凍干甲型肝炎-水痘減毒聯合疫苗及其生產方法技術

本發明專利技術提供一種凍干甲型肝炎－水痘減毒聯合疫苗及其生產方法，聯合疫苗具有與其單價疫苗同樣良好的安全性和免疫原性，可有效地預防甲型肝炎和水痘。一次免疫接種即可有效地預防兩種疾病，可以降低疫苗成本、提高疫苗接種效率、減少多次注射所帶來的不良反應，可以減少疫苗接種次數而達到預防多種疾病的目的。

【技術實現步驟摘要】
本專利技術提供一種凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗，本專利技術還提供了 上述聯合疫苗的制備方法，以及所說的聯合疫苗的保護劑，屬于疫苗制備

技術介紹
預防性疫苗在全球范圍內的應用使傳染病得到了有效控制，大大降低 了許多常見傳染病的發病率和死亡率。隨著分子生物學、細胞生物學等相 關學科的飛速發展，新疫苗不斷地被研究和開發。但是，疫苗種類增多必 將伴隨一系列問題，兒童接種次數增加，疫苗管理也較困難。每個兒童在其學齡前的7年時間中，大約需要去接種疫苗的診療所多達20余次。這 不僅大大增加了兒童接種疫苗的皮肉之苦和增加了產生疫苗副反應的機 會、對醫務工作者和兒童的家長帶來了不便，而且也相應地增加了疫苗的 使用和管理方面的困難，容易造成漏種等，直接影響到預防效果。因此， 聯合免疫的方法不僅被普遍使用，而且越來越受到重視。聯合疫苗為兒童 免疫規劃的連續、簡化和擴大所必需。自1991年由聯合國兒童基金會和世 界衛生組織等國際組織發起并推廣兒童疫苗計劃(CVI)以來，世界上 許多從事疫苗研究與開發的實驗室和公司都在致力于聯合疫苗的研制。由于水痘減毒活疫苗是唯一獲準用于預防人類皰疹病毒感染的疫苗， 且甲型肝炎滅活疫苗與水痘減毒活疫苗存在免疫針次和程序上的沖突，故 而進行凍干甲型肝炎_水痘減毒聯合疫苗研究首選采用甲型肝炎減毒活疫苗。目前，獲得批準上市的甲型肝炎減毒活疫苗只有中國的L一A — 1減毒 株和H2減毒株，國外的減毒疫苗仍處于研究階段。迄今尚未見使用活的減毒甲型肝炎疫苗病毒生產凍干甲型肝炎一水痘 減毒聯合疫苗的報道。
技術實現思路
本專利技術提供一種凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗，具有多聯多價的、 耐熱穩定的特點。本專利技術還提供一種凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗的制備方法，適 用工業化生產。本專利技術公開的凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗，含有甲型肝炎減毒 活病毒、水痘減毒活病毒和保護劑。其中所說的甲型肝炎減毒活病毒是甲型肝炎減毒活病毒L-A-1疫苗株， 病毒滴度不低于6.5LogCCID5。/ml;水痘減毒活病毒是水痘減毒活病毒OKa 疫苗株，病毒滴度不低于4000PFU/ml。用于凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗的保護劑成分及濃度為海藻 糖30—100g/1、右旋糖酐10—60g/1、谷氨酸鈉5—10g/1、抗壞血酸l一3g/1、 尿素5—20g/1，甘露醇3 — 10g/l或山梨醇3 —15g/l。還有以下原料L-精氨酸為0—3g/1。 本專利技術聯合疫苗的制備方法，包括以下步驟1)分別提供并混合甲型肝炎減毒活疫苗病毒原液和水痘減毒活疫苗病 毒原液，得到甲型肝炎減毒活病毒和水痘減毒活病毒的混合液；2) 在步驟1)中得到的混合液中加入保護劑并混勻，得到甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗混合液；3) 冷凍干燥步驟2)中得到的含有保護劑的聯合疫苗混合液，得到凍 干甲型肝炎 一 水痘減毒聯合疫苗。具體步驟如下制備凍干保護劑，首先按所示濃度將下列成分溶解于37i:注射用水中 (lOOOml):谷氨酸鈉65-130g、抗壞血酸13-40 g、尿素65-260g、 L-精 氨酸0-40g、山梨醇40-130 g和(或)甘露醇40-195g，并用0. 1NHCL調整 PH值至7. 0。經0. 22Mm濾膜過濾除菌后得到保護組分A。然后稱取海藻糖500. 0g溶解于溫度為37。C左右注射用水補至1000ml， 經0. 22to濾膜過濾除菌后得到保護劑組分B。最后再將300. 0g右旋糖酐40溶解于溫度約為37'C注射用水補至 1000ml，經116。C高壓蒸汽滅菌40分鐘后得到保護劑組分C。可以通過簡單的機械混合方法，制備本專利技術的甲型肝炎一水痘減毒聯 合疫苗混合液。按照1: (l 2) (V/V)的比例將病毒滴度為大于 7. OLogCCID5。/ml的甲型肝炎疫苗原液與病毒滴度為大于6000PFU/ml的水 痘疫苗原液混合，然后再加入凍干保護劑，輕輕混合均勻。使用作為疫苗稀釋液的199綜合培養液稀釋至聯合疫苗中各組分所需 含量或濃度，即得到甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗混合液。冷凍干燥分裝好的上述混合液，其條件是一3(TC至一55'C低溫條件 預冷凍3至7小時，一3(TC至35。C條件下真空干燥8至16小時。與凍干前相比，凍干后甲型肝炎疫苗病毒滴度雖稍有下降，但下降幅度不大于0. 5LogCCIDM/ml，水痘下降不大于0. 5 LogPFU5Q/ml。按照世界衛生組織(WHO)及國家藥品監督管理局(SDA)有關聯合疫 苗及凍干制劑制檢規程及質量標準要求，對本專利技術所提供的聯合疫苗進行 全面檢定，其結果各項質量指標均達到或超過世界衛生組織(WHO)及國家藥 品監督管理局(SDA)所規定的制檢規程要求。其中甲型肝炎病毒滴度為不 低于6. 5 LogCCID5G/ml，水痘病毒滴度為不低于4000FPU/ml。聯合疫苗中組分間相互干擾作用研究將凍干甲型肝炎疫苗復溶液體和凍干水痘疫苗復溶液體混合，感染2BS細胞，檢測病毒滴度。將同一批次制得的凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗、凍干甲型肝炎疫苗和凍干水痘疫苗分別感染2BS細胞，檢測病毒滴度。目的是檢測混合后甲型肝炎和水痘兩種活性病毒在同一個環境下有無相互促進、競爭或抑制等作用。甲型肝炎病毒滴度檢測方法采用了熒光染色法，水痘病毒滴度檢測方法采用了微量細胞病變法。試驗結果見表1，聯合疫苗中病毒滴度與單價苗一致。表明聯合疫苗中活性組分甲型肝炎病毒和水痘病毒無相互促進或抑制現象。表l水痘、甲型肝炎原液混合后病毒滴度與其單價疫苗原液病毒滴度的比較<table>table see original document page 7</column></row><table>凍干甲型肝炎疫苗20070626-2 7.33凍干水痘疫苗20070626-5 4.0凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗20070821-3 3.75 6.67凍干甲型肝炎疫苗20070821-2 6.5凍干水痘疫苗20070821-5_^_凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗20070920-3 3.75 7.0凍干甲型肝炎疫苗20070920-2 7.0凍干水痘疫苗_20070920-5_^_同步混合感染HAV和VZV的標本電鏡檢査顯示，HAV感染29天左右, 達到增殖最高峰。感染VZV2天后,細胞內可見到少量無包膜的VZV,增殖 高峰期出現在8天。混合感染HAV 、 VZV與單獨感染HAV和VZV的電 鏡檢測結果無明顯差異。結果見圖l。 聯合疫苗穩定性試驗三批聯合疫苗及其單價疫苗組分別放置37°C 3天、7天、9天、13天 或7天、9天，取出3-5支樣品混合，以37放置前的疫苗樣品作為實驗 對照組，滴定甲型肝炎和水痘，方法為上述的熒光染色法和微量細胞病變 法。37'C放置3天后的甲型肝炎病毒滴度下降不高于0.5 Lg。水痘減毒活 病毒37。C放置7天后滴度下降不高于1.0Lg。結果見表2、表3，符合規定 要求。表2凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗甲型肝炎病毒穩定性試驗結果_Lot 0 3 7 9 1320070920-3 7.0 6.67 6.67 6.5 6.5表3凍干甲型肝炎一水痘減毒聯合疫苗水痘病毒穩定性試本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種凍干甲型肝炎－水痘減毒聯合疫苗，含有甲型肝炎減毒活病毒、水痘減毒活病毒和保護劑。

【技術特征摘要】
1. 一種凍干甲型肝炎-水痘減毒聯合疫苗，含有甲型肝炎減毒活病毒、水痘減毒活病毒和保護劑。2、 根據權利要求1的聯合疫苗，其中所說的甲型肝炎減毒活病毒是甲型肝炎減毒活病毒L-A-1疫苗株；水痘減毒活病毒是水痘減毒活病毒OKa疫苗株。3、 根據權利要求1的聯合疫苗，特征在于所說的甲型肝炎減毒 活病毒滴度不低于6.5LogCCID5。/ml;水痘減毒活病毒滴度不低于 4000PFU/ml。4、根據權利要求1的聯合疫苗，其特征在于保護劑的成分及濃度 為海藻糖30 — 100g/1、右旋糖酐10—60g/l、谷氨酸鈉5 —10g/l、抗 壞血酸l一3g/1、尿素5—20g/1，甘露醇3 —10g/l或山梨醇3 —15g/l。5、 ...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙曉琳，劉令九，劉景曄，付煒，王文忠，屈翠波，王瑋，李育紅，李淑焱，蔡暉，梁本，李莉，
申請(專利權)人：長春生物制品研究所，
類型：發明
國別省市：82[中國|長春]