本發明專利技術提供了用于執行測定、以確定樣品中被分析物的存在和／或對其進行定量的裝置和方法。將被分析物與優選固定化在顆粒上的標記物混合，以提供均質溶液。任選地，可以使均質溶液流過濾器。均質溶液或濾液可以受控的流速計量流過讀取區，可以檢測標記物的存在或顆粒的存在。本發明專利技術的方法和裝置不需要使用捕獲區。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】專利技術人埃曼努埃爾·姆波克(Emmanuel Mpock)和威爾瑪·曼甘(WilmaMangan)。 專利
本專利技術涉及用于定性或定量測定流體樣品中一種或多種被分析物的存在的測試 試劑盒和裝置。
技術介紹
典型情況下，免疫測定方法導致信號標記物在結合在特異性結合對成員的復合物 中的信號標記物與未結合的信號標記物之間分配。結合與未結合信號標記物之間的差異， 可能是結合與未結合信號標記物的物理分離或可檢測信號在結合與未結合信號標記物之 間調節的結果。通過觀察在一個或多個捕獲區積累的標記物的圖式，并將圖式與樣品中被 分析物的量相關聯，來進行定量。測定的結果通過電磁手段、特別是光投射穿過檢驗條來確 定。類似地，在典型的夾心測定形式中，將樣品與用于被分析物的標記的特異性結合 對成員混合，并允許其橫越側向流基質，通過位于基質上的一個或多個捕獲區。如果樣品中 存在被分析物，標記的特異性結合對成員將與被分析物結合，得到的被分析物-標記的復 合物將被運送到并通過捕獲區。被分析物與標記的特異性結合對成員之間復合物形成的程 度，與樣品中存在的被分析物的量直接成比例。在每個捕獲區上固定化有能夠結合被分析 物-標記復合物的第二特異性結合對成員。該第二特異性結合對成員不能結合標記的特異 性結合對成員，除非后者與被分析物結合。因此，積累在捕獲區上的標記的特異性結合對成 員的量，與樣品中存在的被分析物的量直接成比例。典型的側向流裝置是硝酸纖維素條。將樣品施加到施用區，所述樣品從那里通過 毛細作用流過含有對被分析物特異的可視標記的抗體的區域。游離和結合的標記物繼續遷 移到捕獲區，固定化的特異性針對被分析物的抗體在捕獲區與被分析物_標記物復合物相 結合。游離的標記物(未結合抗體)繼續遷移，在捕獲區中留下被分析物特異性信號。被 分析物-標記物復合物的捕獲由固定化的試劑介導，該試劑典型為特異性針對被分析物的 抗體。例如，EP653625公開了側向流測定檢驗條，在檢驗條上特定標記物的結合程度使 用測定讀取器光學測定。美國專利No. 7，239，394公開了用于檢測標記的被分析物/試劑 復合物與固定化在側向流測定棒檢測區中的特異性結合試劑的結合的讀取器，在側向流測 定棒上讀取器檢測積累在檢測區中的標記物的信號。國際專利申請公開W000/20866公開了用于測定被分析物的裝置，包含標記物能 夠在其中與被分析物結合的標記區，與捕獲區連通，其中捕獲區的孔徑使得沒有與被分析 物結合的標記物能夠遷移過去，而與被分析物結合的標記物不能。因此，在從標記區向捕獲 區的遷移過程中，未結合的標記物能夠進入并通過捕獲區，而結合的標記物將被捕獲在標 記區與捕獲區的接合處。因此，該公開物公開了使用減小的孔徑用于條上的固定化而不是使用常規的免疫捕獲技術。這些方法要求將被檢測的標記物固定化在檢測區中。這并不總是方便的，并增加 了測定系統的復雜性。因此，對于不使用固定化區域來檢測標記的復合物，存在著需求。專利技術簡述本專利技術提供了不需捕獲區進行測定的裝置和方法。本專利技術的方法和裝置比傳統方 法更加耐用和可靠；減少了測定時間；增加了數據的準確性；為使用微量被分析物濃度進 行定量測定提供了更好的控制；并改進了可制造性，具有最小的批次間差異。本專利技術的方法和裝置提供了被分析物與用于被分析物的標記的特異性結合對成 員的混合，以提供均質的溶液。可以使由此獲得的均質溶液以恒定的流速流過讀取點。結 合的被分析物/標記物復合物可以使用比色計、電學手段或本
已知的其他方法來 檢測。在參考了下面的詳細描述之后，本專利技術的這些以及其他方面將變得明顯。此外，在 本文中提出了多個參考文獻，它們更詳細地描述了某些步驟或組成，因此以其全文引為參考。附圖說明圖1顯示了本專利技術的一次性條的透視圖。圖2顯示了不使用捕獲區的微粒的檢測。圖2A顯示了使用Avie Alc計量器X7 作為檢測器測量的作為時間函數的信號的圖。圖2B顯示了使用Avie Alc計量器X8作為 檢測器測量的作為時間函數的信號的圖。圖2C顯示了使用Avie Alc計量器X9作為檢測 器測量的作為時間函數的信號的圖。詳細描述本文引用的所有出版物、專利和專利申請，無論是見上文還是見下文，在此都以其 全文引為參考。除非另有說明，否則在本申請包括說明書和權利要求書中使用的下列術語，都具 有下面給出的定義。必須指出，說明書和隨附的權利要求書中使用的單數形式包括了復數 指稱物，除非上下文明確表明不是這樣。在本文中使用的術語“對象”包含哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物的例子包括 但不限于哺乳綱的任何成員人類，非人類靈長動物例如黑猩猩，以及其他猿和猴物種；農 場動物例如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家養動物例如兔、狗和貓；實驗室動物包括嚙齒動物，例 如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳動物的例子包括但不限于禽類、魚等。該術語不指稱具體的 年齡或性別。本文中使用的術語“抗體”包括但不限于基本上由免疫球蛋白基因或多個免疫球 蛋白基因或其片段編碼的、特異性結合和識別被分析物(抗原)的多肽。“抗體”也包括但 不限于基本上由免疫球蛋白基因或多個免疫球蛋白基因或其片段編碼的、特異性結合和識 別由宿主對暴露于毛滴蟲抗原做出響應所產生的抗體的抗原特異性結合區(獨特型)的多 肽。例子包括多克隆、單克隆、嵌合、人源化和單鏈抗體等。免疫球蛋白片段包括Fab片段 和由表達文庫、包括噬菌體展示所產生的片段。對于抗體的結構和術語，參見例如Paul的 《基礎免疫學》(第三版)(Fundamental Immunology, 3rdEd.), 1993, Raven Press, NewYork0術語“與…特異性結合”或“與…發生特異性免疫反應”是指在存在蛋白和其他生 物物質的異源群的情況下，對靶被分析物的存在具有鑒別性的結合反應。因此，在指定測定 條件下，特異性結合部分優選與特定靶被分析物結合，并且不以顯著的量與測試樣品中存 在的其他成分結合。在這樣的條件下與靶被分析物的特異性結合，可能需要選擇對特定靶 被分析物具有特異性的結合部分。可以使用多種免疫測定形式來選擇與特定抗原發生特異 性免疫反應的抗體。例如，固相ELISA免疫測定方法通常被用于選擇與被分析物發生特異 性免疫反應的單克隆抗體。對于可用于確定特異性免疫反應性的免疫測定形式和條件的描 述，參見 Harlow 和 Lane (1988)的《抗體實驗指南》(Antibodies，A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Publications, New York。典型情況下，特異性或選擇性反應將提供 至少兩倍于背景、更典型比背景高10到100倍以上的信噪比。本文中使用的術語“標記物”和“可檢測標記物”是指能夠檢測的分子，包括但不限 于放射性同位素、熒光劑、化學發光劑、發色團、酶、酶的底物、酶的輔助因子、酶的抑制劑、 發色團、染料、金屬離子、金屬溶膠、配體(例如生物素、親和素、鏈親和素或半抗原)等。本文中使用的“固相支持物”是指固相表面例如塑料板、磁珠、乳膠珠、微滴定板的 孔、玻璃板、尼龍、瓊脂糖、丙烯酰胺等。在指稱兩種分子或一種分子與分子復合物的結合時，“特異的”是指一種對另一種 的特異性識別以及穩定復合物本文檔來自技高網...
【技術保護點】
用于檢測樣品中的被分析物的方法，所述方法包括：將含有被分析物的樣品與反應物混合，其中獲得了均質溶液；以及將均質溶液流過檢測區，并檢測溶液中的顆粒。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：埃曼努埃爾C姆波克，威爾瑪曼甘，
申請(專利權)人：MEC戴內米克公司，
類型：發明
國別省市：US
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