刺梨多糖的新作用制造技術

本發明專利技術涉及刺梨多糖的新作用，特別是在治療神經干細胞損傷中的應用。本發明專利技術從刺梨中提取了刺梨多糖，并應用神經干細胞硫代硫酸鈉損傷模型研究其對中樞神經系統的保護作用。對刺梨多糖在腦功能性疾病的應用提供了一種新方法。

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及刺梨多糖的新作用，特別是在治療神經干細胞損傷中的應用。
技術介紹
刺梨(Rosa roxburghii Tratt)是薔薇科薔薇屬植物，又名繅絲花，多以果實入藥，分布于我國西南地區，富含三萜化合物、SOD、維生素C和鞣酸等。關于刺梨汁的抗腫瘤、增強免疫力、抗動脈粥樣硬化、清除自由基等生物活性研究較多，但其活性成分研究的研究較少。對刺梨多糖的研究僅限于粗多糖的免疫增強功能和抗應激功能等。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種刺梨多糖在治療腦功能性疾病中的應用。特別是在對神經干細胞保護中的應用。本專利技術從刺梨汁中分離純化得到刺梨多糖對神經干細胞硫代硫酸鈉損傷的保護作用進行研究，結果表明，RRTP-1對神經干細胞硫代硫酸鈉損傷有明顯的保護作用。本專利技術的刺梨多糖采用如下方法制備(1)神經干細胞的培養與鑒定(2)刺梨多糖的分離純化(3)刺梨多糖純度鑒定。本專利技術從刺梨中提取了刺梨多糖，并應用神經干細胞硫代硫酸鈉損傷模型研究其對中樞神經系統的保護作用。對刺梨多糖在腦功能性疾病的應用提供了一種新方法。具體實施例方式1.神經干細胞的分離培養與鑒定無菌條件下取出大鼠胚胎的紋狀體，放入含有1％B27，20ng·mL-1表皮生長因子(EGF)，10ng·mL-1堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的F12-DMEM(1∶1)培養基中，吹打制成細胞懸液，于37℃，5％CO2飽和濕度下常規培養，每培養一周傳代一次。將細胞貼附在載玻片上生長，2d后取出。吸出培養液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗去殘余培養液，4％(m/m)多聚甲醛固定20min。PBS洗2次；10％正常山羊血清封閉1h；PBS洗3次；抗nestin抗體(v/v 1∶100，用抗體稀釋液稀釋)4℃過夜，PBS洗3次；二抗(v/v 1∶50，用抗體稀釋液稀釋)32℃孵育1h，PBS洗3次；50％(v/v)甘油封片，觀察熒光。2.腦缺氧體外模型的構建將1mL密度為5×105mL-1細胞懸液置于24孔板中，加入濃度為250mmol·L-1的硫代硫酸鈉(Na2S2O3)溶液20μL，使硫代硫酸鈉溶液濃度為5mmol·L-1，混勻，置于37℃，5％CO2的培養箱中培養，每隔24h觀察并細胞計數(用1.5％臺盼藍染色，計算500個總細胞中活細胞的百分率)。3.實驗分組與檢測指標正常對照組細胞培養液為正常神經干細胞培養液；硫代硫酸鈉損傷組方法如2.7.2所述。試驗組不同濃度RRTP-1加入硫代硫酸鈉損傷組培養液中形成3個亞組，即低濃度組(20μmol·L-1)、中濃度組(40μmol·L-1)和高濃度組(80μmol·L-1)。神經干細胞死亡率將1mL密度為5×105mL-1各組細胞懸液置于24孔板中，置于37℃，5％CO2的培養箱中培養，觀察并計算活細胞的百分率(1.5％臺盼藍染色，顯微鏡下計數500個總細胞)；乳酸脫氫酶(LDH)漏出率各組換無血清培養液12h后收集上清液，用速率法測定細胞外液中LDH活性。4.結果硫代硫酸鈉損傷組培養液中細胞死亡率和LDH漏出率明顯增加，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。刺梨多糖高濃度組神經干細胞培養液中，細胞死亡率和LDH漏出率相對較小，與硫代硫酸鈉損傷組比較有顯著性差異(P＜0.01)。說明一定劑量RRTP-1對神經干細胞缺氧損傷有明顯的保護作用。在實驗濃度范圍內，RRTP-1對神經干細胞損傷的保護作用與其濃度呈現一定的量效關系。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
刺梨多糖在治療腦功能性疾病中的應用。

【技術特征摘要】
1.刺梨多糖在治療腦功能性疾病中的應用。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：朱曉霞，段艷紅，陳付學，
申請(專利權)人：上海大學，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]