例不同，影響色譜柱的被洗脫的效 果，進而影響測定結果的準確性和重現性。方法2取復方鹿仙草膠囊內容物，研細，取約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 加濃氨試液0. Iml及三氯甲烷25ml，回流提取30分鐘，冷卻，傾出提取液，加少量三氯甲烷 洗滌容器兩次，合并，濾過，濾液在60°C水浴蒸干，殘渣加pHl. 0硫酸水溶液25ml，分次溶 解，一并轉移至分液漏斗中，加濃氨水調節pH至9. 0 10. 0，加入乙醚25ml，萃取三次，乙 醚液棄去，所得水液水浴揮至無乙醚味，轉移至25ml量瓶中，加pHl. 0硫酸水溶液至刻度， 搖勻，用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過，即得。色譜柱alltima C18 (5 μ m，4. 6mmX 250mm)；流動 相乙腈-0.02mol/L硫酸銨-十二烷基硫酸鈉(36 64 0. 62)(用20 %硫酸溶液調節 PH值至3.0)；測定成分氧化苦參堿(朱良輝等“HPLC法測定復方鹿仙草膠囊中氧化苦參 堿的含量”江西中醫學院學報2006年18卷6期)。方法2分析本測定方法的樣品前處理也比較麻煩，需花費有機溶劑115ml，時間 約3 4小時，雖然無色譜柱除雜，三氯甲烷提取液的水浴蒸干，但硫酸水溶液的溶解轉移 以及濃氨水調節pH至9. 0 10. 0后，乙醚液的三次萃取除雜，步驟繁瑣，易造成結果的重 現性欠佳。最為關鍵的是將溶液調堿性后，生物堿游離，易溶于親脂性溶劑，再用乙醚除 雜，或多或少都會損失掉一些待測成分，給測定結果帶來偏差，影響測定數值的準確性。本 方法的流動相為緩沖鹽體系，柱壓高，如若后處理不到位，易損傷色譜柱和儀器。本流動相 只能測定氧化苦參堿。方法3取復方鹿仙草片，研細，取約0. 8g，精密稱定，加水30ml使溶解，用濃氨試 液調節pH至9 10，用三氯甲烷振搖提取3次(30ml、20ml、20ml)，合并三氯甲烷液，通過中 性氧化鋁柱(100 200目，7g)上，流速每秒1 2滴，收集三氯甲烷液，再用三氯甲烷-甲 醇(7 3)混合溶液20ml洗脫，合并洗脫液與三氯甲烷液，置60°C水浴上蒸干，殘渣加流動 相使溶解，定量轉移至IOml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過，取 續濾液，即得。色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相甲醇-含0. 17%庚烷磺 酸鈉及0.08%冰醋酸的水溶液-四氫呋喃(23 77 0.5)；測定成分氧化苦參堿(復方 鹿仙草片的國家標準YBZ06102009)。方法3分析本測定方法為復方鹿仙草片國家標準，僅樣品前處理需花費三氯甲 烷毒性溶劑90ml，時間7 8小時，經試驗得知，藥粉加水后，并不能溶解而成為混懸液，經 用濃氨調節PH至堿性后，黏度增加，再用三氯甲烷萃取時，乳化嚴重，長時間很難分層，影 響了結果的準確性。70ml的萃取液與20ml洗脫液，流經100 200目的氧化鋁柱7g之上， 花費時間約2小時，再在60°C水浴上蒸干，又要花費2小時，程序越長，成分損失越多，方法 的準確性和重現性越差。與方法2相同流動相為緩沖鹽體系，只能測定氧化苦參堿。方法4取復方鹿仙草顆粒，研細，取約2. Og,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨 試液0. 5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量， 用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5ml，通過中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內徑Icm)上，依次用三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)混合溶液各25ml洗脫， 收集洗脫液，回收溶劑至干，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種苦參藥材及其制劑中苦參堿和氧化苦參堿同時定量新方法，其特征在于：（１）色譜條件與系統適用性試驗 以乙腈－甲醇－乙醇－０．１％磷酸（２～３∶２．５～３．５∶０．３～０．８∶９３～９５）為流動相；柱溫：３０～５０℃；檢測波長為２１０ｎｍ。理論板數按氧化苦參堿峰計算應不低于２０００。（２）對照品溶液的制備 取苦參堿和氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每１ｍｌ含苦參堿和氧化苦參堿各為２０～３０μｇ的溶液，即得。（３）供試品溶液的制備 取苦參藥材細粉約０．１～０．３ｇ，精密稱定；或苦參制劑約０．７～０．９ｇ，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入８０％甲醇２５ｍｌ，密塞，稱定重量，超聲處理（功率２５０Ｗ，頻率３３ｋＨｚ）１５分鐘（苦參藥材３０分鐘），放冷，再稱定重量，用８０％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液１～３ｍｌ，置中性氧化鋁柱（φ１ｃｍ，１００－１２０目中性氧化鋁１．５～２．５ｇ）上，用８０％甲醇洗脫至１０ｍｌ的量瓶中至約８～９ｍｌ，加１滴磷酸，用８０％的甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（０．４５μｍ）濾過，取續濾液作為供試品溶液。即得。（４）測定法 分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各１０～１５μｌ，注入液相色譜儀，測定苦參堿和氧化苦參堿的含量。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：韓桂茹，張文臣，申玉龍，安麗娜，王新光，
申請(專利權)人：承德燕峰藥業有限責任公司，
類型：發明
國別省市：13[中國|河北]
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。