本申請公開了用于增強植入前哺乳動物胚胎的發育以及增強體外受精的哺乳動物胚胎的活產潛能的方法和組合物。在植入前哺乳動物胚胎中激活過氧化物酶體增殖物激活物受體δ（ＰＰＡＲδ）的體外方法包括將胚胎培養在胚胎培養基中，胚胎細胞中的ＰＰＡＲδ的表達一旦開始或開始后，通過向所述培養基中加入有效結合ＰＰＡＲδ的量的ＰＰＡＲδ配體來激活ＰＰＡＲδ，以阻止培養的胚胎的細胞中的凋亡和或加強培養的胚胎的細胞的增殖。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】本專利技術主要涉及用于體外培養哺乳動物胚胎和增強培養的胚胎在 適合的哺乳動物宿主的子宮中植入后懷孕的成功率的組合物和方法。相關技術的描述過氧化物酶體增殖物激活物受體(PPAR)是一組配體激活的轉錄 因子。它具有三禾中同禾中型PPARoc、 PPARy禾口 PPAR5(也稱為PPARp)。 這三種PPARs屬于核受體超家族(Mangelsdorf等，1995)，該家族包 括了甾體激素受體、甲狀腺激素受體、類視色素(retinoid)受體和數 量不斷增加的孤兒受體。在與PPAR反應基因的啟動子中的PPAR反 應元件結合之前，結合了 PPAR的配體首先與RXR (它是類視色素受 體亞家族的成員)形成異源二聚體。(Willson等，2000; Berger等， 2002)。由于它們的組織特異性分布及其天然的配體，暗示了 PPARoc和 PPARy在能量動態平衡和炎癥反應中的功能(Hihi等，2002; Wahli 2002) 。 PPARa主要存在于肝臟、褐色脂肪組織和骨骼肌中；PPARY 主要存在于脂肪組織、巨噬細胞和結腸中。PPARoc和PPARy的天然配 體包括多不飽和脂肪酸(例如花生四烯酸和亞油酸)、白三烯B4 (花 生四烯酸通過脂氧化酶途徑的產物)、氧化型低密度脂蛋白、9-和13-羥基十八碳二烯酸、以及可能有15 -前列腺素J2 (Forman等，1997)。 合成的PPARoc和PPARy配體被用于治療脂類和葡萄糖紊亂苯氧酸類 (fibric acid) 、 PPARa配體，是一種降脂藥物；噻唑垸二酮、PPARy 配體，是一種胰島素(Berger等，2002)。4盡管PPAR5的天然配體的身份還是一個謎(Braissant等，1998)， 通過合成的PPARS配體和具有靶定的PPARS功能的小鼠模型，已經 揭示了 PPAR5的多種生物學功能(Peters等，2000; Barak等2002)。 被報道的PPAR5的功能包括脂類動態平衡(Forman等，1997)、子宮 內膜感受性(Lim等，2000; Ding等，2003)、炎癥(Lee等，2003)、 創傷愈合(Michalik等，2001; Wahli 2002)、腦的髓鞘形成(Peters 等，2000)以及對脅迫的抗性(Hao等，2002)。此外，PPAR5還涉 及到結腸癌(Gupta等，2000; Cutler等，2003)。環前列腺素(PGI2)是一種推測的PPARS的天然配體。在子宮的 植入位點共表達高水平的PGl2和PPARS信息(message) (Lim等， 1999) 。 PGl2類似物或合成的PPAR5配體在環加氧酶-2靶向的小鼠中 恢復了失去的子宮內膜感受性(Lim等，1999; Lim等，2000)。在不 表達PGl2受體的腎髓細胞中，伴隨著PPAR5反應元件的活性的增加而 增加的PGI2的產生促進了它們在高滲環境壓力下的存活(Hao等， 2002)。最后，PGl2是抑制PG合成的非甾類抗炎藥物和防止結腸癌之 間的可能的聯系(Gupta等，2000; Cutler等，2003)。植入前胚胎的體內發育受到一種協調的程序的促進，所述程序涉 及來自輸卵管和子宮的可溶性因子(Yeimg等，1992)。環前列腺素 (PGI2)、由輸卵管和子宮通過環加氧酶-2 (COX-2)途徑產生的一種 因子，在胚胎發育和完成中發揮了關鍵性的作用(Huang等，2004a; Huang等，2004b; Huang等，2003; Lim等，1999)。與體內胚胎發 育相比，培養的胚胎諸如體外受精(IYF)的胚胎的發育被延遲了，因 為培養的胚胎被剝奪了輸卵管的保護性環境(Hardy, 1997)。我們最 近的工作顯示出在培養基中添加一種PGl2的穩定類似物伊洛前列素， 在體外增強了小鼠胚泡的孵化(Huang等，2003)。此外，用伊洛前列 素預先處理的胚胎在轉移到妊娠載體時顯示出增強的植入和活產能 力(Huang等，2004b)。除了輸卵管和子宮之外，PGl2的一個來源是 植入前胚胎。通過用選擇性COX-2抑制劑阻斷內源PGl2的產生，延遲5了胚胎的孵化(Huang等，2004c)。因此，PGI2對于胚胎的體外發育 來說是關鍵的，它的穩定的類似物有效地促進培養的胚胎的孵化和植 入。盡管植入前的胚胎表達PGl2受體并具有功能性蛋白激酶A，但PGl2 類似物不增加它們的cAMP水平(Huang等，2003)。尚不清楚PGI2 及其類似物是如何實現這些增強的。PGb通過與G蛋白偶聯的前列腺素受體(IP)和/或過氧化物酶體 增殖物激活物受體5 (PPAR3)的結合發揮其效應(Forman等，1997; Namba等，1994) 。 PGl2抑制血小板凝集和平滑肌細胞的松弛是由IP 受體通過環AMP依賴性的激酶(PKA)途徑來介導的(Namba等，1994)。 PPARS通過PGl2參與細胞的保護(Adderley和Fitzgerald, 1999; Hao 等，2002; Tan等，2001)。無IP小鼠有增加的血栓形成的傾向(Cheng 等，2002);無PPARS小鼠表現出生殖缺陷(Barak等，2002; Cheng 等，2002)。以前已經報道，在添加了 PGl2類似物的培養基中培養的胚胎顯示 出增強的孵化(Huang等，2003)、植入和活產(Huang等，2004; 題目為通過在培養基中添加前列腺素或前列腺素類似物增強體外胚 胎發育的方法和組合物(Method and Composition for Enhancing / Embryo Development by Supplementing Culture medium with Prostaglandin or a Prostaglandin Analog ) 的國際專禾U申if PCT/US2004/029167 (Huang等)；以及題目為增強哺乳動物的胚胎 發育(Enhancement of Mammalian Embryo Development)的美國專禾U申 請11/370,152 (Huang等)，其公開的內容在此引為參考)。目前仍在 繼續尋找其它通過改進植入前胚胎的體外發育來增加它們成功植入子宮內的潛力以及增加從這些胚胎的活產率來進一步增加IVF的成功的 方法。
技術實現思路
本申請公開了植入前胚胎表達PPAR5，并且除去PPAR5導致了降低的細胞增殖和不可逆的發育遲緩。用合成的配體活化PPAR5，被證實增加了胚胎細胞的增殖、增強了體外的胚胎孵化，并增強了培養的胚胎的植入。PPAR5代表了一種改進IVF結果的新型治療靶。這些發 現預期將在例如體外受精這樣的醫學技術中特別有用。根據本專利技術的某些實施方案，提供了在植入前哺乳動物胚胎中激 活過氧化物酶體增殖物激活物受體5 (PPARS)的體外方法，其中包括 在胚胎培養基中培養胚胎，胚胎細胞中的PPAR5的表達一旦開始或開 始后，通過用PPARS配體結合表達的PPARS來激活PPAR5，以阻止 培養的胚胎的細胞中的凋亡和或加強培養的胚胎的細胞的增殖。在某些實施方案中，PPAR5配體與表達的PPARS的結合增強了 胚胎的孵化。在某本文檔來自技高網...
【技術保護點】
在植入前哺乳動物胚胎中激活過氧化物酶體增殖物激活物受體δ（ＰＰＡＲδ）的體外方法，包括： 在胚胎培養基中培養胚胎，以及 在胚胎細胞中ＰＰＡＲδ的表達開始發生時或發生后，通過將ＰＰＡＲδ配體與表達的ＰＰＡＲδ結合來激活ＰＰＡＲδ， 從而在培養的胚胎細胞中阻止凋亡和／或促進培養的胚胎細胞的增殖。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】US 2005-10-12 60/725,9281.在植入前哺乳動物胚胎中激活過氧化物酶體增殖物激活物受體δ(PPARδ)的體外方法，包括在胚胎培養基中培養胚胎，以及在胚胎細胞中PPARδ的表達開始發生時或發生后，通過將PPARδ配體與表達的PPARδ結合來激活PPARδ，從而在培養的胚胎細胞中阻止凋亡和/或促進培養的胚胎細胞的增殖。2. 權利要求1中的方法，其中PPAR5配體與所述PPARS的結合增加了胚胎的孵化。3. 權利要求2中的方法，還包括以有效促進胚胎的完全孵化的量 在培養基中添加前列腺素或其類似物。4. 權利要求l中的方法，其中所述配體包括至少一種除了前列腺 素或其類似物之外的天然的或合成的配體。5. 權利要求1中的方法，其中所述配體在所述胚胎發育的桑葚胚 期或之后加入到所述培養基中。6. 權利要求l中的方法，其中所述配體包括L165，041。7. 權利要求l中的方法，其中所述配體包括GW501516。8. 權利要求l中的方法，其中所述方法產生了具有增加的體內植 入能力的胚胎。9. 權利要求l中的方法，其中所述方法產生了具有增加的建立可 存活的妊娠的能力的胚胎。10. 增加體外受精的哺乳動物胚胎的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃鄒琛，艾爾弗雷德WS溫，珍妮弗戈爾茲比，肯尼斯K吳，
申請(專利權)人：德克薩斯系統大學董事會，
類型：發明
國別省市：US[美國]
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