【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及。
技術介紹
肝素寡糖與普通肝素相比，同等劑量下，抗凝作用小于肝素，抗血栓作用卻明顯強于肝素，其分子量小，生物利用度高，血漿半衰期長，不與肝素結合蛋白結合，有更穩定的量效關系，較少與血小板結合，不易引起血小板減少。所以，肝素寡糖既能有效防止血栓形成， 又能減少出血等不良反應，是一種安全有效的抗血栓藥物，可作肝素替代物。不同聚合度的肝素寡糖能和不同蛋白因子作用，從而呈現不同的生物學作用。所以，肝素寡糖的生產具有重要意義。現有技術有化學裂解法和酶解法，化學裂解法肝素反應劇烈，工藝復雜，肝素活性功能不同程度被破壞。酶解法反應條件溫和，產率高，對環境無毒性，操作簡便，易控制， 成為當前生物學研究的熱點，國內外作了一些相關研究，但目前尚未出現一種成本比較低的酶解法生產工藝。
技術實現思路
本專利技術要解決的問題在于提供一種肝素酶的制備方法。，包括如下步驟1)肝素的酶法降解取肝素20mg，溶解于Iml反應液Digestion Buffer (25mM醋酸銨，25yMCaC12，0. 25μ g/ml BSA, ρΗ7· 4)中，加入肝素酶 I、II、III 各 500uL，37°C恒溫振蕩反應72小時，其中每12小時補充一次肝素酶，反應結束后，100°C水浴加熱15min，并在 12000rpm下高速離心lOmin，取上清備用。2)肝素寡糖的分級純化將步驟1得到的寡糖片段經過Bio-gel P2柱進行分級純化，收集凍干，即成成品。經過降解的肝素寡糖片段，在鏈端具有不飽和雙鍵，因此在232nm可測得明顯的紫外吸收值。收集分級后的流出組分，通過測定紫外吸收，...
【技術保護點】
１．一種肝素寡糖的制備方法，包括如下步驟：１）肝素的酶法降解：取肝素２０ｍｇ，溶解于１ｍｌ反應液Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ中，加入肝素酶Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ各５００ｕＬ，３７℃恒溫振蕩反應７２小時，其中每１２小時補充一次肝素酶，反應結束后，１００℃水浴加熱１５ｍｉｎ，并在１２０００ｒｐｍ下高速離心１０ｍｉｎ，取上清備用；２）肝素寡糖的分級純化：將步驟１得到的寡糖片段經過Ｂｉｏ－ｇｅｌ Ｐ２柱進行分級純化，收集凍干，即得成品。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王香，李海生，
申請(專利權)人：廣元市海鵬生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：51
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