益母草總生物堿的制備方法及藥物新用途技術

本發明專利技術公開了益母草總生物堿的制備方法，該方法為，取益母草煎煮２－３次，提取濃縮液加乙醇沉淀１２～４８小時，濾液加入樹脂柱（床〕，水沖洗后，用鹽酸或堿沖洗，洗脫液濃縮后精制即得總生物堿。本發明專利技術還公開了益母草總生物堿在制備治療子宮內膜異位癥和制備降低雌激素水平的藥物中的應用。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種益母草總生物堿的制備方法及藥物新用途，特別是涉及一種益母草總生物堿在制備治療子宮內膜異位癥及降低雌激素水平的藥物中的應用。
技術介紹
目前國內外治療子宮內膜異位癥的方法很多，如期待療法、藥物療法、手術療法、藥物與手術綜合療法等。手術治療雖可緩解疼痛，但復發率高。在藥物治療方面，國外多采用丹哪唑(Danazol)假絕經療法，這種方法是通過藥物減少病灶的活性，使其逐漸消失。此法在改善病情及繼續使用率方面均比假孕療法效果好。盡管丹哪唑是當今治療子宮內膜異位癥普遍使用的藥物，但它的缺點是會造成低雌激素環境，從而引起異位內膜退變，由此出現陣熱、潮紅、骨質丟失等副反應，同時還影響患者的肝功能及血小板、血紅蛋白的產生，往往在治療早期即可引起肝功能的損害。中醫治療子宮內膜異位癥多用復方，常用的有活血化瘀法方用三棱，莪術、生蒲黃、王靈脂、桃仁等、補腎祛瘀法，方用仙靈脾、仙茅、熟地、山藥、雞血藤、丹參、香附、三棱、莪術等，也常用棉酚以及雷公藤多甙、異位安等。
技術實現思路
本專利技術目的在于提供一種益母草總生物堿的制備方法；本專利技術目的還在于提供一種益母草總生物堿在制備治療子宮內膜異位癥及降低雌激素水平的藥物中的應用。本專利技術益母草總生物堿的制備方法為取益母草，分別加水8-12倍加熱煎煮2-3次，每1.5～2小時，提取液合并濃縮至密度d-1.0～1.10，濃縮液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小時，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇60-80％，沉淀12～48小時，濾過，濾液回收乙醇完全，加鹽酸調至PH＝1～3，冷藏12～48小時，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱(床〕，用蒸餾水或去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干至無內容物后，用鹽酸或堿沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后精制，即浸膏加乙醇熱提取，濾過，提取液濃縮得總生物堿。精制還可以是浸膏酸水溶解，調PH＝1～3后，重復上陽離子交換樹脂柱，用蒸餾水或去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干至無內容物后，用鹽酸或堿沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止，洗脫液濃縮得總生物堿。本專利技術方法制備的總生物堿用雷氏胺鹽沉淀法檢測生物堿含量大于50％；用藥典法檢測水蘇堿含量大于20％。本專利技術是通過如下科學實驗完成的。實驗例1觀察益母草總生物堿對大鼠子宮內膜異位癥的影響一、方法利用大鼠自體子宮異位的方法，觀察益母草總生物堿對子宮內膜異位癥大鼠性激素E2的影響，并通過光鏡、電鏡觀察異位子宮內膜的形態變化。1、動物雌性SD大鼠，150g左右，由南京醫科大學實驗動物中心提供2、試劑益母草總生物堿 連云港康緣制藥有限公司提供 批號200009143、儀器1470WIZARDTM液閃儀4、EMT模型制備取雌性SD大鼠120只，隨機分為7組，分別為正常組10只；假手術組10只；模型組；陽性組；益母草總生物堿高、中、低三劑量組每組20只。除正常組外，余各組動物擇動情期，建立EMT動物模型。將大鼠以3％戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，于下腹正中做一垂直切口，挑出右側子宮角，切除7mm的子宮，于生理鹽水中分離子宮內膜，取3mm×3mm大小的子宮內膜片，令其表面上皮對著腹壁，將四角與腹壁肌肉縫合，并將右側斷離之子宮對接縫合，常規關腹消毒，并注射青霉素1萬單位/kg。假手術組僅切除子宮，并不將其異位。每日按劑量定時灌胃給藥，觀察并記錄大鼠生長情況。二、觀察指標 1.陰道脫落細胞生理鹽水混合陰道分泌物滴片，95％乙醇固定，HE染色，光鏡下直接觀察陰道脫落細胞角化率。于造模后連續觀察4-5天。2.移植物外觀分別于術后第8周剖腹觀察內膜移植物生長情況。用雙腳圓規測量其直徑。3.雌激素測定于給藥后一個月對大鼠眼眶后靜脈取血，分離血清，用放射免疫法測定E2水平。三.實驗結果1.對造模后大鼠進行連續5天的陰道脫落細胞觀察，結果顯示大鼠發情周期并未因異位內膜移植而改變。2.于術后8周對大鼠腹內異位子宮內膜進行觀察，結果顯示各大鼠內膜貼壁生長良好，呈丘疹形，透明，內有液體，說明本專利技術模型組造模成功(見表1〕。表1甲生物堿對大鼠異位子宮內膜的影響組別 劑量 動物數 半徑(mm)模型組 --9 0.53±0.25陽性組 0.35 9 0.51±0.25高劑量組 0.50 9 0.53±0.22中劑量組 0.25 8 0.44±0.19低劑量組 0.10 9 0.38±0.273.從大鼠血清雌激素測定資料統計可以看出子宮內膜異位癥大鼠E2有明顯的升高，模型組與正常組比較有明顯的差別(P＜0.01)，表明異位內膜生長良好并已對大鼠體內雌激素水平產生明顯的影響，而假手術組未見E2有變化給藥一個月后，益母草總生物堿各劑量組對E2的升高都有較明顯的降低作用，說明益母草總生物堿具有治療子宮內膜異位癥的作用(見表2-3〕。表2甲生物堿對子宮內膜異位癥大鼠E2、PRL的影響組別劑量(g/kg)動物數E2(pg/ml) PRL(mIU/ml)正常組 --1011.96±9.46 1.07±0.95假手術組--8 15.95±16.05 1.71±0.67模型組 --1849.03±31.89## 1.16±0.82陽性組 0.35 1526.40±19.53*1.22±0.55高劑量組0.50 1723.50±12.71*0.86±0.56中劑量組0.25 1521.51±18.31*1.10±0.70低劑量組0.10 1725.49±17.56*1.03±0.67表3甲生物堿對子宮內膜異位癥大鼠FSH、LH的影響組別劑量(g/kg)動物數FSH(mIU/ml) LH(ng/ml)正常組 --100.72±0.48 0.96±0.47假手術組--8 0.88±0.41 1.65±0.61模型組 --180.89±0.46 1.18±0.66陽性組 0.35 150.99±0.52 1.32±0.47高劑量組0.50 171.05±0.50 1.51±0.56中劑量組0.25 150.85±0.51 1.21±0.55低劑量組0.10 170.66±0.45 1.07±0.39實施例1取益母草，分別加水10倍加熱煎煮2次，每次1.5～2小時，提取液合并濃縮至密度d-1.7，濃縮液加乙醇至含醇60％沉淀24小時，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇80％沉淀24小時，濾過，濾液回收乙醇完全；加1mol/L鹽酸調至PH＝1～3，冷藏24小時，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱，用蒸餾水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無內容物后，用1-3mol/L氨水沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后繼續精制，浸膏加乙醇熱提取，濾過，提取液濃縮得總生物堿。實施例2取益母草，分別加水9倍加熱煎煮3次，每次1.5～2小時，提取液合并濃縮至密度d-1.5，濃縮液加乙醇至含醇65％沉淀36小時，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇75％沉淀36小時，濾過，濾液回收乙醇完全；加1mol/L鹽酸調至PH＝1～3，冷藏36小時，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂上，用去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干后無本文檔來自技高網...

【技術保護點】
益母草總生物堿的制備方法，其特征在于該方法為，取益母草，分別加水８－１２倍加熱煎煮２－３次，每１．５～２小時，提取液合并濃縮至密度ｄ－１．０～１．１０，濃縮液加乙醇至含醇６０－８０％，沉淀１２～４８小時，濾過，濾液回收乙醇完全；濃縮液加乙醇至含醇６０－８０％，沉淀１２～４８小時，濾過，濾液回收乙醇完全，加鹽酸調至ＰＨ＝１～３，冷藏１２～４８小時，濾過；濾液加入陽離子交換樹脂柱（床），用蒸餾水或去離子水沖洗至水液清亮，水液蒸干至無內容物后，用鹽酸或堿沖洗樹脂柱，至用生物堿檢測試劑檢測無生物堿為止；洗脫液濃縮后精制即得總生物堿。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：蕭偉，戴翔翎，凌婭，詹永成，劉濤，廖正根，
申請(專利權)人：江蘇康緣藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：32[中國|江蘇]