【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于種子質量檢驗
，涉及雜交棉花種子純度檢驗的方法，特別是一種利用SSR分子標記對抗蟲雜交棉國豐棉198棉花種子進行純度檢驗的方法。
技術介紹
國豐棉198是合肥豐樂種業股份有限公司培育的高產優質雜交棉花新品種，具有我國自主知識產權的抗蟲基因專利。該品種在雜交制種過程當中，需要通過母本人工去雄，授以父本花粉來完成雜交過程，母本去雄不徹底或漏去雄，將會極大地影響制種純度。 傳統的雜交種純度檢測方法為種植鑒定，依賴于品種表型差異，通過成株外觀形狀比較鑒定，鑒定時間長、費用高、難度較大和準確性差。SSR(Simple Sequence R印eat)是在PCR(Polymerase Chain Reaction)基礎上發展起來的一種新的分子標記技術，具有高度多態性、共顯性、保守性、且僅需少量的DNA、操作簡便、重復性好、穩定可靠等優點，在動物、植物、微生物等研究領域中得到了廣泛應用， 并已開始應用于棉花的遺傳多樣性分析及雜交種純度的鑒定研究。朱美霞等利用15對 SSR引物對8621號、中棉19等5個棉花品種進行單株和引物組合法檢測的結果說明SSR 引物組合法在檢測品種純度上具有高效性和可靠性。秦利等用2對SSR引物對當前新疆主栽品種進行的指紋圖譜構建和雜交種純度鑒定的結果表明SSR標記可將3個雜交種與它們的親本加以區分。本研究利用國豐棉198雜交種與雙親在一些SSR位點上的差異， 尋找合適的引物擴增出雜交種與雙親差異明顯的穩定條帶，用于國豐棉198的室內純度檢測。為國豐棉198純度鑒定提供一個準確、穩定、快捷、實用的檢測方法。
技術實現思路
本專利技...
【技術保護點】
１．一種國豐棉１９８棉花種子純度檢驗的方法，其特征在于其具體步驟是：ＤＮＡ提取：將種子置于營養缽中發芽出苗至幼苗有２－３片真葉時，取４ｃｍ左右的葉片于研缽中，加入１．５×ＣＴＡＢ提取緩沖液將其研碎，轉入離心管６５℃水浴半小時；加入與提取緩沖液等體積的氯仿／異戊醇混合液，手搖１０分鐘，１００００ｒｐｍ離心１０分鐘；取其上清，加入冰凍９５％乙醇，－２０℃冰柜內放置３０分鐘沉淀ＤＮＡ；１００００ｒｐｍ離心１０分鐘，棄上清，加７５％乙醇，靜置４分鐘去鹽；棄乙醇，離心管倒置于吸水紙上風干；加２００ｕｌ滅菌雙蒸水溶解ＤＮＡ待用；２）ＰＣＲ反應：在ＰＣＲ管中分別加入ＤＮＡ模板、１０×ＰＣＲ含氯化鎂緩沖液、三磷酸脫氧核糖核苷、引物Ｐ１和Ｐ２、Ｔａｑ酶及雙蒸水；先９４℃預變性４′；再９４℃變性３０″，５５℃退火３０″，７２℃延伸１′，３２個循環；７２℃延伸７′，９５℃水浴４′變性后置冰上；３）注膠電泳檢測：將分離膠緩慢注入兩玻璃板之間，靜置凝固半小時以上；將玻璃板裝上電泳槽，２０００Ｖ，９０Ｗ預熱半小時；插梳子，點樣；２０００Ｖ，８５Ｗ電泳約３小時；下膠后，將膠板放在１０％冰醋酸的盒子里，輕搖２０分鐘至...
【技術特征摘要】
1.一種國豐棉198棉花種子純度檢驗的方法，其特征在于其具體步驟是DNA提取將種子置于營養缽中發芽出苗至幼苗有2-3片真葉時，取4cm左右的葉片于研缽中，加入1. 5XCTAB提取緩沖液將其研碎，轉入離心管65°C水浴半小時；加入與提取緩沖液等體積的氯仿/異戊醇混合液，手搖10分鐘，IOOOOrpm離心10分鐘；取其上清，加入冰凍95%乙醇，-20°C冰柜內放置30分鐘沉淀DNA ； IOOOOrpm離心10分鐘，棄上清，加75%乙醇，靜置4 分鐘去鹽；棄乙醇，離心管倒置于吸水紙上風干；加200ul滅菌雙蒸水溶解DNA待用；2)PCR反應在PCR管中分別加入DNA模板、10XPCR含氯化鎂緩沖液、三磷酸脫氧核糖核苷、引物 Pl和P2、Taq酶及雙蒸水；先94°C預變性4'；再94°C變性30〃，55°C退火30〃，72°C延伸 1'，32個循環；72°C延伸7'，95°C水浴4'變性后置冰上；3)注膠電泳檢測將分離膠緩慢注入兩玻璃板之間，靜置凝固半小時以上；將玻璃板裝上電泳槽，2000V， 90W預熱半小時；插梳子，點樣；2000V，85W電泳約3小時；下膠后，將膠板放在10%冰醋酸的盒子里，輕搖20分鐘至膠全部脫色；用清水漂洗兩次，每次5分鐘；放入染色盆染色液中， 輕輕搖動染色15-20分鐘；取出膠板，用清水...
【專利技術屬性】
技術研發人員：程國旺，彭家成，陳先鋒，馬惠應，王兆賢，周桂林，吳曉亮，
申請(專利權)人：合肥豐樂種業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：34
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