本發明專利技術涉及L-核糖-LNA類似物。核苷類似物，其中，用在C-3’與C-4’轉化的立體化學合成2’-4’-橋接鎖定核苷構型的核苷類似物，以提供L-核糖-構型LNA核苷。該L-核糖-LNA-核苷合成可應用于所有核堿基，該核堿基包含胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和尿嘧啶。這些具有L-核糖-構型的鎖定核酸(LNA)已用于2’-O-4’-亞甲基-α-L-核糖呋喃糖基核苷酸以及其中含有L-核糖-LNA核苷酸的寡核苷酸的合成。利用這些L-核糖-LNA改性寡核苷酸，借助它們對于互補核酸的高親和性，大幅改善靶標互補核酸的方法。（*該技術在2020年保護過期，可自由使用*）
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及L-核糖-構型雙環狀核苷類似物領域，以及用于合成寡核苷酸形成的核苷酸類似物的合成，該合成寡核苷酸可形成具有互補單鏈與雙鏈核酸的核堿基特定性雙顯性組合(duplexes)。本專利技術還涉及可用來作為治療藥物并可結合于寡核苷酸的L-核糖-構型雙環狀核苷類似物的領域。
技術介紹
合成寡核苷酸是在不同領域廣泛使用的化合物，例如用于分子生物及以DNA為基礎的診斷和治療。綜合考慮為了廣泛地用于不同的應用范圍，寡核苷酸必須滿足許多不同的要求。以作為治療劑為例，有用的寡核苷酸必須能夠穿過細胞膜，具有良好的抗細胞外及細胞內核酸酶的性能，優選具有補充如RNAseH的內源酶的能力。在以DNA為基礎的治療及分子生物學中， 其它性能，例如寡核苷酸對于作用在天然核酸的大量不同酶成長作為有效基質的能力很重要，該天然核酸如聚合酶、激酶、連接酶和磷酸酶。然而，各種用途的基礎是寡核苷酸的基本性能寡核苷酸可辨識和雜交互補單鏈核酸的特異性序列，采用Watson-Crick氫鍵(A-T and G-C)或其它氫鍵結構如Hoogsteen模式。有兩個重要術語即親和力和特異性，常用于表現寡核苷酸的雜交性能。親合性為該寡核苷酸對其互補目標序列的鍵合強度的測量(用該雙顯性組合的熱穩定性(Tm)表示)。該雙顯性組合中各核堿基對增加熱穩定性，因此親合性隨該寡核苷酸尺寸(核堿基)增大而增加。特異性為該寡核苷酸在完全互補和錯配目標序列之間的辨別能力的測量。換言之，特異性為目標物中與錯配核堿基有關的親合性損失的測量。在寡核苷酸尺寸恒定時，特異性隨著該寡核苷酸及其目標物之間的錯配數目增加而增加(亦即，錯配的百分比增加)。反之，在錯配數目恒定時，當寡核苷酸尺寸增加時，特異性會減少(即錯配的百分比減少)。換言之，寡核苷酸親合性的增加是以犧牲其特異性為代價的，反之亦然。—般而言，考慮到天然寡核苷酸的缺點，增強特異性及親合性的新方法對于以DNA 為基礎的治療、診斷及對于分子生物技術極為令人期待。受構型限制的核苷已知寡核苷酸在雜交成為目標序列期間會經過構型轉化，由單鏈態的相對任意線圈結構變成雙顯性組合態的規則結構。因此，構型限制近年來已應用在寡核苷酸，以尋找較未改性(2’_脫氧)寡核苷酸顯示改良的雜交性能。例如具有附加的C-3’、C-5’ -橋亞乙基的雙環[3.3.0]核昔(M. Tarkoy3 M. Bolli, B. Schweizer and C. Leumann, Helv. Chem. Acta, 1993, 76,481 ； Tarkdy and C. Leumann, Angew. Chem. , Int. Ed. Engl. , 1993,32,1432 ；M. Egli, P. Lubini, Μ. Dobler and C. Leumann, J. Am. Chem. Soc. , 1993115, 5855 ；M. Tark5y, M. Bolli andC.Leumann, Helv. Chem. Acta,1994,77,716 ；M.Bolli and C. Leumann, Angew. Chem. , Int. Ed. Engl. , 1995,34,694 ；M. Bolli, P. Lubini and C. Leumann, Helv. Chem. Acta, 1995, 78, 2077 ； J. C. Litten, C. Epple and C. Leumann, Bioorg. Med. Chem. Lett. , 1995, 5,1231 ； J. C. Litten, C. Leumann, Helv. Chem. Acta, 1996, 79,1129 ；M. Bolli, J. C. Litten, R. Schiiltz and C. Leumann,Chem. Biol. , 1996,3,197 ；M.Bolli,H. U. Trafelet and C. Leumann,Nucleic Acids 徹8.，1996，24，4660)、具有一附加(-1，、(-6，或 C_6，、C_4，-橋亞甲基的雙碳環[3. 1.0]核苷(K. -H. Altmann, R. Kesselring, Ε. Francotte and G. Rihs, Tetrahedrn Lett. ,1994,35,2331 ；K. -H. Altmann, R. Imwinkelried, R. Kesselring and G. Rihs, Tetrahedron Lett. , 1994, 35, 7635 ；V. Ε. . Marquez, Μ. A. Siddiqui, Α. Ezzitouni, P. Russ, J. Wang, R. W. Wagner and M. D. Matteucci, J. Med. Chem. , 1996, 39, 3739 ；A. Ezzitouni and V. E. Marquez, J. Chem. Soc.，Perkin Trans. 1，1997，1073)、含有一與一未經改性核苷合成為二聚物的附加C-2’、C-3’ - 二氧戊環的雙環狀[3. 3.0]-和[4. 3.0]核苷，其中該附加環為核苷間鍵替代天然磷酸二酯鍵的部份(R. J. Jones, S. Swaminathan, J. F. Mil lagan, S. Wadwani, B. S. Froehler and Μ. Matteucci, J. Am. Chem. Soc. , 1993,115, 9816 ； J. Wang and M. D. Matteucci，Bioorg. Med. Chem. Lett.，1997，7，229)、包含一具有 C_2，、C_3，-橋亞甲基作為酰胺及磺酰胺型核苷間鍵部份的二聚物(C. G. Yannopoulus, W. Q. Zhou, P. Nower,D.Peoch, Y. S. Sanghvi and G. Just, Synlett，1997，378)、雙環狀[3.3.0]葡萄糖衍生的核苷類似物透過甲醛核苷間鍵加入三聚物中間(C. G. Yannopoulus, W.Q.Zhou，P. Nower, D. Peoch, Y. S. Sanghvi and G. Just, Synlett, 1997，378)，具有 C_2，、C-3，連接六元環和五元環的雙環狀[4. 3.0]-與[3.3.0]核苷(P. Nielsen, H. Μ. Pfundheller, J. Wenge 1, Chem. Commun. ,1997,826 ；P.Nielsen, H. Μ· Pfundheller, Jffengel, XII International Roundtable !Nucleosides, Nucleotides and Their BiologicalApplication ；La Jolla, California, September 15-19,1996 ；Poster PPI 43)已合成并結合到寡脫氧核苷酸中。在所發現的適度改善雙本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．一種寡聚物，含有至少一種通式Ｉａ的核苷類似物，其中Ｘ選自－Ｏ－；Ｂ為核堿基，選自腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶、嘌呤、黃嘌呤、二胺基嘌呤、８－氧基－Ｎ６－甲基腺嘌呤、７－脫氮黃嘌呤、７－脫氮鳥嘌呤、Ｎ４，Ｎ４－乙醇胞嘧啶、Ｎ６，Ｎ６－乙醇－２，６－二胺基嘌呤、５－甲基胞嘧啶、５－（Ｃ３－Ｃ６）炔基胞嘧啶、５－氟尿嘧啶、５－溴尿嘧啶、擬異－胞嘧啶、２－羥基－５－甲基－４－三唑吡啶、異胞嘧啶、異鳥嘌呤或肌苷；Ｐ表示與后一單體連接的核苷間鍵的自由基位置、或５’－端基；Ｐ＊表示與前一單體連接的核苷間鍵的自由基位置、或３’－端基；Ｒ２＊與Ｒ４＊一起表示－Ｏ－ＣＨ２－的雙自由基，在此取代基Ｒ１＊、Ｒ２、Ｒ３＊、Ｒ５、Ｒ５＊分別為氫；和其堿性鹽類和酸加成鹽類。
【技術特征摘要】
1999.05.04 DK PA199900603;1999.09.01 DK PA199901221. 一種寡聚物，含有至少一種通式Ia的核苷類似物，其中X選自-0-;B為核堿基，選自腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶、嘌呤、黃嘌呤、二胺基曙呤、8-氧基-N6-甲基腺嘌呤、7-脫氮黃嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、N4, N4-乙醇胞嘧啶、N6，N6-乙醇-2，6-二胺基嘌呤、5-甲基胞嘧啶、5-(C3-C6)炔基胞嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、擬異-胞嘧啶、2-羥基-5-甲基-4-三唑吡啶、異胞嘧啶、異鳥嘌呤或肌苷； P表示與后一單體連接的核苷間鍵的自由基位置、或5’ -端基； P*表示與前一單體連接的核苷間鍵的自由基位置、或3’ -端基； R2*與R4* —起表示-O-CH2-的雙自由基， 在此取代基R1*、R2> R3*、R5> R5*分別為氫； 和其堿性鹽類和酸加成鹽類。2.如權利要求1所述的寡聚物，包括1至9個通式Ia的核苷類似物及0至13個選自天然產生的核苷。3.如權利要求2所述的寡聚物，其中該寡核苷酸包括至少7個連續所述核苷類似物單體。4.如權利要求2所述的寡聚物，其中該寡聚物的所有核苷單體為所述核苷類似物。5.如權利要求1所述的寡聚物，其中所述核苷類似物的任一核苷間鍵選自由2至4個選自-CH2-、-0-、-P0 (R”)-、和-PO (NHRh)-的基團/原子組成的鍵，其中Rh選自氫或C1^-燒基，R”選自 Ci-6~焼基。6.如權利要求1所述的寡聚物，其中P為選自氫、羥基、Cp6-烷基、CV6-烷氧基、或芳氧基的5’ -端基。7.如權利要求1所述的寡聚物，其中P*為選自氫、羥基或芳氧基的3’-端基。8.如權利要求1所述的寡聚物，其中B為核堿基，選自腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞啼唆、5-甲基胞嘧啶或尿嘧啶。9.如權利要求1所述的寡聚物，具有下式IIIG- [Nu-L] n(0)-{[ (L-核糖-LNA) -L] m(q)- [Nu_L] n(q)} q-G* 111 其中q為1至50 ;各 n(0)，· · ·，n(q)分別...
【專利技術屬性】
技術研發人員：葉斯佩爾·文格爾，
申請(專利權)人：桑塔里斯制藥公司，
類型：發明
國別省市：DK
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