本發明專利技術涉及用于改善從供體器官分離用于后續移植的胰島的生活力和恢復的方法，且更具體涉及使用ｅＩＦ５Ａ ｓｉＲＮＡｓ來增強胰島的生活力。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】相關申請本申請要求2007年3月20日提交的美國申請60/783,414的優先權，該美國申請的全部內容結合到本文中。
技術介紹
朗格罕氏島是胰內含有產生胰島素的細胞的多細胞實體(multi-cellular entity )。通常人含有大約一百萬個朗格罕氏島，這些島含有胰內細胞總數的大約百分之二至三。胰含有朗格罕氏島，所述朗格罕氏島容納產胰島素的P細胞。(3細胞監控血液中的葡萄糖水平，并釋放精確測量的量的胰島素以均衡葡萄糖峰。當超過9 0 %的(3細胞受損時，就發展成為I型和II型糖尿病。胰島與結締基質和剩余的外分泌組織的分開或分離是有利的并且對于實驗室實驗和移植的目的是有益的。對于I型糖尿病的治療，胰島移植是最有希望且生理侵害限度最低的手術。移植胰島而非全部胰組織具有容易移植及涉及消化酶的分泌的供體組織的胰外分泌功能的；肖除的明顯益處。從胰外分泌組織釋放胰島是影響胰島移植的起始且重要的步驟。胰島分離中的重要的目的是為移植提供足夠數目的有生活力的功能性(viable functional)且有效的胰島。"埃德蒙頓方案(Edmonton Protocol)"將健康的胰島移植到糖尿病患者體內。使用埃德蒙頓方案的胰島移植在下述文獻中敘述Shapiro,Ryan, 和 Lakey, Clinical Islet Transplantation_State of the Art,Transplantation Proceedings, 33, pp. 3502-3503 (2001); Ryan等人，ClinicalOutcomes and Insulin Secretion After Islet Transplantation With theEdmonton Protocol, Diabetes, Vol. 50, April 2001, pp. 710-719;和Ryan等人，Continued Insulin Reserve Provides Long-Term Glycemic Control,Diabetes, Vol. 51, July 2002, pp. 2148- 2157。 一旦在肝中，所述細月包就發展血液供給并開始產生胰島素。依賴于所用方法，埃德蒙頓方案可包括7-10個步驟。第一步驟包括向供體胰送遞特定的酶(liberase),其消化所述胰組織，但不消化胰島。消化步驟接下來的是，從胰其它細胞中分離胰島的幾個連續步驟。所述分離的胰島被移植到肝的主血管(稱為門靜脈)中。當被損壞時，肝能夠自我再生，構造新的血管和支持組織。因此，當胰島被移植到肝中時，相信新血管生成以支持胰島。所述細胞產生的胰島素通過這些周圍血管被吸收到血流中并分布到全身以控制血液中的葡萄糖水平。總而言之，埃德蒙頓方案的步驟產生了 一個危及胰島生活力(viability)的有力的方法，其中的胰島具有脆弱的、三維的結構并需要大量的氧以維持生長和生活力。在此方法中，由于氧送遞的非最佳條件，胰島可被損害或破壞，從而影響從給定供體胰回收的健康胰島的得率。而且，胰島移植被供體的可用性嚴重地限制了；通常，在僅僅一個患者中，要求兩個胰以獲得胰島素的獨立性。胰島移植與無類固醇的非致糖尿病的免疫抑制療法一起已經被用于治療I型糖尿病患者。然而，這樣的治療可導致增加的高脂血癥和高血壓的風險，且長期的研究證明胰島生活力被損傷。因此，需要在收獲過程期間保護胰島細胞免于凋亡的方法。本專利技術滿足了這種需要。專利技術概述本專利技術提供用于在供體收獲過程期間抑制胰島細胞遭受凋亡的方法，該方法包括在胰島分離前將elF5A siRNA施用于胰島細胞供體的胰島細胞，其中所述elF5AsiRNA抑制胰島細胞中elF5A的表達并因此抑制胰島細胞中的凋亡。任何siRNA或反義構建體是可應用的，只要這樣的構建體抑制elF5A的表達。優選的siRNA包含核苷酸序列AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT 。siRNA的施用可通過任何合適的途徑。示例施用方法包括通過胰島細胞供體的門靜脈的灌注(perfusion)和通過胰島細胞供體的門靜脈的流體動力灌注(hydrodynamic perfusion )。本專利技術同樣提供了抑制胰島細胞中elF5A表達的方法，包括將elF5AsiRNA施用于胰島細胞，其中所述elF5A siRNA抑制胰島細胞中elF5A的表達。本專利技術的另 一 實施方案提供抑制收獲的胰島細胞中的凋亡的方法，包括將elF5A siRNA施用于所述胰島細胞，其中所述elF5A siRNA抑制胰島細胞中elF5A的表達，并且其中所述elF5A表達的抑制抑制凋亡。本專利技術也提供了抑制胰島細胞中的凋亡的組合物，包括elF5AsiRNA,其中所述siRNA抑制elF5A的表達且因此抑制胰島細胞中的凋亡。優選的組合物包括包含核苷酸序列AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT的elF5AsiRNA。附圖簡述附圖說明圖1給出在通過門靜脈灌注elF-5A siRNA之后的為p-肌動蛋白、mAAT和elF5A進行的RT-PCR結果。本圖表明elF5A表達是可測量的且因此摻入到了胰島中。圖2表明慢逆行門靜脈灌注。為預備結(深色縫合線(suture))準備的膽管(透明的)和門靜脈(紅)。針在結的下方進入(箭標表示的方向)，穿過結的下方并且向血管釋放siRNA,血管可以達到胰、脾、腸和三分之一的遠端結腸。圖3表明將elF5AsiRNA灌注到胰島中，引起elF5A表達的減少(所示為elF5A的mRNA水平的減小)。圖4表明相比于對照和鹽水處理的胰島(此處每組11=2),用elF5siRNA處理的胰島細胞的凋亡的減小。圖5表明相比于對照和鹽水處理的胰島(此處每組n=3),用elF5s i RN A處理的胰島細胞的凋亡的減小。圖6給出與elF5A2比對的人elF5Al的核芬酸序列。圖7給出elF5A2比對的人elF5Al的氨基酸序列。圖8給出具有示例性反義寡核苷酸的人elF5A的核苦酸序列。圖9給出具有示例性反義寡核苦酸的人elF5A的核苦酸序列。圖10A和B給出具有示例性siRNAs的人elF5A的核苷酸序列。圖11給出具有示例性siRNAs的人elF5A的核苷酸序列。專利技術詳述前文已表明，siRNA摻入胰島中能夠通過逆行門靜脈接種經由胰灌注完成。見Bradley，等人，Transplantation Proceedings, 37, 233-236, 2005。簡單地，用Lipofectamine 2000包裹的或未包裹的Cy-3標記的荄光素酶(Luciferase) (Luc) siRNA GL2雙鏈體均可使用，且通過尾,爭脈(體內，每只小鼠50 pg)注射或直接通過逆行門靜脈接種(原位，每只小鼠2 pg)進入胰。在原位送遞(delivery)后24小時，或體內送遞后4小時，獲取胰并且在4。C下貯藏，并且胰島被分離并在檢查前再培養16小時。為使siRNA分布可見，將胰針對胰島素進行染色并在熒光顯微鏡下檢查。分離的胰島直接在熒光顯微鏡下檢查。未包裹的siRNA達到胰島的程度類似于使用脂質體包裹的siRNA觀察到的，與所謂的體內"棵"-siRNA送遞的報告一致。Lewis等人，Nat. Ge本文檔來自技高網...
【技術保護點】
用于在供體收獲過程期間抑制胰島細胞遭受凋亡的方法，包括在胰島分離前將ｅＩＦ５Ａ ｓｉＲＮＡ施用于胰島細胞供體的胰島細胞，其中所述ｅＩＦ５Ａ ｓｉＲＮＡ抑制胰島細胞中ｅＩＦ５Ａ的表達且因此抑制胰島細胞中的凋亡。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：JE湯普遜，CA迪納雷洛，
申請(專利權)人：森尼斯科技術公司，
類型：發明
國別省市：US[美國]
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