膠乳致敏的方法及試劑技術

本發明專利技術涉及膠乳致敏的方法及試劑。具體而言，本發明專利技術的膠乳致敏的方法為先通過化學鍵將膠乳與無關蛋白結合，再使用戊二醛將抗原或抗體交聯在無關蛋白上，從而使膠乳致敏。本發明專利技術提供了使用本方法制備的抗鏈球菌溶血素O膠乳增強免疫比濁試劑。使用本發明專利技術的方法可以節省試劑的制備時間，同時提高試劑的靈敏度。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及膠乳致敏的方法及試劑。更特別地，本專利技術涉及先通過化學鍵將膠乳與無關蛋白結合，再使用戊二醛將抗原或抗體交聯在無關蛋白上，從而使膠乳致敏的方法。 本專利技術還涉及利用該方法獲得致敏的膠乳及使用了該致敏的膠乳的膠乳增強免疫比濁試劑。
技術介紹
1956年Singer和plotz開始使用直徑為微米級的粒子，通過附著在膠乳上的抗原或抗體對血清中的抗體或抗原進行定性的玻片凝集法檢測。在此基礎上發展起來的膠乳增強免疫比濁法提高了普通免疫比濁法的靈敏度，而且操作簡單，可以使用普通生化分析儀測定，是一種新的臨床診斷方法。在膠乳增強免疫比濁試劑中，膠乳的致敏，也就是將抗原或抗體與膠乳相結合，這一步是制備試劑中最重要的步驟。膠乳的致敏，通常有物理吸附法和化學交聯法。物理吸附法是靠蛋白質分子結構上的疏水基團與膠乳表面的疏水基團間的相互作用，將抗原或抗體吸附到膠乳表面。化學交聯法是通過抗原或抗體與膠乳表面的化學基團反應，將抗原或抗體交聯在膠乳上。化學交聯法由于特異性好、易保存、分散性良好等特點，現已廣泛應用于體外診斷試劑中。但是化學交聯法會由于化學反應造成抗原或抗體在交聯過程中活性喪失，影響試劑的靈敏度。化學交聯法通常采取的步驟是，先將抗原或抗體通過化學鍵直接交聯在膠乳上使其致敏，再加入BSA、聚乙二醇等蛋白質或多聚體封閉膠乳表面未結合的位點，整個反應一般在兩天及兩天以上，時間較長。而且，由于這個反應的條件較強烈且反應時間較長，抗原或抗體的活性損失較大，導致反應的靈敏度也受到較大的影響。所以，需要一種反應更溫和、更快速的膠乳致敏的方法和試劑。
技術實現思路
因此，本專利技術的技術目的在于尋找一種反應更溫和、更快速的膠乳致敏的方法和試齊LU因此，本專利技術的第一方面涉及一種膠乳致敏的方法，其特征在于先通過化學鍵將膠乳與無關蛋白結合，再使用戊二醛將抗原或抗體交聯在無關蛋白上，從而使膠乳致敏，其中所述無關蛋白是指水溶性的且不與所述抗原或抗體發生免疫反應的蛋白，優選地，所述無關蛋白選自BSA或血藍蛋白，優選地，所述膠乳為聚苯乙烯膠乳。優選地，所述化學鍵通過聚苯乙烯膠乳表面的化學基團與無關蛋白的相應化學基團形成，優選地，化學基團選自羧基、磺酸基或羥基。優選地，所述抗原選自天然抗原、基因重組抗原、化學合成抗原或多肽的一種或多種。優選地，所述抗體選自多克隆抗體或單克隆抗體中的一種或多種。優選地，所述聚苯乙烯膠乳的粒徑為50-200nm。優選地，膠乳在反應體系中的濃度無特別限制，優選0. 1 2%重量體積比，更優選0. 5 重量體積比；和/或，無關蛋白在反應體系中的濃度無特別限制，優選0. 05 ang/ml，更優選0. 1 0. 3mg/ml ；和/或，反應條件優選在4 40°C，更優選在25 37°C 反應0. 5 Ihr ；和/或，反應在有緩沖作用的緩沖液中進行的，所述緩沖液選自MES緩沖液、Tris緩沖液、磷酸緩沖液，優選MES緩沖液，pH5. 5-7 ；和/或，結合有無關蛋白的膠乳濃度無特別限制，優選0. 1 2%重量體積比，更優選0.2 重量體積比；和/或，抗原或抗體在反應體系中的濃度無特別限制，優選0. 05 ang/ml，更優選0. 1 0. 2mg/ml ；和/ 或，戊二醛在反應體系中濃度優選0. 001% 0. 02%重量體積比，更優選0. 001 0. 008% 重量體積比；和/或，反應條件優選在4 40°C，更優選在25 37°C反應0. 5 !3hr。本專利技術的第二方面涉及一種膠乳，其中，所述膠乳使用如上所述的膠乳致敏的方法致敏，優選地，所述膠乳為羧基修飾的聚苯乙烯膠乳先利用羧基結合BSA，然后利用戊二醛將基因重組鏈球菌溶血素0抗原結合在BSA上獲得的膠乳。本專利技術的第三方面涉及一種膠乳增強免疫比濁試劑，其中，所述膠乳使用根據上述膠乳致敏的方法致敏。優選地，所述膠乳增強免疫比濁試劑為抗鏈球菌溶血素0膠乳增強免疫比濁試劑，其包含試劑R1、試劑R2，試劑Rl為含有鹽離子的緩沖液，試劑R2為交聯了鏈球菌溶血素0抗原的致敏膠乳溶液，優選地，所述鏈球菌溶血素0抗原為基因重組鏈球菌溶血素0抗原，優選地，所述膠乳為羧基修飾的聚苯乙烯膠乳。優選地，所述鹽離子為一價金屬離子和二價金屬離子中的一種或幾種，優選地，所述鹽離子選自鈉離子和/或鎂離子，更優選地，所述鹽離子為Na離子；優選地，所述鹽離子在反應體系中的濃度優選10 300mM，更優選100 200mM ；和/或，膠乳在反應體系中的濃度在0. 08 0. 2%重量體積比。優選地，所述試劑R1、R2的緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液、HEPES緩沖液或磷酸緩沖液，優選地，所述試劑R1、R2的緩沖液是甘氨酸緩沖液，優選地，所述試劑R1、R2 的緩沖液的pH在6. 5 9之間，更優選地，所述試劑Rl、R2的緩沖液的pH在8 8. 6之間；和/或，所述試劑Rl、R2含有表面活性劑、防腐劑、多聚體，優選地，所述表面活性劑為非離子表面活性劑，更優選地，所述非離子表面活性劑選自TWEEN系列、SPAN系列、TRITON 系列，優選地，所述防腐劑選自山梨酸鉀、苯甲酸鈉、疊氮鈉、亞硝酸鈉、PC300中的一種或幾種，優選地，所述多聚體選自PEG系列、PVP系列。優選地，所述抗鏈球菌溶血素0膠乳增強免疫比濁試劑的成分如下試劑Rl 甘氨酸緩沖液濃度為 0. 01-0. 5M ρΗ8· 4，優選 0. 05-0. 2ΜρΗ8· 4，NaCl 濃度為 10-600mM，優選 100-500mM，更優選 200-400mM，Tween 20 濃度為 0.01% -1% 重量體積比，優選0. 02-0. 5 %重量體積比，更優選0. 05 % -0. 2 %重量體積比，PEG6000濃度為 0. 01-5%重量體積比，優選0. 1-3. 5%重量體積比，更優選0. 5-3%重量體積比，NaR濃度為 0.01% -1%重量體積比，優選0. 02% -0.5%重量體積比，更優選0. 05% -0.2%重量體積比；試劑R2 甘氨酸緩沖液濃度為0. 01-0. 5M ρΗ8· 4，優選0. 05-0. 2ΜρΗ8· 4，致敏膠乳濃度為0.01% -1%重量體積比，優選0.2% -0.5%重量體積比，更優選0. -0.3% 重量體積比，BSA濃度為0.01% -2%重量體積比，優選0. -1%重量體積比，更優選0. 2% -0.6%重量體積比，NaR濃度為0.01% -I%重量體積比，優選0. 02% -0. 5%重量體積比，更優選0. 05% -0.2%重量體積比。其中所述致敏膠乳為羧基修飾的聚苯乙烯膠乳先利用羧基結合BSA，然后利用戊二醛將基因重組鏈球菌溶血素0抗原結合在BSA上獲得。最優選地，所述抗鏈球菌溶血素0膠乳增強免疫比濁試劑的成分如下試劑Rl 甘氨酸緩沖液0. IM ρΗ8· 4，NaCl300mM,Tween200.1% 重量體積比，NaN30.1%重量體積比，試劑R2 甘氨酸緩沖液0. IM ρΗ8· 4，致敏膠乳 0. 17%重量體積比，BSA0.5%重量體積比，NaN30.1%重量體積比，其中所述致敏膠乳為羧基修飾的聚苯乙烯膠乳先利用羧基結合BSA，然后利用戊二醛將基因重組鏈球菌溶血素0本文檔來自技高網...

【技術保護點】
１．一種膠乳致敏的方法，其特征在于先通過化學鍵將膠乳與無關蛋白結合，再使用戊二醛將抗原或抗體交聯在無關蛋白上，從而使膠乳致敏，其中所述無關蛋白是指水溶性的且不與所述抗原或抗體發生免疫反應的蛋白，優選地，所述無關蛋白選自ＢＳＡ或血藍蛋白，優選地，所述膠乳為聚苯乙烯膠乳。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：胥敏，劉希，高愛民，
申請(專利權)人：北京九強生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：11