一種再生微載體的方法技術

本發明專利技術涉及一種再生微載體的方法，適用于生物制藥領域，其特點是有以下步驟：（１）將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出；（２）微載體堿處理；（３）微載體酸處理；（４）微載體電荷處理：（５）調節微載體混懸液的ｐＨ值在７．３５～７．４５范圍內；將處理好的微載體裝入容器待用。本發明專利技術可有效降低微載體的成本，并可多次處理，再生后的微載體的細胞貼壁效果理想與新微載體幾乎一樣，可在不影響培養效果前提下降低使用成本。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種生物制品的再生方法，特別是涉及一種廣泛應用于生物制藥領域的微載體的再生方法，屬于生物醫藥

技術介紹
微載體是指直徑在60-250μm，能適用于貼壁細胞生長的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各種合成的聚合物組成。微載體培養優點有：1表面積/體積大，因此單位體積培養液的細胞產率高；2把懸浮培養和貼壁培養融合在一起，兼有兩者的優點；3可用簡單的顯微鏡觀察細胞在微珠表面的生長情況；4簡化了細胞生長各種環境因素的檢測和控制，重現性好；5培養基利用率較高；6放大容易；7細胞收獲過程不復雜；8勞動強度?。?培養系統占地面積和空間小。美國GE公司銷售的微載體廣泛應用于生物制藥領域，是一種化學穩定細胞培養基質。但這種微載體制造技術要求高，國內只能依靠進口，成本比較高，很難推廣。國外大公司出于種種考慮僅使用一次，而國內企業卻希望能夠多次使用，從而降低生產成本。但據本申請人的檢索，一直都沒有比較好的再生方法披露。
技術實現思路
本專利技術的目的在于針對上述問題提供一種使用方便、價格便宜且高效的再生微載體的方法。據研究，控制細胞貼壁的基本因素是電荷密度而不是電荷性質。若電荷密度太低，細胞貼附不充分，但電荷密度過大，反而會產生“毒性”效應。細胞與微載體的相融性，是與微載體表面理化性質有關。一般細胞在進入生理PH值時，表面帶負電荷。若微載體帶正電荷，則利用靜電引力可加快細胞貼壁速度。若微載體帶負電荷，因靜電斥力使細胞難于黏附貼壁，但培養液中溶有或微載體表面吸附著二價陽離子作為媒介時，則帶負電荷的細胞也能貼附。正是基于此原理，微載體可以再生。本專利技術給出的技術解決方案是：這種再生微載體的方法，其特征在于有以下步驟：(1)將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出；(2)微載體堿處理：向桶內加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0.6-1.0M，充分攪拌后靜止放置過夜；(3)微載體酸處理：分層后倒出上清液，在帶有篩網的容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的堿至PH值約為8.0-10.0，后加入37％的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL終濃度為0.3-0.5M，充分攪拌后靜止放置過夜；(4)微載體電荷處理：分層后倒出上清液，在篩網容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的酸至PH值約為4.0-6.0，用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升，然后用緩沖液清洗兩遍，使微載體帶正電荷，根據體積折算質量，每100克微載體的沉降體積為1.6-->升，將每100g微載體裝入瓶內，補加磷酸鹽緩沖液；(5)調節pH值：用5M的氫氧化鈉溶液調整微載體混懸液的pH值在7.35～7.45范圍內。將處理好的微載體裝入容器待用。與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：1可有效降低微載體的成本，并可多次處理2細胞貼壁效果理想與新微載體幾乎一樣，可在不影響培養效果前提下降低使用成本。具體實施方式本專利技術可以通過以下實施例實現，但不受以下實施例中比例、組成、方法、步驟的限制。應該理解，這里討論的實施例和實施方案只是為了說明，對熟悉該領域的人可以提出各種改進和變化，這些改進和變化將包括在本申請的精神實質和范圍以及所附的權利要求范圍內。實施例11將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出。2微載體堿處理：按一定比例向桶內加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0.6M，充分攪拌后靜止放置過夜。3微載體酸處理：分層后倒出上清液，在帶有篩網的容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的堿至PH值為8.0。后加入37％的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL終濃度為0.3M，充分攪拌后靜止放置過夜。4微載體電荷處理：分層后倒出上清液，在篩網容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的酸至PH值為4.0。用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升。然后用緩沖液清洗兩遍，使微載體帶正電荷。根據體積折算質量，每100克微載體的沉降體積為1.5升，將100g沉降后微載體裝入瓶內，補加磷酸鹽緩沖液。5調節pH值：用5M的氫氧化鈉溶液調整微載體混懸液的pH值在7.35。將處理好的微載體裝入容器待用。實施例21將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出。2微載體堿處理：按一定比例向桶內加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為1.0M，充分攪拌后靜止放置過夜。3微載體酸處理：分層后倒出上清液，在帶有篩網的容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的堿至PH值為10.0。后加入37％的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL終濃度為0.5M充分攪拌后靜止放置過夜。4微載體電荷處理：分層后倒出上清液，在篩網容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的酸至PH值約為6.0。用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升。然后用緩沖液清洗兩遍，使微載體帶正電荷。根據體積折算質量，每100克微載體的沉降體積為1.4升，將100g沉降后微載體裝入瓶內，補加磷酸鹽緩沖液。5調節pH值：用5M的氫氧化鈉溶液調整微載體混懸液的pH值在7.45。將處理好的微載體裝入容器待用。-->實施例31將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出。2微載體堿處理：按一定比例向桶內加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0.8M，充分攪拌后靜止放置過夜。3微載體酸處理：分層后倒出上清液，在帶有篩網的容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的堿至PH值為9.0。后加入37％的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL終濃度為0.4M，充分攪拌后靜止放置過夜。4微載體電荷處理：分層后倒出上清液，在篩網容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的酸至PH值為5.0。用注射用水配制0.5M磷酸鹽緩沖液100升。然后用緩沖液清洗兩遍，使微載體帶正電荷。根據體積折算質量，每100克微載體的沉降體積為1.6升，將100g沉降后微載體裝入瓶內，補加磷酸鹽緩沖液。5調節pH值：用5M的氫氧化鈉溶液調整微載體混懸液的pH值在7.4。將處理好的微載體裝入容器待用。-->本文檔來自技高網...

【技術保護點】
１．一種再生微載體的方法，其特征在于有以下步驟：（１）將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出；（２）微載體堿處理：向桶內加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為０．６－１．０Ｍ，充分攪拌后靜止放置過夜；（３）微載體酸處理：分層后倒出上清液，在帶有篩網的容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的堿至ＰＨ值約為８．０－１０．０，后加入３７％的鹽酸（單位體積加入４０ｍｌ鹽酸），使ＨＣＬ終濃度為０．３－０．５Ｍ，充分攪拌后靜止放置過夜；（４）微載體電荷處理：分層后倒出上清液，在篩網容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的酸至ＰＨ值約為４．０－６．０，用注射用水配制０．５Ｍ磷酸鹽緩沖液１００升，然后用緩沖液清洗兩遍，使微載體帶正電荷，根據體積折算質量，每１００克微載體的沉降體積為１．６升，將每１００ｇ微載體裝入瓶內，補加磷酸鹽緩沖液；（５）調節ｐＨ值：用５Ｍ的氫氧化鈉溶液調整微載體混懸液的ｐＨ值在７．３５～７．４５范圍內。將處理好的微載體裝入容器待用。

【技術特征摘要】
1.一種再生微載體的方法，其特征在于有以下步驟：(1)將裝有微載體的塑料桶內上層廢液倒出；(2)微載體堿處理：向桶內加入固體分析純氫氧化鈉，使其濃度為0.6-1.0M，充分攪拌后靜止放置過夜；(3)微載體酸處理：分層后倒出上清液，在帶有篩網的容器內用注射用水清洗微載體，洗去多余的堿至PH值約為8.0-10.0，后加入37％的鹽酸(單位體積加入40ml鹽酸)，使HCL終濃度為0.3-0.5M，充分攪拌后靜止放置過夜；...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李旭，
申請(專利權)人：遼寧成大生物股份有限公司，
類型：發明
國別省市：89[中國|沈陽]