本發明專利技術涉及一種用于檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的引物序列及檢測方法，該引物序列由上游引物和下游引物組成，上游引物是序列表中SEQ?ID?NO.1所述的核苷酸序列，下游引物是序列表中SEQ?ID?NO.2所述的核苷酸序列。本發明專利技術具有快速、簡便、穩定、可靠、低成本、不受環境條件影響等優點，對津優36號黃瓜雜交種子純度進行鑒定只需要5-6小時就可以完成一個批次的鑒定。節省了大量人力、地力，鑒定結果快速準確。在黃瓜種子純度鑒定上具有很大的應用價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物
，具體地涉及一種。
技術介紹
種子純度鑒定是保證種子質量的關鍵環節。隨著育種進程的加快，黃瓜新品種數量不斷增加，需要進行品種純度鑒定的材料量將會越來越大。以往常規的純度鑒定都是在田間進行，結瓜期由專家到田間觀察品種的特征特性及一致性，存在周期長、工作量大、易受環境因素的影響、表型特征會有一定程度偏差等問題，可能影響品種純度鑒定的準確性， 并直接影響到到良種的推廣；此外由于鑒定周期長，當年生產的種子往往要到次年才能銷售，造成商機喪失。分子標記技術的誕生，為種子純度的分子鑒定奠定了技術基礎。分子標記可以直接以DNA的形式表現，在生物體的各個組織、各個發育階段均可檢測到，不受季節、環境限制，不存在表達與否等問題。尤其是微衛星(SSR)技術，微衛星DNA數量多且均勻分布在基因組中，具有豐富的多態性，并且微衛星位點檢測可以顯示純合子和雜合子，易檢測、重復性好、省時，適合于大通量分析。目前黃瓜種子純度的SSR鑒定方法尚未見報道。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種用于檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的引物序列。本專利技術的另一個目的是克服現有技術的不足，提供一種能快速地檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的方法。本專利技術的技術方案概述如下用于檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的引物序列，它由上游引物和下游引物組成，所述上游引物是序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中 SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列。檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的方法，包括如下步驟(1)提取津優36號黃瓜雜交種子基因組DNA ；(2)進行PCR擴增在PCR擴增專用薄壁管中加入津優36號黃瓜雜交種子基因組 DNAlO 20ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列15 30ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列15 30ng、l倍的含Mg2+的PCR緩沖液、dNTP 2mmol、Taq DNA 聚合酶0.5 1單位，加無菌重蒸餾水至10 μ 1 ；將PCR擴增專用薄壁管放入PCR儀中擴增， 擴增條件為94°C預變性180秒；94°C變性30秒，50_55°C退火30秒，72°C延伸60秒，30個循環；再72°C延伸7min，擴增完成；(3)PCR擴增產物的凝膠電泳分析將擴增產物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳分離；在擴增產物中加入變性凝膠上樣緩沖液，上樣于經30分鐘預電泳的變性聚丙烯胺凝膠上，70W恒功率電泳至溴酚蘭剛剛到達凝膠的另一端，凝膠經硝酸銀染色后在可見光下觀察、照相；(4)依據被鑒定樣品在凝膠上條帶的相對位置，檢測津優36號黃瓜雜交種子純度。本專利技術具有快速、簡便、穩定、可靠、低成本、不受環境條件影響等優點，對津優36 號黃瓜雜交種子純度進行鑒定只需要5-6小時就可以完成一個批次的鑒定。節省了大量人力、地力，鑒定結果快速準確。在黃瓜種子純度鑒定上具有很大的應用價值。附圖說明圖1為津優36號黃瓜PCR擴增產物的凝膠電泳圖. 具體實施例方式下面結合附圖及具體實施例對本專利技術作進一步的說明，下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本專利技術，但不以任何方式限制本專利技術。實施例1檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的方法，包括如下步驟(1)提取津優36號黃瓜雜交種子發芽36小時后根尖的基因組DNA ；(2)進行PCR擴增在PCR擴增專用薄壁管中加入津優36號黃瓜雜交種子基因組 DNAlOng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列15ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列15ng、1倍的含Mg2+的PCR緩沖液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶0. 5單位， 加無菌重蒸餾水至10μ 1 ；將PCR擴增專用薄壁管放入PCR儀中擴增，擴增條件為94°C預變性180秒；94°C變性30秒，50°C退火30秒，72°C延伸60秒，30個循環；再72°C延伸7min, 擴增完成；(3)PCR擴增產物的凝膠電泳分析將擴增產物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳分離；在擴增產物中加入變性凝膠上樣緩沖液，上樣于經30分鐘預電泳的變性聚丙烯胺凝膠上，70W恒功率電泳至溴酚蘭剛剛到達凝膠的另一端，凝膠經硝酸銀染色后在可見光下觀察、照相；(4)依據被鑒定樣品在凝膠上條帶的相對位置，檢測津優36號黃瓜雜交種子純度。如圖1所示，津優36號雜交種子在大約150bp處同時具有箭頭1和箭頭2所示的條帶， 在此位置只有1或者2，或者二者都沒有的，不是該品種。實施例2檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的方法，包括如下步驟(1)提取津優36號黃瓜雜交種子基因組DNA ；(2)進行PCR擴增在PCR擴增專用薄壁管中加入津優36號黃瓜雜交種子基因組 DNA20ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列30ng、序列表中SEQ ID N0. 2所述的核苷酸序列30ng、1倍的含Mg2+的PCR緩沖液、dNTP 2mmol,Taq DNA聚合酶1單位，加無菌重蒸餾水至10 μ 1 ；將PCR擴增專用薄壁管放入PCR儀中擴增，擴增條件為94°C預變性180秒；94°C變性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸60秒，30個循環；再72°C延伸7min， 擴增完成；(3)PCR擴增產物的凝膠電泳分析將擴增產物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳分離；在擴增產物中加入變性凝膠上樣緩沖液，上樣于經30分鐘預電泳的變性聚丙烯胺凝膠上，70W恒功率電泳至溴酚蘭剛剛到達凝膠的另一端，凝膠經硝酸銀染色后在可見光下觀察、照相；(4)依據被鑒定樣品在凝膠上條帶的相對位置，檢測津優36號黃瓜雜交種子純度。實施例3檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的方法，包括如下步驟(1)提取津優36號黃瓜雜交種子基因組DNA ；(2)進行PCR擴增在PCR擴增專用薄壁管中加入津優36號黃瓜雜交種子基因組 DNA15ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列20ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列20ng、1倍的含Mg2+的PCR緩沖液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶0. 8單位， 加無菌重蒸餾水至10μ 1 ；將PCR擴增專用薄壁管放入PCR儀中擴增，擴增條件為94°C預變性180秒；94°C變性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸60秒，30個循環；再72°C延伸7min, 擴增完成；(3)PCR擴增產物的凝膠電泳分析將擴增產物采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳分離；在擴增產物中加入變性凝膠上樣緩沖液，上樣于經30分鐘預電泳的變性聚丙烯胺凝膠上，70W恒功率電泳至溴酚蘭剛剛到達凝膠的另一端，凝膠經硝酸銀染色后在可見光下觀察、照相；(4)依據被鑒定樣品在凝膠上條帶的相對位置，檢測津優36號黃瓜雜交種子純度。津優36號黃瓜雜交種子由天津科潤農業科技股份有限公司出售。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．用于檢測津優３６號黃瓜雜交種子純度的引物序列，其特征是它由上游引物和下游引物組成，所述上游引物是序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中ＳＥＱＩＤ ＮＯ．２所述的核苷酸序列。
【技術特征摘要】
1.用于檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的引物序列，其特征是它由上游引物和下游引物組成，所述上游引物是序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列，所述下游引物是序列表中SEQID NO. 2所述的核苷酸序列。2.檢測津優36號黃瓜雜交種子純度的方法，其特征是包括如下步驟(1)提取津優36號黃瓜雜交種子基因組DNA；(2)進行PCR擴增在PCR擴增專用薄壁管中加入津優36號黃瓜雜交種子基因組 DNAlO 20ng，再加入序列表中SEQ ID NO. 1所述的核苷酸序列15 30ng、序列表中SEQ ID NO. 2所述的核苷酸序列15 30ng、l倍的含Mg2+的PCR緩沖液、dNTP ...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張桂華，杜勝利，王全，崔興華，李鵬宇，李加旺，韓毅科，魏愛民，劉楠，
申請(專利權)人：天津科潤農業科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：12
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