一種凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗及其制備方法技術

本發明專利技術提供一種國產化、價格低、減少針次、一針防二病，用于兒童預防麻疹和腮腺炎的凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗及其制備方法。采用１０日齡的無特定病原體（ＳＰＦ）雞胚制成原代雞胚細胞，１０Ｌ瓶旋轉培養成單層細胞，分別接種滬１９１株麻疹病毒和Ｓ７９株腮腺炎病毒，經培養收集麻疹病毒液和腮腺炎病毒液，再經外源因子等檢定合格，通過澄清過濾合并成單價病毒原液，將合格的麻疹和腮腺炎單價病毒原液按一定比例配制，加入凍干保護劑制成半成品，最后分裝凍干制成最終成品。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬生物制品領域，具體涉及一種凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗及其制備方法。麻疹是兒童最常見的急性傳染病。世界衛生組織(WHO)報道全球每年麻疹發病3000-4000萬例，死亡70多萬。上海生物制品研究所自上世紀60年代研究成功滬191株麻疹活疫苗以來，對預防和控制麻疹的發病和流行發揮了十分有效的作用。WHO也將麻疹疫苗列為全球六種EPI(全球兒童擴大計劃免疫)制品之一。我國目前仍以使用單價麻疹疫苗為主。流行性腮腺炎(簡稱腮腺炎)是小兒最常見的疾病之一，近幾年的發病呈上升趨勢。上海生物制品研究所自上世紀80年代初研究成功S79株腮腺炎活疫苗，90年代中開始推廣使用以來，對預防和控制腮腺炎的發病作用明顯。WHO倡導“全球兒童疫苗計劃”，將開發聯合疫苗作為其中一項內容。聯合疫苗的優越性在于將多種單價疫苗的功能集于一個制品，發揮出一針防多病，減少針次，便于臨床上推廣使用，進一步提高計劃免疫工作的實施，還可節約預防工作的間接成本。國際上早已制備出麻疹、腮腺炎、風疹三聯活疫苗，國內近幾年才開始研究病毒類聯合疫苗。本專利技術的目的是提供一種國產化、價格低、減少針次、一針防二病，用于兒童預防麻疹和腮腺炎的活疫苗及其制備方法。本專利技術用10日齡的無特定病原體(SPF)雞胚制成原代雞胚細胞，采用10L瓶旋轉培養成單層細胞，分別接種滬191株麻疹病毒和S79株腮腺炎病毒，經培養收集麻疹病毒液和腮腺炎病毒液，再經外源因子等檢定合格，通過澄清過濾合并成單價病毒原液。將合格的麻疹和腮腺炎單價病毒原液按一定比例配制，加入凍干保護劑制成半成品，最后分裝凍干制成最終成品。本專利技術所采用的滬191株麻疹病毒和S79株腮腺炎病毒，分別是用于生產滬191株麻疹活疫苗和S79株腮腺炎活疫苗的病毒毒株，以上兩種疫苗已分別通過國家食品藥品監督管理局的新藥審評，獲得新藥證書和生產文號。為制備高滴度的麻疹疫苗病毒原液，本專利技術采用10L瓶細胞旋轉培養取代靜止培養的方法，增加單層細胞貼壁面積，以細胞數量的增加提高病毒滴度；并改進細胞培養和病毒培養的pH和營養成分等條件，以改善細胞質量提高病毒滴度；同時減少病毒培養的最終加液量，以增加單位體積中的病毒量提高病毒滴度。為制備高滴度的腮腺炎疫苗病毒原液，本專利技術采用3L瓶細胞旋轉培養取代10L瓶旋轉培養，進一步控制瓶內空間和pH變化，以改善細胞質量提高病毒滴度；嚴格控制腮腺炎病毒繁殖的收獲時間，掌握細胞病變的最佳程度(細胞病變達80-90％)，以獲得高滴度病毒原液；減少病毒培養的最終加液量，以增加單位體積中的病毒量提高病毒滴度。本專利技術進一步研究了兩種疫苗病毒原液聯合配制的最佳比例。根據WHO規程要求聯合疫苗中腮腺炎病毒量至少比麻疹病毒高5倍，并兼顧二者相互的稀釋作用，最后確定二聯疫苗適宜的配比為1份麻疹病毒原液+2～3份腮腺炎病毒原液+0.5～1份保護劑。在本專利技術的實施過程中，疫苗的凍干保護劑由蔗糖、乳糖、山梨醇、味精、明膠、尿素、人白蛋白等成分，按不同種類和濃度配制而成。當凍干保護劑中含有3-8％蔗糖、0.5-1.5％明膠、0.5-1.5％谷氨酸鈉、0.3-0.8％尿素、0.3-0.8％人白蛋白時，效果最好。本專利技術所提供的凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗，產品質量超過兩種單價疫苗的國家標準，并達到世界衛生組織(WHO)對麻疹、腮腺炎和風疹聯合疫苗的質量標準。 本專利技術所提供的凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗，與國外麻疹、腮腺炎和風疹聯合疫苗同步進行的臨床安全性和有效性比較觀察安全性均無明顯的局部反應和全身反應；觀察有效性的免疫后抗體陽轉率，麻疹100％(進口疫苗88.9％)，腮腺炎87.8％(進口疫苗86.7％)；觀察3年的免疫持久性的抗體陽性率，麻疹100％(進口疫苗100％)，腮腺炎77.8％(進口疫苗75.0％)。經統計學處理均無顯著性差異，說明該產品達到國際同類產品的質量。本專利技術所述之凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗及其制備方法，所采用的病毒毒株為國內所特有，其他原料和試劑亦為國產，生產成本低，一針疫苗可以同時預防麻疹和腮腺炎二種傳染病，可廣泛應用于兒童免疫接種。以下結合具體的實施例，對本專利技術做進一步的闡述。這些實施例僅用于對本專利技術做說明而不是對本專利技術的限制。實施例1高滴度麻疹疫苗病毒原液的生產采用10L瓶細胞旋轉培養取代靜止培養的方法，增加單層細胞貼壁面積，以細胞數量的增加提高病毒滴度；改進細胞培養和病毒培養的pH和營養成分等條件，以改善細胞質量提高病毒滴度；減少病毒培養的最終加液量，以增加單位體積中的病毒量提高病毒滴度。具體參數和比較結果列表如下 實施例2高滴度腮腺炎疫苗病毒原液的生產采用3L瓶細胞旋轉培養取代10L瓶旋轉培養，進一步控制瓶內空間和pH變化，以改善細胞質量提高病毒滴度；嚴格控制腮腺炎病毒繁殖的收獲時間，掌握細胞病變的最佳程度(細胞病變達80-90％)，以獲得高滴度病毒原液；減少病毒培養的最終加液量，以增加單位體積中的病毒量提高病毒滴度。具體參數和比較結果列表如下 以3L轉瓶培養觀察不同細胞病變程度時收獲的病毒原液滴度(lgCCID50/ml) 實施例3麻疹、腮腺炎疫苗病毒原液聯合配制的最佳比例和避免兩種病毒的相互干擾作用根據稀釋倍數確定單價病毒原液的最低病毒滴度將單價麻疹、腮腺炎兩種病毒原液分別用不同體積的M199維持液做配制比例試驗，并進行病毒滴度測定，以了解病毒滴度下降幅度，確定兩種病毒原液的最低滴度。結果如下 可見兩種疫苗原液1∶1配比病毒滴度下降0.4-0.61gCCID50/ml，1∶2配比病毒滴度下降0.7-0.91gCCID50/ml，1∶3配比病毒滴度下降0.9-1.11gCCID50/ml，1∶4配比病毒滴度下降1.4-1.61gCCID50/ml。考慮二聯疫苗最低免疫的病毒含量(麻疹3.31gCCID50/ml，腮腺炎4.01gCCID50/ml)，以及加凍干保護劑的稀釋和熱穩定性的病毒損失等因素，確定兩種疫苗原液的最低病毒滴度為麻疹≥5.21gCCID50/ml，腮腺炎≥5.71gCCID50/ml。觀察兩種病毒之間的干擾現象及確定兩種病毒原液的配比麻疹、腮腺炎兩種病毒混合前后的滴度比較(lgCCID50/ml) 可見兩種疫苗原液配比后相互之間稀釋倍數的病毒滴度下降，1.3-4倍稀釋分別為0.31g-1.01g，而相應稀釋倍數的對照病毒滴度下降與二聯疫苗配比時基本一致，說明滴度下降由相互稀釋造成，兩種病毒之間無明顯干擾現象。根據WHO規程要求聯合疫苗中腮腺炎病毒量至少比麻疹病毒高5倍，并兼顧二者相互的稀釋作用，最后確定二聯疫苗適宜的配比為1份麻疹原液+2～3份腮腺炎原液+0.5～1份保護劑二聯活疫苗與同批單價疫苗凍干后的病毒干擾比較用配制二聯苗的同一批麻疹和腮腺炎原液，以M199液稀釋，即麻疹原液1份+2.5份M199液，腮腺炎原液2.5份+1份M199液，然后加同樣比例的保護劑平行凍干。檢定結果顯示，二聯疫苗的麻疹和腮腺炎與單價麻疹和腮腺炎疫苗的滴度、熱穩定性差異無顯著意義(麻疹t＝0.443，P＞0.05，腮腺炎t＝0.168，P＞0.05)，說明兩種病毒混合相互間無明顯干擾作用。3批麻腮二聯疫苗與單價疫苗的比較 實施例4凍干保護劑及冷凍干燥技術疫苗的凍干保護劑及凍干本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗，其特征在于同時含有麻疹病毒和腮腺炎病毒。

【技術特征摘要】
1.一種凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗，其特征在于同時含有麻疹病毒和腮腺炎病毒。2.根據權利要求1所述的凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗，其特征在于其所含的麻疹病毒為滬191株麻疹病毒。3.根據權利要求1所述的凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗，其特征在于其所含的腮腺炎病毒為S79株腮腺炎病毒。4.一種凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗的制備方法，其特征在于采用無特定病原體(SPF)雞胚制成原代雞胚細胞，分別接種滬191株麻疹病毒和S79株腮腺炎病毒，經培養收集麻疹病毒液和腮腺炎病毒液，檢定合格后通過澄清過濾合并成單價病毒原液，再將合格的麻疹和腮腺炎單價病毒原液按一定比例配制，加入凍干保護劑制成半成品，最后分裝凍干制成最終成品。5.根據權利要求4所述的凍干麻疹、腮腺炎二聯活疫苗制備方法，其特征在于麻疹病毒原液、腮腺炎病毒原液和凍干保護劑的配比比例為1份麻疹病毒原液+2～3...

【專利技術屬性】
技術研發人員：徐聞青，王兵，陳志慧，
申請(專利權)人：上海生物制品研究所，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]