一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑及其制備方法技術(shù)

一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑及其制備方法，它涉及一種粉劑及其制備方法。它要解決現(xiàn)有技術(shù)制備的粉劑活性成分的保質(zhì)期和持效期差，制備工藝單一、陳舊的問(wèn)題。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑包括芽孢和伴孢晶體混合物、載體、潤(rùn)濕劑和分散劑，其制備方法是：一、制備種子菌液；二、發(fā)酵培養(yǎng)種子菌液，得到發(fā)酵液；三、濃縮發(fā)酵液，得到芽孢和伴孢晶體；四、向芽孢和伴孢晶體混合物中加入載體和ＮａＣｌ，混勻；五、混勻后加入潤(rùn)濕劑和分散劑，混勻，烘干研磨，得到一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)得到的粉劑中蘇云金芽孢桿菌的活性高，保質(zhì)期和持效期長(zhǎng)，廣泛應(yīng)用于田間防治農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)領(lǐng)域。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專(zhuān)利技術(shù)涉及一種粉劑及其制備方法。技術(shù)背景現(xiàn)今導(dǎo)致作物減產(chǎn)的最主要原因之一是農(nóng)業(yè)蟲(chóng)害，傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥雖然對(duì)害蟲(chóng) 有一定的防治作用，但它所帶來(lái)的負(fù)面影響也日趨嚴(yán)重，使害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性從而降低藥 效，增加防治成本，毒性較大，不僅對(duì)人畜有害，而且會(huì)污染環(huán)境，殺傷天敵，甚至破壞生態(tài) 平衡。而微生物殺蟲(chóng)劑則克服了以上缺點(diǎn)，并且具有選擇性強(qiáng)、安全、原料簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，因 此成為農(nóng)作物蟲(chóng)害防治的研究熱點(diǎn)之一。目前研究過(guò)的微生物殺蟲(chóng)劑中蘇云金芽孢桿菌 (Bacillus thuringiensis, Bt)是研究的最多也是最受青睞的生防制劑。蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)劑自1938年法國(guó)問(wèn)世以來(lái)，已取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，開(kāi)發(fā)的劑 型也已經(jīng)有很多種，包括粉劑、懸浮劑、可濕性粉劑、油劑、油乳劑、顆粒劑、片劑、緩釋劑、生 物包被劑等等，近100年的研究開(kāi)發(fā)，使得以蘇云金芽孢桿菌微生物源的微生物殺蟲(chóng)劑逐 漸成熟完善。田間防治效果達(dá)到80%以上的在我國(guó)就有20多種。但在應(yīng)用過(guò)程中還存在 主要起效成分不穩(wěn)定，致使活性成分的保質(zhì)期和持效期差等眾多問(wèn)題。蘇云金粉劑所含伴孢晶體和芽孢以干粉狀態(tài)存在，具有耐貯藏、運(yùn)輸方便、使用性 強(qiáng)、效價(jià)高等特點(diǎn)。但由于粉劑不易被水濕潤(rùn)，也不易分散和懸浮在水中，稀釋噴霧較困難。 蘇云金芽胞桿菌粉劑含水量要求在4%以下，這樣才能較長(zhǎng)時(shí)間保持有效成分處于穩(wěn)定狀 態(tài)。另外，蘇云金芽孢桿菌粉劑的制備方法普遍存在單一、陳舊的問(wèn)題，生產(chǎn)工藝也相 對(duì)落后，致使產(chǎn)品的生理檢測(cè)指標(biāo)不確定、主要起效成分也不穩(wěn)定，這使得微生物殺菌劑的 發(fā)展受到阻礙。目前粉劑正朝著高效價(jià)、多功能(廣譜、增效、延緩抗性、降低成本)的方向發(fā)展， 劑型改進(jìn)的工作主要針對(duì)這些不足進(jìn)行。普魯蘭多糖具為白色非吸濕性的粉狀物，無(wú)毒、無(wú) 致畸性、無(wú)味，易溶于冷水，具有水溶性、成膜性、成纖維性、吸水性等獨(dú)特的性質(zhì)，因此利用 普魯蘭多糖作為藥物釋放系統(tǒng)載體材料的研究越來(lái)越受到人們的重視；而在生產(chǎn)工藝中， 則需要選擇新劑型、新助劑和新的填加劑，以提高有效成分的分散性和附著性，延長(zhǎng)活性成 分的保質(zhì)期，也是目前亟待解決的一大難題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)是為了解決現(xiàn)有蘇云金芽孢桿菌粉劑主要有效成分不穩(wěn)定，活性成分的保 存期和持效期差，制備工藝單一、陳舊的問(wèn)題，而提供一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿 菌可濕性粉劑及其制備方法。本專(zhuān)利技術(shù)一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑按重量百分比由 50% 70%的芽孢和伴孢晶體混合物、0. 5% 5%的載體、5% 20%的潤(rùn)濕劑、5% 20%的分散劑和 5%的NaCl組成；其中芽孢和伴孢晶體混合物中芽孢與伴孢晶體的 數(shù)量比為0.8 1.2 1，分散劑為普魯蘭多糖。本專(zhuān)利技術(shù)一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑的制備方法按以下步 驟實(shí)現(xiàn)一、取保藏的蘇云金芽孢桿菌接種于LB固體斜面培養(yǎng)基上，在30°C條件下培養(yǎng) Mh，然后再在LB固體斜面培養(yǎng)基上用接種環(huán)挑取菌苔轉(zhuǎn)接于5mL LB液體培養(yǎng)基中，在 30°C條件下，以200r/min的轉(zhuǎn)速搖菌12h，作為蘇云金芽孢桿菌種子菌液；二、將種子菌液 按體積分?jǐn)?shù)為2%接種于50mL發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C條件下，以200r/min的轉(zhuǎn)速搖菌40 50h，直至芽孢脫落量為45% 55%，得到蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵液；三、用lmol/L HCl溶液 將發(fā)酵液調(diào)至PH值4. 5，然后分裝到2個(gè)離心管中，以5000 8000r/min轉(zhuǎn)速離心20min， 然后回收沉淀，得到芽孢和伴孢晶體混合物，芽孢和伴孢晶體的數(shù)量比為0. 8 1. 2 1 ； 四、按重量百分比加入50 % 70 %芽孢和伴孢晶體混合物、0. 5 % 5 %的載體和1 % 5 % 的NaCl，攪拌均勻；五、混勻后按重量百分比加入5% 20%的潤(rùn)濕劑和5% 20%的分散 劑，攪拌均勻，在50 70°C條件下烘干至含水質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3% 4%時(shí)取出，然后研磨，再經(jīng) 過(guò)75 μ m篩，得到一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑；其中，步驟五中分散 劑為普魯蘭多糖。由于普魯蘭多糖良好的成膜特性，更有助于保持蘇云金芽孢桿菌的活性。本專(zhuān)利技術(shù)制備的含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑中蘇云金芽孢桿菌 活芽孢含量8. 0 9. 2X IO9個(gè)/g，pH7. 2 ；通過(guò)75 μ m篩后細(xì)度為99. 9%，而目前國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn)細(xì)度為98% ；懸浮率(即有效含量)72%，高于目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的懸浮率70% ；潤(rùn)濕時(shí)間 為123s，明顯縮短于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)潤(rùn)濕時(shí)間180s ；水分重量百分?jǐn)?shù)3.8%，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為4% ；保 存期6個(gè)月時(shí)用本專(zhuān)利技術(shù)得到的普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑處理，校正死亡率 為96%，蘇云金芽孢桿菌的活性高，而使用其他分散劑制備的蘇云金芽孢桿菌粉劑校正死 亡率僅為90%。本專(zhuān)利技術(shù)將人造沸石、高嶺土或硅藻土作為載體、十二烷基苯磺酸鈉或十二烷基硫 酸鈉作為潤(rùn)濕劑、普魯蘭多糖作為分散劑引入到蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑的制備過(guò)程 中，制備的含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑具有良好的保存期和持效期，添 加新劑型、新助劑和新的填加劑，彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)制備工藝單一、陳舊的缺陷。具體實(shí)施方式本專(zhuān)利技術(shù)技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的 任意組合。具體實(shí)施方式一本實(shí)施方式一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑 按重量百分比由50% 70%的芽孢和伴孢晶體混合物、0. 5% 5%的載體、5% 20%的 潤(rùn)濕劑、5% 20%的分散劑和 5%的NaCl組成；其中芽孢和伴孢晶體混合物中芽孢 與伴孢晶體的數(shù)量比為0.8 1.2 1，分散劑為普魯蘭多糖。具體實(shí)施方式二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是所述的載體為人造沸 石、高嶺土或硅藻土。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一或二不同的是所述的潤(rùn)濕劑為 十二烷基苯磺酸鈉或十二烷基硫酸鈉。其它與具體實(shí)施方式一或二相同。具體實(shí)施方式四本實(shí)施方式一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑 的制備方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、取保藏的蘇云金芽孢桿菌接種于LB固體斜面培養(yǎng)基上， 在30 V條件下培養(yǎng)Mh，然后再在LB固體斜面培養(yǎng)基上用接種環(huán)挑取菌苔轉(zhuǎn)接于5mL LB液 體培養(yǎng)基中，在30°C條件下，以200r/min的轉(zhuǎn)速搖菌12h，作為蘇云金芽孢桿菌種子菌液； 二、將種子菌液按體積分?jǐn)?shù)為2%接種于50mL發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C條件下，以200r/min 的轉(zhuǎn)速搖菌40 50h，直至芽孢脫落量為45% 55%，得到蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵液；三、用 lmol/L HCl溶液將發(fā)酵液調(diào)至pH值4. 5，然后分裝到2個(gè)離心管中，以5000 8000r/min 轉(zhuǎn)速離心20min，然后回收沉淀，得到芽孢和伴孢晶體混合物，芽孢和伴孢晶體的數(shù)量比為 0. 8 1. 2 1 ；四、按重量百分比加入50% 70%芽孢和伴孢晶體混合物、0. 5% 5%的 載體和 5%的NaCl，攪拌均勻；五、混勻后按重量百分比加入5% 20%的潤(rùn)濕劑和 5% 20%的分散劑，攪拌均勻，在50 70°C條件下烘干至含水質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3% 4%時(shí)取 出，然后研磨，再經(jīng)過(guò)75 μ m篩，得到一種含有普魯蘭多糖的蘇云金本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑，其特征在于所述含有普魯蘭多糖的蘇云金芽孢桿菌可濕性粉劑按重量百分比由５０％～７０％的芽孢和伴孢晶體混合物、０．５％～５％的載體、５％～２０％的潤(rùn)濕劑、５％～２０％的分散劑和１％～５％的ＮａＣｌ組成；其中芽孢和伴孢晶體混合物中芽孢與伴孢晶體的數(shù)量比為０．８～１．２∶１，分散劑為普魯蘭多糖。

【技術(shù)特征摘要】

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊峰山，韓德權(quán)，劉春光，李云龍，朱勛，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：黑龍江大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：93[中國(guó)|哈爾濱]