聚乙二醇-干擾素α凍干制劑制造技術

一種聚乙二醇－干擾素α凍干制劑，含有　　　　聚乙二醇－干擾素α，　　　　一種保護劑，該保護劑為精氨酸和／或谷氨酸。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及聚乙二醇-干擾素凍干制劑，以氨基酸作為保護劑，特別是精氨酸和/或谷氨酸作為保護劑，以及其凍干方法。
技術介紹
干擾素是由細胞分泌的一類誘生蛋白質(zhì)，具有廣普的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能，是目前世界上公認的最為有效的抗病毒藥物之一。在國內(nèi)外已廣泛用于治療多種病毒性、腫瘤性疾病。但干擾素結(jié)構不穩(wěn)定；長期使用易產(chǎn)生抗體；相對分子量小，在體內(nèi)易經(jīng)腎小球濾過而排泄，體內(nèi)半衰期短。利用一些無毒但水溶性好的免疫惰性大分子聚合物(如聚乙二醇)對其進行修飾，在臨床上表現(xiàn)出更大的臨床效力。主要優(yōu)點為在體外，有較好的物理及熱穩(wěn)定性，抗酶解能力提高，可溶性增加；在體內(nèi)，循環(huán)半衰期明顯延長，免疫原性下降，生物利用度提高等。干燥是保持物質(zhì)不致腐敗變質(zhì)的方法之一。然而一些干燥方法是在0℃以上或更高的溫度下進行。干燥后產(chǎn)品的理化和生物學性質(zhì)會發(fā)生很大的變化。而凍干(即冷凍干燥)是發(fā)生在0℃以下，是指通過升華從凍結(jié)的物料中去除水分或其他溶劑的過程。升華指的是溶劑，比如水，象干冰一樣，不經(jīng)過液態(tài)，從固態(tài)直接變?yōu)闅鈶B(tài)的過程。冷凍干燥得到的產(chǎn)物稱作凍干物(lyophilizer)，該過程稱作凍干(lyophilization)。在冰凍干燥過程中樣品的結(jié)構不會被破壞，因為固體成份被在其位置上的堅冰支持著。在冰升華時，它會留下孔隙在干燥的剩余物質(zhì)里。這樣就保留了產(chǎn)品的生物和化學結(jié)構及其活性的完整性。目前此技術是常用來長期保存生物材料及藥品等。冷凍干燥可以自然發(fā)生。在自然情況下，這一過程緩慢而且不可預測。通過冷凍干燥系統(tǒng)，人們改進、細分了很多步驟，加速了這一過程。凍干過程分為冷凍、升華、解析干燥三個階段，每一個階段都有相應的要求，不同的物料其要求各不相同，各階段工藝設計及控制手段的差異直接關系凍干產(chǎn)品的質(zhì)量和凍干設備的性能。如上所述，冷凍干燥(凍干)法常用于許多生物活性材料(包括蛋白質(zhì))的保存。但是，凍干法也有其自身的局限性，如在冷凍和除水過程中，蛋白過濃，可能會導致產(chǎn)物的不穩(wěn)定。因此，除了在凍干狀態(tài)以及液態(tài)都可以發(fā)生的脫酰胺作用以及氧化反應外，凍干法可能導致交聯(lián)(生成共價寡聚物)以及非共價聚合物比例的升高。為了增強生物活性材料的穩(wěn)定性，經(jīng)常需要一些保護劑。目前，大多注射用蛋白類生物制品的保護劑通常選用人血白蛋白，而人血白蛋白價格昂貴，致使該凍干產(chǎn)品成本高；另外人血白蛋白具有攜帶病毒的危險。為了解決這個問題，許多人正致力于蛋白類凍干制劑的研究，嘗試以其他物質(zhì)代替人血白蛋白作為凍干保護劑。如中國專利CN1260171A中選用右旋糖苷作為重組干擾素的凍干保護劑。已知在某些狀態(tài)下氨基酸可以作為凍干蛋白產(chǎn)品的保護劑。據(jù)報道，谷氨酸鈉和賴氨酸鹽，對一種蛋白，乳酸脫氫酶，的冷凍變性具有防凍作用(Seguro，et al.，Cryobiology2770-79(1990))等。其他種類的分子，包括單糖和二糖，以及聚合物比如PVP，也有報道作為凍干蛋白的保護劑。但是，對任一給定的蛋白產(chǎn)品，它們的效用是無法預測的。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的之一是提供一種聚乙二醇-干擾素α凍干制劑，該制劑中的蛋白，性能穩(wěn)定，適于保存。本專利技術另一目的是提供一種聚乙二醇-干擾素α凍干制劑的制備方法。本專利技術的其他目的，體現(xiàn)于本文對本專利技術的描述中。根據(jù)本專利技術，一種聚乙二醇-干擾素α凍干制劑，含有聚乙二醇-干擾素α和一種保護劑，該保護劑為精氨酸和/或谷氨酸。本專利技術的保護劑，能保持聚乙二醇-干擾素α在凍干過程中和之后的生物活性和穩(wěn)定性。精氨酸和/或谷氨酸保護聚乙二醇-干擾素α的機制，可能是在冷凍過程中與蛋白共濃縮，從而起到稀釋和保護蛋白的作用。還有一種可能是在冷凍和/或凍干過程中，兩性的氨基酸分子與蛋白分子之間發(fā)生特異的相互作用，保護蛋白不變性。本專利技術的制劑在凍干前，每ml含有谷氨酸1-50mmol，優(yōu)選為5-20mmol，更優(yōu)選為10mmol，和/或精氨酸5-100mmol，優(yōu)選為5-30mmol，更優(yōu)選為15mmol。本專利技術的保護劑，優(yōu)選精氨酸和谷氨酸共用，其中精氨酸和谷氨酸含量的比值為0.5-2.5，優(yōu)選的比值為1-2，更優(yōu)選的比值為1.5。本專利技術的制劑還包括一種可藥用緩沖液。這種可藥用緩沖液可以是常用緩沖液，如乙酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖液，優(yōu)選乙酸鹽。本制劑在凍干前，可以含有5-20mM緩沖液，如乙酸鹽，優(yōu)選10mM緩沖液，如乙酸鹽。本專利技術制劑在凍干前，用緩沖液將pH調(diào)節(jié)到pH5.5-6.5之間，優(yōu)選pH6.0。本專利技術制劑中所用的干擾素，可使用任何干擾素α，例如，歐洲專利No.43980中公開的干擾素α(其中稱為成熟人白細胞干擾素A，也參見J.Pharm.Biomed，Ahalysis Vol.7，No.2，233-238(1989))。用于本專利技術的優(yōu)選干擾素α是聚乙二醇-干擾素α2a、聚乙二醇-干擾素α2b或聚乙二醇-干擾素α1b，尤其優(yōu)選聚乙二醇-干擾素α2b。本專利技術的制劑在凍干前，每ml含有106-108IU、特別是1-18×106(IU)的聚乙二醇-干擾素α。本專利技術中采用的干擾素α結(jié)合到聚合物上，例如聚亞烷基二醇(取代的或未取代的)如聚乙二醇上，形成PEG-干擾素α。可用本領域中已知的各種接頭完成這種結(jié)合，諸如歐洲專利申請EP-A-0510356和A-0593868中公開的那些接頭。聚乙二醇的分子量可在300至60000道爾頓之間變化，一種或多種接頭、優(yōu)選一至三種接頭結(jié)合到干擾素α上。雖然本專利技術并不限于特定的聚乙二醇-干擾素α，在一個優(yōu)選的實施例中，與干擾素α化學結(jié)合的聚乙二醇的平均分子量是40000，其中所述的優(yōu)選的聚乙二醇-干擾素α分子是單一聚乙二醇分子與單一干擾素α分子化學結(jié)合的分子。優(yōu)選的連結(jié)方式為通過酰胺鍵使所述的PEG分子與干擾素α分子連結(jié)。本專利技術的制劑還可以包括任選的穩(wěn)定劑，如單糖類及其衍生物和/或二糖類。常用的單糖類有，例如，葡萄糖、果糖、甘露醇等，優(yōu)選甘露醇；本專利技術的制劑在凍干前，單糖類的含量為0.1-3％(w/v)，優(yōu)選0.5％(w/v)。常用的二糖類有，例如，蔗糖、乳糖、海藻糖等，優(yōu)選海藻糖；本專利技術的制劑在凍干前，二糖類的含量為0.1-3％(w/v)，優(yōu)選0.5％(w/v)。當單糖類和二糖類一起使用時，它們的總含量仍為0.1-3％(w/v)，單糖和二糖含量的比值為0.3-1，優(yōu)選0.5。這些單糖和二糖的保護作用，也可能是由于其在冷凍狀態(tài)下與聚乙二醇-干擾素α共濃縮，起到稀釋和保護聚乙二醇-干擾素α的作用，從而防止了聚合；另外，聚乙二醇-干擾素α包含結(jié)合的水分子，這些水分子被多元醇置換后可以提高蛋白的穩(wěn)定性。本專利技術的制劑也還可以包括任選的填充劑和/或滲透性調(diào)節(jié)劑。填充劑和/或滲透性調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選甘露醇，但也可以是具有相同作用的其它試劑，如NaCl，甘氨酸，葡聚糖，PVP，羧甲基纖維素等。本專利技術的制劑在凍干前，填充劑和～或滲透性調(diào)節(jié)劑的含量為3-8％(w/v)，優(yōu)選4.5(w/v)％。該制劑在凍干前還含有水，如無菌水，生理鹽水等等。優(yōu)選生理鹽水。按照本專利技術，一種可凍干的聚乙二醇-干擾素α溶液，用于制備本專利技術凍干制劑。該溶液每ml含有106-108IU、特別是1-18×106(IU)的聚乙二醇-干擾素α；含有谷氨酸1-50mmol，優(yōu)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：盛軍，劉麗軍，張雪梅，朱迅，張春麗，王志武，郭橋，郭立君，程曉耕，
申請(專利權)人：長春生物制品研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：