針對β淀粉樣肽的人源化抗體制造技術

本發明專利技術公開了分離的抗體，其選擇性地結合Ａｂｅｔａ的Ｃ－末端部分，并且是人源化的或完全人類的。本發明專利技術的抗體能夠防止Ａｂｅｔａ的寡聚化。此外，公開了診斷的方法，其包括步驟：（ｉ）標記抗體；（ｉｉ）向受試者鼻內地或全身地施用有效劑量的所述抗體；和（ｉｉｉ）檢測所述受試者的身體部分中所述標記的抗體的濃度和／或存在。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及抗體技術的領域，更具體地涉及針對β -淀粉樣肽的人源化抗體的領 域。
技術介紹
阿爾茨海默氏病(AD)是年齡相關的神經變性失調，在2006年其影響了 2660萬 人。一些預測預計，到2050年，發病率將是四倍，到時，在世界范圍內每85人中有1人將患 有該疾病(Brookmeyer et al. (2007))。AD自身顯現為漸進性的認知缺陷，例如記憶喪失 和認知能力的降低。AD的病理的中心是腦部β -淀粉樣肽(Abeta)的積累。Abeta是淀粉樣前體蛋白 質(APP)的裂解產物，其在淀粉樣變性途徑中首先被分泌酶、然后被Y分泌酶相繼裂 解。產生的Abeta片段具有可變的大小，而40個氨基酸的肽(Abeta4ci)是最豐富的種類，42 個氨基酸的肽(所謂的Abeta42)被認為是最有害的種類。Abeta可以在腦的細胞外隙中積 累，在此它在多步驟的過程中聚集，形成神經毒性寡聚體，最后與其他物質一起產生淀粉樣 斑塊，其是阿爾茨海默氏病的典型標志。治療阿爾茨海默氏病的有前景的臨床免疫學方法是被動免疫，在其中，針對Abeta 的抗體被施用給受試者來從腦從除去Abeta。已經提出了通過抗Abeta抗體的三種不同 但不互相排斥的Abeta清除機制(1)纖維狀Abeta向較低毒性形式的催化轉化(Bard et al. (2000) ；Bacskai et al. (2001) ；Frenkelet al. (2000)) ； (2) Abeta 沉積的調理作 用，引起小膠質細胞吞噬作用(Bardet al. (2000) ；Bacskai et al. (2002) ；Frenkel et al. (2000)；和(3)促進Abeta從腦向循環的流出(DeMattos et al. (2001))，所謂的外周 沉沒假說。蘇黎士大學的Mohajera等人(2004)和Gaugler等人(2005)產生了針對Abeta 的小鼠抗體，并研究了單克隆鼠抗Abeta抗體在體內的生物活性。然而，當施用給人類時，鼠抗體常常產生免疫原性。引發的抗球蛋白反應限制了鼠 抗體的臨床實用性(Miller et al. (1983) ；Schroff et al. (1985))。因此，需要新的、非免疫原性的和有效的抗體，用于Abeta相關疾病、特別是阿爾 茨海默氏病的治療和/或診斷
技術實現思路
因此，本專利技術的一般目的是提供特異性結合Abeta (特別是Abeta的C-末端部分) 的且被人類免疫系統良好地耐受的抗體。在第一個方面，本專利技術提供了分離的抗體，其選擇性地在C-末端區域與Abeta結 合，特別是氨基酸30到40 (SEQ ID NO :26)之間，并且是人源化的或完全人類的。所述抗 體展示了對Abeta42和Abeta4ci的高親和力，此外，在體內基本上不識別淀粉樣前體蛋白質 (APP)。所謂的人源化抗體的優點在于它們引發人類免疫系統的一般是最小的反應、或沒有反應的能力，因而可以被認為是在人類施用時是低免疫原性的或非免疫原性的。因而，與 鼠抗體相反，人源化的抗體適合于治療目的和臨床應用。術語“人源化”是指降低異種抗體的免疫原性的公認的技術。人源化抗體被遺傳工 程化，從而存在盡可能少的非人類結構。一種策略是基于異種抗體的互補決定區(CDR)移 植到人類接受體框架的可變輕鏈VL和可變重鏈VH上。在另一種策略中，異種抗體的框架向 人類框架突變。在兩種情況中，抗原結合部分的功能的保存是關鍵的。為了這個目的，例如， 通過使用技術人員公知的分子建模的計算機程序，分析親本序列和各種概念上的人源化產 物的三維模型。所述分析，除其它之外例如允許鑒定可能直接或間接涉及抗原結合的框架 殘基。通常，少量的供體框架殘基對于抗原結合是重要的，因為它們進入與抗原的直接接 觸，或者它們影響特定CDR的構象(Davies et al (1990) ；Chothia et al (1987))。因此，如 果尚不存在，希望的是朝著被鑒定為對于抗原結合重要的那些供體框架殘基來突變相應的 接受體框架殘基。還可能的是，人源化抗體包含既不在體內的人類種系全集(repertoire) 中、也不在供體CDR或甚至供體框架中存在的殘基。抗體的人源化的程度可以通過計算人源化抗體的框架與原始人類接受體框架的 序列同一性百分比來表明，所述原始的人類接受體框架被用于產生人源化抗體并且是可從 人類文庫獲得的。優選的，本專利技術的抗體包含與可從人類文庫獲得的框架具有至少60%的 同一性、(按以下順序)更優選至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %和最優選95 %或 甚至100%同一性的框架。在本專利技術的上下文中，術語“互補決定區”或“⑶R”是指構成由 Kabat et al. (1991)所定義的抗原結合環體的、抗體的互補決定區。本專利技術的⑶R和框架 殘基根據Kabat (Kabat et al. (1987))的定義來確定。在此使用的術語“抗體”是指全長抗體，例如單克隆抗體，以及具有對選定抗原足 夠的結合能力的其任何抗原結合片段或單鏈。本專利技術涵蓋的抗原結合片段的實例包括Fab 片段、F(ab' ) 2片段、Fd片段、Fv片段；單結構域或dAb片段、分離的互補決定區(CDR)； 可任任選地通過合成的接頭連接的兩個或更多個分離的CDR的組合以及單鏈可變片段 (scFv)。“全長抗體”包括嵌合抗體，其中一個來源的抗原結合可變域聯結到不同的來源的 恒定域，例如，鼠抗體的可變域Fv結合到人類抗體的恒定域Fe。以上例舉的抗體片段使用本領域普通技術人員已知的常規技術獲得，與完整抗體 一樣來篩選所述片段的有用性。在本專利技術中，CDR來自單克隆的小鼠抗體22C4(Moha jeri et al. (2002), J. Biol. Chem. 277, pp. 33012-33017 and Neurodegenerative Dis. 1(2004), pp. 160-167)。所述鼠抗 體針對Abeta的C-末端部分，更具體地針對氨基酸30到40之內的表位(SEQ ID NO 26)。在優選的實施方式中，所述抗體通過與它的目標結合來阻止Abeta、特別是 Abeta40和/或Abeta42的寡聚化。本專利技術提供了包含一個或更多個互補決定區(OTR)序列的抗體，所述互補決定區 序列具有與由 SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO 5 和 SEQ ID NO :6構成的組的序列的至少80%的同一性。如已經提及的，本專利技術的CDR，即，SEQID NO =USEQ ID NO :2、SEQ IDNO :3、SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :6，可以移植到適合的接受體框架中。術語“框架”是指存在于更為趨異的CDR區域之間的、抗體可變區的本領域公認的部分。這樣的框架區域一般被稱為框架1到4(FR1、FR2、FR3和FR4)，提供了將重鏈和輕鏈抗體可變區內存在的三個 CDR保持在三維空間中的支架，從而所述CDR可以形成抗原結合表面。適合的接受體框架優 選的是免疫球蛋白衍生的抗原本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種分離的抗體，其選擇性地結合Ａｂｅｔａ的Ｃ－末端部分，并且是人源化的或完全人類的。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：S埃韋爾特，A奧弗德毛爾，S凱特波伊爾，R尼奇，
申請(專利權)人：德勒尼克斯治療股份公司，蘇黎世大學，
類型：發明
國別省市：CH[瑞士]