氧化苦參堿在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的應用制造技術

本發明專利技術公開了氧化苦參堿（苦參素）在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的新用途。氧化苦參堿毒性低，臨床使用安全、方便；氧化苦參堿在對腎綜合征出血熱病毒體外、體內抑制實驗研究顯示，氧化苦參堿對細胞的毒性作用低、對腎綜合征出血熱病毒有直接殺滅作用并能明顯抑制該病毒的增殖；對感染該病毒的地鼠有明顯保護作用，使其發病時間推遲、病程延長、死亡率降低；臨床試驗研究表明，氧化苦參堿對控制該病毒感染有一定作用，能加快退熱時間、改善腎功能、減少出血、改善肝功能、減少少尿期發生。因此氧化苦參堿是治療腎綜合征出血熱有效、安全的藥物。（*該技術在2021年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及氧化苦參堿(苦參素)的用途，尤其涉及氧化苦參堿在制藥領域的用途。氧化苦參堿是一種用途十分廣泛的氧化生物堿，中國專利96109782.5公開了氧化苦參堿在制備治療乙型病毒性肝炎藥物中的應用；中國專利00125891.5公開了氧化苦參堿在制備治療肝纖維化藥物中的應用；中國專利00125890.7公開了氧化苦參堿在制備治療丙型病毒性肝炎藥物中的應用；中國專利公開了00127585.2氧化苦參堿在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用，而該化合物在制備治為腎綜合征出血熱藥物中的應用尚未見報道。世界上人類病毒性出血熱共有13種，根據該病腎臟有無損害，分為有腎損及無腎損兩大類。在我國主要為腎綜合征出血熱(HFRS)，又稱流行性出血熱(EHF)；在朝鮮稱朝鮮出血熱(KHF)；在蘇聯稱出血性腎病腎炎(HNN)；由于特異性血清學診斷的確立及病原學的解決，1982年世界衛生組織統一定名為腎綜合征出血熱。本病是由朝鮮出血熱病毒(或稱漢坦病毒)引起，以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病；可通過呼吸道、消化道、接觸傳播、母嬰傳播和蟲媒傳播；以發熱、出血傾向及腎臟損害為主要臨床特征的急性病毒性傳染病，典型的出血熱一般有發熱、低血壓、少尿、多尿及恢復五期經過，如處理不當病死率很高；HFRS病毒的傳播幾乎遍及世界各大洲。在我國已有半個世紀的流行史，八十年代中期以來，我國本病年發病數逾已10萬，已成為除病毒性肝炎外，危害最大的一種病毒性疾病。研究表明，腎綜合征出血熱的致病機理主要有(1)早期發病可能是由于病毒直接作用結果，與感染病毒株的型別、毒力、數量以及病毒結構蛋白不同有關。本病毒為單鏈、負性RNA型，分大(L)、中(M)、小(S)三不同片段屬布尼亞病毒科的一個新屬，稱為漢坦病毒屬，病毒蛋白由四個結構蛋白組成，即G1、G2為包膜糖蛋白，NP為核蛋白，L蛋白可能為多聚酶。G1、G2蛋白上存在中和抗原和血凝素抗原，并能誘導中和抗體；(2)由病毒啟動的免疫損傷。病毒在機體內大量復制，同時刺激免疫系統產生抗體，并能激活補體系統產生組胺等活性物質使血管擴張，血漿外滲近而形成免疫復合物在血管、腎小球基底膜、血小板等表面沉積，形成變態反應；(3)微循環障礙。目前對腎綜合征出血熱主要采用綜合性治療，特別應早期抓好抗病毒治療及液體療法，對重癥患者要及時抓緊抗休克、預防出血及腎功能衰竭的治療，早期積極地抗病毒治療，對減輕病理損傷、阻斷病情進展具有重要作用。迄今尚缺乏可治愈腎綜合征出血熱的特異藥物。臨床上多采用病毒唑、干擾素等抗病毒治療，效果尚不能肯定。因此，在臨床實踐中，發展了多種對腎綜合征出血熱有一定療效的中藥或中西藥復方制劑，臨床應用表明，這些藥物對緩解癥狀，減少西藥用量，或在一定時期作為主要治療藥物等均有一定的積極作用。據《本草綱目》記載中藥苦參，性寒味苦，具有清熱解毒、抗菌消炎作用；近15年對氧化苦參堿及苦參堿的研究較多，1994年上海市傳染病醫院實驗發現氧化苦參堿有抗麻鴨乙型肝炎病毒作用，其作用機制可能與氧化苦參堿特殊的極性分子結構有關，這一發現提示氧化苦參堿可能具有廣泛的抗病毒作用，可減輕病毒對組織器官的病理性損傷，迅速控制病毒血癥；氧化苦參堿及苦參堿可抑制炎癥介質的釋放，可調節小鼠和大鼠腹腔肥大細胞組織胺釋放，可有效抑制IgE交聯及組胺、白三烯等介質釋放，并具有穩定細胞膜用；氧化苦參堿對免疫系統細胞增殖的影響同細胞狀態密切相關，升高白細胞作用及抑制自身免疫可應用于自身免疫性肝炎及白細胞及血小板減少的治療，這種雙向免疫調節功能，可緩解繼發性細胞因子在發病機理中間環節作用，從而阻斷病理改變過程，使病情得到逆轉。近年來研究發現苦參素可用于治療腎綜合征出血熱，顯示一定療效。
技術實現思路
本專利技術需要解決的技術問題是提供氧化苦參堿的新用途，即在制藥中的新用途，具體說是提供氧化苦參堿在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的應用。為了更好地理解本專利技術的實質，以下將氧化苦參堿的毒性實驗、實驗研究和臨床實驗結果來說明其在制藥領域中的應用。氧化苦參堿是從苦參或苦豆子中提取的白色水溶液性固體，分子式C15H24N2O2·H2O，分子量為284.36。采用文獻“中藥化學成分提取分離手冊”，中國中醫藥出版社，1998年8月第1版報道的方法提取分離氧化苦參堿，純度98％以上，其余為槐定堿。用無熱源去離子水的純凈蒸餾水將氧化苦參堿溶解，消毒配制成400mg/ml/支或800mg/2ml/支的注射劑備用；或按本領域技術人員公知的方法制備氧化苦參堿膠囊，以淀粉為填充劑，以8％淀粉漿為黏合劑，制成顆粒，然后裝膠囊，制成的膠囊規格為400mg/囊。具體實驗和臨床結果分述如下一、動物毒性實驗1小鼠口服苦參素急性毒性實驗在中科院上海藥物研究所進行。采用實施例3所配制的膠囊，昆明小鼠一次灌胃苦參素，根據預實驗，最高劑量443.0mg/kg，以0.75的比例遞減，即為443.0、332.0、249.0、186.9、140.2mg/kg5個劑量組，連續觀察14天。大劑量組(443.0、332.0mg/kg)藥后5～10分鐘活動稍減少，20分鐘左右呈現雙耳發紅。各給藥組均出現大便濕軟，但成形。死亡發生在24小時內，尸檢可見心臟淤血，其它各臟器未見明顯異常。存活者15天全部解剖，肉眼檢查主要臟器未見病變。死亡率用Bliss法求得LD50為234.55mg/kg；95％可信限為202.15～272.14mg/kg。2苦參素小鼠肌肉注射急性毒性實驗在上海醫科大學藥學院進行。采用實施例1配制的注射劑，昆明小鼠肌肉注射，用死亡率用Bliss法求得LD50為452.24mg/kg；95％可信限為366.77～551.35mg/kg。死亡動物尸檢肉眼未見任何病變。小結上述實驗說明苦參素毒性非常低，臨床使用安全。二、苦參素抗腎綜合征出血熱病毒的實驗研究(一)對腎綜合征出血熱病毒體外抑制實驗 1材料(1)病毒株國際標準腎綜合征出血熱病毒76-118株，由中國預防醫學科學院研究所保存。實驗用每毫升含100個病毒感染性滴度的病毒(100TCID50/ml)。(2)細胞非洲綠猴腎Vero傳代的E6克隆系，139～141代。其中含3％小牛血清維持液。(3)藥物采用實施例1的注射劑。各稀釋度均用維持液配制。實驗過程中設立空白對照。2方法(1)藥物對Vero E6細胞的毒性作用。將已長成單層的Vero E6細胞分別以5、10、50、100、200、300、500、750、1000μg/ml的藥物濃度處理培養2周后，觀察細胞形態。(2)藥物對腎綜合征出血熱病毒侵入細胞的阻斷作用。以20、50、100、200、300、500μg/ml的藥物濃度預處理細胞12小時后，再以腎綜合征出血熱病毒攻擊，培養2周后用免疫熒光法檢查。(3)對腎綜合征出血熱病毒的直接殺滅作用。以50、100、200、300、500、750μg/ml的藥物濃度和100TCID50/0.1ml的病毒等量混合，作用不同時間后，再將其感染細胞，用免疫熒光法檢查。(4)對腎綜合征出血熱病毒的增殖抑制作用。病毒感染細胞24小時后，以不同的藥物濃度加入細胞培養基，培養2周后用免疫熒光法檢查。1觀察指標以免疫熒光法檢測細胞內病毒抗原，如果感染細胞未見熒光陽本文檔來自技高網...

【技術保護點】
氧化苦參堿在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的應用。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳同新，潘怡，
申請(專利權)人：上海綠谷偉業生態工程有限公司，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]