蟾蜍蛆蟲(chóng)分離蟾肽抗生素及其抗菌藥品制備方法技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)蟾蜍蛆蟲(chóng)分離蟾肽抗生素及其抗菌藥品制備方法，它以蟾蜍蛆蟲(chóng)為原料，采用溶劑萃取法離子交換樹(shù)脂吸附法，超濾及微濾，凝膠色譜分離，超聲駐波液相制備色譜等工藝，再冷凍干燥制備成蟾肽抗生素，并用此活性成分與適宜的賦形劑相結(jié)合，制成片劑、膠囊劑、栓劑、軟膏劑及腸溶劑等劑型用于治療多種疾病。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)制備的藥品抗菌范圍廣泛，藥品成份明確、質(zhì)量可控、性能穩(wěn)定，具有工業(yè)生產(chǎn)價(jià)值。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專(zhuān)利技術(shù)涉及一種藥物的制備，特別是蟾蜍蛆蟲(chóng)分離蟾肽抗生素及其抗菌藥品制備 方法。
技術(shù)介紹
蟾蜍是一種兩棲類(lèi)動(dòng)物，皮膚長(zhǎng)期裸露，為抵御外部微生物及各種病原菌的侵襲， 它們的身體逐漸形成防御機(jī)制，其皮膚分泌產(chǎn)生了大量能有效殺滅微生物、抵御有害環(huán)境 因子侵襲的物質(zhì)，分泌物的主要成份是多肽，Zasloff從非洲爪蟾皮膚上發(fā)現(xiàn)了爪蟾抗菌肽 Magainin, Gibson等人從蟾皮膚分離得到Bombinir like家族抗菌肽，從澳州當(dāng)?shù)氐耐茴?lèi) 皮膚分泌物中陸續(xù)提取到Citropin家族，Caerin家族，Maculatin家族及Uperin家族的各 種抗菌肽，賴(lài)仞等人從大蹼鈴蟾的皮膚分泌物中提取了一種抗菌肽MSP VII，徐興軍等人從 中華蟾蜍皮膚提取了抗菌肽，CN200410013742. 4公開(kāi)了采用中藥培育蟾蜍蛆蟲(chóng)的方法，可 以大批量工業(yè)化生產(chǎn)蟾蜍蛆蟲(chóng)。原則上，前述提取的各種抗菌肽都有一定的抗菌活性，但是在藥品生產(chǎn)中需要活 性較高、來(lái)源豐富、性能穩(wěn)定、成份明確、質(zhì)量可控的原料。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的是提供，提取純度 蟾肽抗生素含量達(dá)到98. 2% -98. 9%，用此純度蟾肽抗生素制備各種劑型的藥品，產(chǎn)品成 份明確、質(zhì)量可控、性能穩(wěn)定，對(duì)多種疾病療效好并且原料來(lái)源廣泛。本專(zhuān)利技術(shù)的目的是通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)的以蟾蜍蛆蟲(chóng)為原料，采用水溶劑萃取法或 稀堿溶液萃取法或稀醇溶液萃取法，結(jié)合離子交換樹(shù)脂吸附法，超濾及微濾、凝膠色譜，超 聲駐波液相制備色譜等工藝中的一種或者多種工藝，再冷凍干燥制備成蟾肽抗生素，將蟾 肽抗生素作為藥用活性成分與適宜的賦形劑相結(jié)合、制成片劑、膠囊劑、栓劑、軟膏劑、酊 劑、糊劑、糊膜劑及腸溶劑等劑型用于治療多種疾病。分離純化的蟾肽抗生素用高效液相色 譜(RP-HPLC)測(cè)定組分含量。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)做進(jìn)一步的描述實(shí)施例1、①將IOOOg干燥蟾蜍蛆蟲(chóng)加進(jìn)到10L-100L純凈水及0. 02%磷酸氫二鈉-磷酸 二氫鉀緩沖液中加熱溫度50°C -90°C，時(shí)間lOmin-eOmin ；提取蟾肽抗生素；②冷卻至4°C _15°C，用分離機(jī)在800r/min-16000r/min連續(xù)分離除去固形物，收集上清液。③將收集的上清液泵入HD-8強(qiáng)酸離子交換樹(shù)脂柱中，靜止30min-300min，飽和 樹(shù)脂先用0. 5mol/LHCl-NH4Cl溶液洗滌，再用純凈水洗脫0. 5h_2h，用0. 01mol/L-0. 5mol/4LNH4OH 洗脫。④洗脫液泵入錯(cuò)流微濾器中，微濾膜孔徑為0. 1 μ m-o. 8 μ m操作壓力 0. OlMpa-O. 5Mpa連續(xù)微濾處理成微濾處理液。⑤微濾處理液溶于由正丁醇-20mOl/L-100mOl/L三氟乙酸水溶液(1 1)組成的 溶劑體系中，注入到超聲駐波液相制備色譜中，聲強(qiáng)0. lKw-50kw、流速50ml/L-500ml/L、紫 外檢測(cè)器220mm檢測(cè)，連續(xù)分離出蟾肽抗生素，收率達(dá)2. 0% -2. 8%。⑥分離出的蟾肽抗生素用RP-HPLC測(cè)定，色譜柱YMC-pack polymerc. 8150mmX4. 6mmLD.流動(dòng)基金動(dòng)相A.乙腈QO % ) +水(80 % ) +三氟乙酸 (0. 05% )，B.乙腈(45% ) +水(55% ) +三氟乙酸(0.05%，梯度條件:0-30min, 0-100 % B，流速1. Oml/min-5. Oml/min，檢測(cè)器:UV，220nm，柱溫 30°C _50°C，進(jìn)樣量:10 μ 1-30 μ 1， 測(cè)定結(jié)果顯示純度為98. 2% -98. 9%。2、①將IOOOg蟾蜍蛆蟲(chóng)用10L-100L的純凈水并加 入0. 02-0. IOmol/L磷酸-磷酸氫二鉀緩沖液加熱至35°C -90°C、保持30min-300min并且 進(jìn)行攪拌，提取出蟾肽抗生素的粗品；②加入提取液體積5倍-10倍的乙醇或甲醇，常溫下 靜止沉淀lh-24h，然后用分離機(jī)在SOOr/min-ieOOOr/min條件下將多糖類(lèi)及蛋白質(zhì)分離； ③分離液泵入HD-8酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱內(nèi)，常溫下放置lh-24h，然后用Imol/L-lOmol/ L氨水溶液洗脫收集蟾肽抗生素部分；④將收集的蟾肽抗生素部分溶解于由氯仿-乙 醇-水(5 3 4)組成的溶劑體系中用超聲駐波液相制備色譜以聲強(qiáng)0.2kw-5.0kw，流 速0. lml/min-lOOOml/min、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)220nm檢測(cè)條件下分離純化蟾肽抗生素；⑤將 純化的蟾肽抗生素用真空冷凍干燥機(jī)在-10°C -50°C、真空度0. OlMpa-O. IMpa條件下干燥 ^!!-川！！，含量達(dá)日日.〗1^ ；⑥純化的蟾肽抗生素粉碎過(guò)100目-200目篩收集粉末。3、①將IOOOg蟾蜍蛆蟲(chóng)用5L-10L的純凈水并加入10% -20%乙醇，在超聲波 提取罐中以Ikw-IOkw聲強(qiáng)超聲波常溫條件下提取10min-120min，提取出蟾肽抗生素粗 品溶液；②提取液中加入5倍-10倍的乙醇，常溫下，靜止沉淀lh-Mh，用分離機(jī)SOOr/ min-16000r/min連續(xù)分離上述溶液成分離液；③用真空蒸發(fā)器在真空度0. OlMpa-O. 5Mpa、 溫度10°C -50°C條件下濃縮分離液至原體積的10% -1. 0%成濃縮液；④將濃縮液泵入 HZ001酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱中，用0. lmol/L-1. 0mol/L NaOH溶液洗脫，收集蟾肽抗生素 部分；⑤收集的蟾肽抗生素部分溶解到由氯仿-乙醇-水(5 4 3)組成的溶劑體系中， 用超聲駐波液相制備色譜以聲強(qiáng)0. lkw-5. Okw、流速0. lml/min-lOOOml/min、紫外檢測(cè)器 波長(zhǎng)220nm檢測(cè)條件下連續(xù)分離純化；⑥分離純化的蟾肽抗生素在溫度-10°C --50°C、真空 度0. OlMpa-O. IMpa、真空冷凍干燥Ih-IOh成粉末狀蟾肽抗生素，純化后的蟾肽抗生素含量 達(dá) 98. 9%。4、①取IOOOg蟾蜍蛆蟲(chóng)與10L-100L0. 01 % -10 %的乙醇稀溶液混合，加熱 500C -180°C，時(shí)間 10min-60min，然后冷卻至 10°C _20°C、加入 0. lmol/L-5. 0ml/L (NH4)2SO4 溶液，放置30min-300min、用離心機(jī)以800r/min-16000r/min連續(xù)離心分離出分離液 ’② 分離液注入到錯(cuò)流微濾器中，以孔徑0. 1μπι-0. 8μπκ壓力0. OlMpa-O. 5Mpa、流速100ml/ min-10L/min連續(xù)微濾處理成微濾處理液；③微濾處理液注入到平板錯(cuò)流超濾器中，以孔 徑2nm-10nm、壓力0. 5Mpa_l. OMpa、流速5. 0L/min_50L/min連續(xù)超濾處理成超濾處理液；④ 超濾處理液真空冷凍干燥處理，冷凍干燥溫度-10°C —50°C、真空度0. OlMpa-O. 5Mpa、時(shí)間 0. 5h-5h冷凍干燥成粉狀；⑤上述粉狀物用溶于PH4. 0-0. lmol/L-0. 05mol/L, HAC-NaAC緩沖液中、配制0. lg-100g/L溶液，注入到有kphaeryIs-IOOHR的色譜柱中，在PH本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
蟾蜍蛆蟲(chóng)分離蟾肽抗生素及抗菌藥品制備方法，其特征在于：　　以蟾蜍蛆蟲(chóng)為原料，采用水溶劑萃取法或稀堿溶液萃取法或稀醇溶液萃取法，結(jié)合離子交換樹(shù)脂吸附法，超濾及微濾、凝膠色譜，超聲駐波液相制備色譜等工藝中的一種或者多種工藝，再冷凍干燥制備成蟾肽抗生素，將蟾肽抗生素作為藥用活性成分與適宜的賦形劑相結(jié)合、制成片劑、膠囊劑、栓劑、軟膏劑、酊劑、糊劑、糊膜劑及腸溶劑等劑型用于治療多種疾病。

【技術(shù)特征摘要】

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐華民，趙榮華，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：哈爾濱工業(yè)大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：93