乙肝疫苗脂質體及其透皮制劑制造技術

本發明專利技術涉及醫藥技術領域，是乙肝疫苗（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　　Ｂ　　ｖｉｒｕｓ　　ｖａｃｃｉｎｅ）脂質體及其經皮給藥制劑。乙肝疫苗為乙型肝炎預防和治療用藥物，現有的劑型為注射劑，因其需要多次、且間隔較長時間進行免疫，以致存在免疫不完全、病人順應性差等問題。本發明專利技術以乙型肝炎疫苗為主藥，加不同的輔料制成普通脂質體、陽離子脂質體、類脂質體或柔性脂質體，并將其進一步制成溶液、乳膏劑、凝膠劑等透皮制劑，通過動物實驗證明透皮效果好。本發明專利技術制劑使用方便，免疫效果好，且可提高病人防治使用率。本發明專利技術為乙型肝炎的預防和治療提供了一種新的給藥途徑。

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥
，是乙肝疫苗(hepatitis B virus vaccine)脂質體及其經皮給藥脂質體制劑。
技術介紹
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)是一種世界性的傳染性疾病，每年由乙肝病毒引起的肝硬化及原發性肝癌而死亡的人數高達100萬例以上。迄今為止，尚無有效的治療藥物，所以預防接種顯得尤為重要。乙肝疫苗已由傳統的血源性疫苗發展到基因工程疫苗，安全性和特異性均得到顯著增高，但仍需間隔一定時間連續三次注射方能達到預期的免疫效果，這就給具體實施帶來了一定困難。據統計，在第三世界國家中沒有達到連續三次接種的比例高達70％，造成免疫覆蓋率大為減少，使得整體免疫水平差，因此研制乙肝疫苗新制劑成為能否有效控制乙肝病毒傳播的關鍵。目前對于乙肝疫苗的研究主要集中在高效低毒的新型疫苗開發和新型給藥途徑兩方面，前者表現在第三代乙肝DNA疫苗的開發，后者體現在采用適宜的給藥途徑刺激免疫系統產生抗體和細胞應答，早期多集中于注射和以生物降解微球為主的控釋技術方面，而經皮給藥通過皮膚或粘膜給藥能夠提高皮膚、鼻粘膜等局部的藥物濃度，減少注射給藥的不便與痛苦，使用方便，改善病人用藥的順應性和安全性，特別是對用藥方案不熟悉或記不準的老年病人和兒童，減少注射器使用造成的污染和危害。但目前的乙肝疫苗無論是蛋白或DNA組成的都存在穩定性差的缺點，而脂質體可以將藥物包封于類脂質雙分子層形成的薄膜中間，具有增加蛋白、肽類藥物穩定性、增強靶向性、緩釋性和降低藥物毒性、刺激性的特點。然而至今未見將乙肝疫苗制成脂質體后經皮給藥的報道。
技術實現思路
本專利技術提供一種乙肝疫苗的外用給藥制劑——經皮給藥脂質體制劑，脂質體類型包括普通脂質體、陽離子脂質體、柔性脂質體(傳遞體)和類脂質體4種。乙肝疫苗脂質體主要由蛋白疫苗或DNA疫苗與脂質體膜材制成，可加入或者不加佐劑。本專利技術脂質體透皮制劑制備方法如下一、制備乙肝疫苗脂質體(一)組分及配比(按制備的類脂溶液為1g/ml計算)磷脂1～80％膽固醇 1～50％表面活性劑 0～50％抗氧化劑0～20％防腐劑 0～5％乙肝疫苗0.1ng/ml～1g/ml其中磷脂選自卵磷脂、腦磷脂、大豆磷脂、氫化磷脂以及其他合成磷脂二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸等；表面活性劑選自陽離子表面活性劑N-[1-(2，3-二油基氧)丙基]-N，N，N，-氯化三甲銨(DOTMA)、1，2-二油酰-3-三甲銨基丙烷(DOTAP)、3β[N-(N’，N’-二甲氨基乙基)氨甲酰基-膽固醇(DC-Chol)、硬脂酰胺、雙十八烷基酰胺甘氨酰精胺，或離子型表面活性劑為膽酸鈉或去氧膽酸鈉，或非離子型表面活性劑為司盤類、吐溫類、泊洛沙姆；抗氧化劑選自維生素E、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉；防腐劑選自硫柳汞、苯甲醇、羥丙甲酯、羥丙丁酯、三氯叔丁醇；乙肝疫苗為蛋白疫苗或DNA疫苗。(二)操作步驟1.類脂溶液的制備按配比將磷脂和膽固醇溶于有機溶劑中，使脂類的濃度在1～50g/ml之間。有機溶劑選自乙醇、三氯甲烷、乙醚；2.制備乙肝疫苗溶液按配比將乙肝疫苗溶于緩沖液或生理鹽水中制成乙肝疫苗溶液，緩沖液選自醋酸鈉緩沖液、枸櫞酸鈉緩沖液、乳酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、酒石酸緩沖液。3.制備乙肝疫苗脂質體按常規，將類脂溶液和乙肝疫苗溶液混合制成脂質體溶液，并可進一步制成干粉制劑。脂質體常用的制備方法包括薄膜分散法、逆相蒸發法、冷凍干燥法、注入法和超聲波分散法。以薄膜分散—超聲法為例說明該脂質體的制備步驟 將類脂溶液減壓旋轉蒸發除去有機溶劑，再加入乙肝疫苗，一定溫度下用旋轉蒸發儀轉動洗膜，制成乙肝疫苗脂質體混懸液。將脂質體混懸液冰浴超聲至溶液由乳白色轉為半透明，用孔徑為0.1～20μm的過濾器濾過即得乙肝疫苗脂質體溶液，再按常規制備成乙肝疫苗脂質體干粉制劑(具體方法參考崔福德主編的《藥劑學》第5版，人民衛生出版社，2004，第389-390頁)。二、制備乙肝疫苗脂質體透皮制劑乙肝疫苗脂質體可以制成溶液劑、乳膏劑或凝膠劑。(一)制備乙肝疫苗脂質體溶液劑將乙肝疫苗脂質體干粉直接溶于緩沖液或生理鹽水即成，其中乙肝疫苗脂質體濃度為1mg～10g/ml。緩沖液選自醋酸鈉緩沖液、枸櫞酸鈉緩沖液、乳酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、酒石酸緩沖液。(二)制備乙肝疫苗脂質體乳膏劑乳膏劑基質由油相、水相、乳化劑及促透劑組成，其中油相材料選自凡士林、石蠟或液狀石蠟、羊毛脂、硅酮、蜂蠟、氫化植物油、硬脂酸甘油脂、高級脂肪醇等，占基質20％～70％；水相成分選自聚乙二醇、甘油、丙二醇，占基質20％～70％；乳化劑選自新生皂類、吐溫類、司盤類、十二烷基硫酸鈉，占基質0.1％～5％；促透劑選自薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯、氮酮、丙二醇、N-甲基吡咯烷酮，占基質0～9％。乙肝疫苗脂質體乳膏劑由乙肝疫苗脂質體和基質組成，其中乙肝疫苗脂質體占5％～25％。基質可以是水包油型或油包水型。其制備方法是將油相、水相分別加熱至70℃左右，再混合攪勻乳化，冷卻后加入乙肝疫苗脂質體，攪勻即可。(三)制備乙肝疫苗脂質體凝膠劑乙肝疫苗脂質體凝膠劑由乙肝疫苗脂質體、高分子基質材料、防腐劑、保濕劑和溶劑組成，亦可含有中和劑和促透劑。高分子基質材料選自卡波普、羧甲基纖維素鈉、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮；保濕劑為甘油；防腐劑為羥苯乙酯或硫柳汞；溶劑為水；中和劑為氫氧化鈉或三乙醇胺；促透劑選自薄荷腦、樟腦、氮酮、檸檬烯、丙二醇、N-甲基吡咯烷酮。各組分的重量百分比為乙型肝炎疫苗脂質體1～20％，高分子基質材料0.1～5％，保濕劑4～15％，防腐劑0.01～0.5％，中和劑0～6％，促透劑0～20％，溶劑35～70％。制備方法為將高分子基質材料加水溶脹，按上述配比分別加入保濕劑、防腐劑、中和劑和促透劑，加水至規定量，調整pH值在5.5～7.2之間，加入乙肝疫苗脂質體，攪勻即可。具體實施例方式現結合實施例對本專利技術做詳細描述。實施例1 旋轉薄膜超聲法制備乙型肝炎疫苗普通脂質體將卵磷脂0.5g和膽固醇0.05g溶于30ml乙醚中，待完全溶解后，加入維生素E0.1g得類脂溶液。將類脂溶液置于磨口梨形燒瓶中，將梨形瓶置于旋轉蒸發儀減壓條件下去除有機溶劑(可在梨形燒瓶加入適量小玻璃珠)。然后向燒瓶中充氮氣，完全除去有機溶劑，再向燒瓶中加入10μg/ml乙肝疫苗磷酸鹽緩沖液5ml，35℃下用旋轉蒸發儀轉動洗膜，待形成的類脂薄膜水合形成牛奶狀脂質體混懸液。將脂質體混懸液冰浴超聲至溶液由乳白色轉為半透明，再加入硫柳汞0.05g，以三乙醇胺調節pH值在7.0左右。以孔徑為0.22μm的過濾器濾過得乙肝疫苗普通脂質體溶液，冷凍干燥得粉劑。實施例2 旋轉薄膜超聲法制備乙型肝炎DNA疫苗陽離子脂質體分別稱取大豆磷脂30mg、膽固醇15mg和十八胺2mg，溶解于10ml乙醚中，待完全溶解后，加入抗氧劑亞硫酸氫鈉5mg得到類脂溶液。將類脂溶液置于磨口梨形燒瓶中，將梨形瓶置于旋轉蒸發儀減壓的條件下去除有機溶劑(可在梨形燒瓶加入適量小玻璃珠)。然后向燒瓶中充氮氣，完全除去有機溶劑，再向燒瓶中加入50μg/ml乙肝DNA疫苗磷酸鹽緩沖液10ml，37℃用旋轉本文檔來自技高網...

【技術保護點】
乙肝疫苗脂質體，包括普通脂質體、陽離子脂質體、柔性脂質體和類脂質體，制備方法如下：組分及配比磷脂１～８０％膽固醇１～５０％表面活性劑０～５０％抗氧化劑０～２０％防腐劑０～５ ％乙肝疫苗０．１ｎｇ／ｍｌ～１ｇ／ｍｌ其中磷脂選自卵磷脂、腦磷脂、大豆磷脂、氫化磷脂，或其他合成磷脂二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸；表面活性劑選自陽離子表面活性劑Ｎ－［１－（２ ，３－二油基氧）丙基］－Ｎ，Ｎ，Ｎ，－氯化三甲銨、１，２－二油酰－３－三甲銨基丙烷、３β［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－二甲氨基乙基）氨甲酰基－膽固醇、硬脂酰胺、雙十八烷基酰胺甘氨酰精胺，或離子型表面活性劑膽酸鈉、去氧膽酸鈉，或非離子型表面活性劑司盤類、吐溫類、泊洛沙姆；抗氧化劑選自維生素Ｅ、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉；防腐劑選自硫柳汞、苯甲醇、羥丙甲酯、羥丙丁酯、三氯叔丁醇；乙肝疫苗為蛋白疫苗或ＤＮＡ疫苗；操作步驟：（１）類脂溶液的制備按配比將 磷脂和膽固醇溶于有機溶劑中，使脂類的濃度在１～５０ｇ／ｍｌ之間；有機溶劑選自乙醇、氯仿、乙醚；（２）制備乙肝疫苗溶液按配比將乙肝疫苗溶于緩沖液或生理鹽水制成乙肝疫苗溶液，緩沖液選自醋酸鈉緩沖液、枸櫞酸鈉緩沖液、乳酸緩沖液、磷 酸鹽緩沖液、酒石酸緩沖液；（３）制備乙肝疫苗脂質體按常規，將類脂溶液和乙肝疫苗溶液混合制成脂質體溶液，并可進一步制成干粉制劑。...

【技術特征摘要】
1.乙肝疫苗脂質體，包括普通脂質體、陽離子脂質體、柔性脂質體和類脂質體，制備方法如下組分及配比磷脂 1～80％膽固醇1～50％表面活性劑0～50％抗氧化劑 0～20％防腐劑0～5％乙肝疫苗 0.1ng/ml～1g/ml其中磷脂選自卵磷脂、腦磷脂、大豆磷脂、氫化磷脂，或其他合成磷脂二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸；表面活性劑選自陽離子表面活性劑N-[1-(2，3-二油基氧)丙基]-N，N，N，-氯化三甲銨、1，2-二油酰-3-三甲銨基丙烷、3β[N-(N’，N’-二甲氨基乙基)氨甲酰基-膽固醇、硬脂酰胺、雙十八烷基酰胺甘氨酰精胺，或離子型表面活性劑膽酸鈉、去氧膽酸鈉，或非離子型表面活性劑司盤類、吐溫類、泊洛沙姆；抗氧化劑選自維生素E、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉；防腐劑選自硫柳汞、苯甲醇、羥丙甲酯、羥丙丁酯、三氯叔丁醇；乙肝疫苗為蛋白疫苗或DNA疫苗；操作步驟(1)類脂溶液的制備按配比將磷脂和膽固醇溶于有機溶劑中，使脂類的濃度在1～50g/ml之間；有機溶劑選自乙醇、氯仿、乙醚；(2)制備乙肝疫苗溶液按配比將乙肝疫苗溶于緩沖液或生理鹽水制成乙肝疫苗溶液，緩沖液選自醋酸鈉緩沖液、枸櫞酸鈉緩沖液、乳酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、酒石酸緩沖液；(3)制備乙肝疫苗脂質體按常規，將類脂溶液和乙肝疫苗溶液混合制成脂質體溶液，并可進一步制成干粉制劑。2.權利要求1所述乙肝疫苗脂質體的透皮制劑，包括溶液劑、乳膏劑或凝膠劑，制備方法分別為(1)溶液劑將乙肝疫苗脂質體干粉直接溶于緩沖液或生理鹽水制成即可，緩沖液選自醋酸鈉緩沖液、枸...

【專利技術屬性】
技術研發人員：胡晉紅，王晶，朱全剛，劉繼勇，彭程，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第二軍醫大學，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]