本發明專利技術公開了一種三聚氰胺快速現場檢測試劑及檢測方法，向20-25％的三氯乙酸水溶液中加入AlCl3、ZnCl2或MgCl2得提取劑，使其離子濃度為10-30mmol/L；配制CuCl2的飽和水溶液作為指示劑；按體積份數將4-5份液態試樣與1份提取劑充分混合得提取液，去除提取液中的沉淀得待檢測液；按體積份數將1份指示劑加入20份待檢測液中混勻，并觀察沉淀生成情況。與國標上已有的檢測方法相比，本發明專利技術的檢測原理不同于色譜分析檢測方便快捷，檢測時間縮短到10-20分鐘，本檢測方法下限不大于30mg/kg，滿足一般檢測要求，可以作為國標檢測的輔助手段，檢測對象的范圍廣。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及食品及飼料安全監測中三聚氰胺的快速定性檢測技術，特別涉及一種 乳粉、蛋白粉、動物飼料和液體乳制品中。
技術介紹
三聚氰胺(Mel)是一種用途廣泛的具有氮雜環結構的有機化工原料，因其結構中 不僅有氮雜環且含有多個氨基氮，使其含氮量高達66%以上，因此Mel被一些不法商販添 加到商品中以虛高商品蛋白含量。2007年美國發生的貓狗寵物非正常死亡事件以及2008 年國內的奶粉事件都由此造成。目前，檢測Mel的主要方法是高壓液相色譜法、液質聯用和氣質聯用等，不僅對儀 器、操作人員素質及實驗室要求都很高，檢測費時且運行費用高，也難以滿足現代食品安全 現場監測對檢測方法簡單、快速、便攜的要求。自從2008年國家征集Mel快速監測方法以來，有數十個Mel檢測專利技術問世， 其中大部分是采用免疫學原理而研發的ELISA試劑盒，檢測特異性強，敏感度相對高，但試 劑盒制備中涉及Mel完全抗原的制備、動物免疫、Mel與酶的交聯等復雜程序，試劑成本價 格高。
技術實現思路
本專利技術的第一個目的在于提供一種對奶粉、蛋白粉、飼料以及酸奶、鮮乳等樣品中 Mel進行簡單、快速的定性檢測、價格低廉、適宜于非專業人員操作的便攜式三聚氰胺快速 現場檢測試劑。本專利技術的第二個目的在于提供一種采用該檢測試劑進行三聚氰胺快速現場檢測 的方法。為達到上述目的，本專利技術三聚氰胺快速現場檢測試劑包括三聚氰胺提取劑和三聚 氰胺指示劑，所述提取劑由20-25g/100mL的三氯乙酸水溶液與A1C13、ZnCl2或MgCl2混合 而成，三聚氰胺提取劑中Al、Si或Mg的離子濃度為10-30mmol/L，所述三聚氰胺指示劑為 CuCl2的飽和水溶液。本專利技術的檢測方法包括如下步驟1)提取劑制備向20-25g/100mL的三氯乙酸水溶液中加入A1C13、ZnCl2或MgCl2 得提取劑，提取劑中Al、Si或Mg的離子濃度為10-30mmol/L ；2)指示劑制備配制CuCl2的飽和水溶液作為指示劑；3)提取將液態試樣與提取劑按3-4 1的體積比充分混合得提取液，去除提取 液中的沉淀得待檢測液；4)檢測和結果判讀將指示劑與待檢測液按1 20的體積比混勻，若混勻后的溶 液為天藍色渾濁液，則說明試樣中含有三聚氰胺，濁度越高則含量越大，含量低于30mg/kg 的待檢測液則為清澈透亮的天藍色溶液。所述液態試樣包括液態樣品以及35_50g/100mL的固態樣品水溶液。所述提取液中沉淀的去除方法為將提取液超聲處理2分鐘，然后于4000g離心力 下離心3-5分鐘；或者用經過4-5倍稀釋的提取劑潤濕濾紙，然后用潤濕的濾紙過濾提取液。本專利技術的有益效果體現在1)與國標檢測方法相比，本專利技術的檢測原理不同于色普分析，對設備要求低耗資 少，而且大大提高檢測效率，節省勞動量。國標法(高壓液相色譜法等)除過需要昂貴的設 備和專業的操作人員外，過程步驟復雜，一個樣品檢測需數小時才能完成；本檢測方法無需 設備，檢測試劑廉價、簡單，而且檢測時間縮短到10-20分鐘，滿足科技部對快速檢測方法 的時間(30分鐘)要求。2)本檢測方法可組裝成試劑盒，檢測方便快捷。由于檢測試劑簡單、檢測組件體積 小巧，依此組裝的試劑盒小巧便攜；檢測方法簡單；沉淀反應快速，適合于現場快速報告； 結果鮮明便于目測辨別，使用極其方便簡單，大大簡化了檢測程序。滿足當前食品安全檢測 對檢測方法“簡單、快速、便攜”的要求，適合于現場篩查和監督。3)本檢測方法靈敏度不高于:3mg/100mL或30mg/kg。，滿足一般檢測要求，可以作 為國標檢測的輔助手段。凡使用此法檢測結果為陽性者，均可肯定三聚氰胺摻假，無需再用 高精儀器檢測。這樣便可大大減輕工作量，減少耗資并縮短檢測時間，提高檢測效率。4)檢測對象的范圍廣，市場范圍寬，可以提供給食品安全監管相關部門用于劣質 產品篩查。附圖說明圖1為不同金屬水溶液與三聚氰胺的定性反應；圖2為三聚氰胺分子式；圖3為Cu(II)與三聚氰胺分子間的配合體平面結構；圖4為不同含量MEL摻假鮮乳的檢測結果；圖5為不同含量MEL摻假玉米面的檢測結果；圖6為MEL摻假酸牛乳的檢測結果；圖7為不同含量MEL摻假蛋白粉的檢測結果。具體實施例方式下面結合附圖和實施例對本專利技術作進一步說明。一、三聚氰胺快速現場檢測試劑包括三聚氰胺提取劑和三聚氰胺指示劑三聚氰胺提取劑的制備向20_25g/100mL的三氯乙酸水溶液中加入A1C13、ZnCl2 或MgCl2得三聚氰胺提取劑，三聚氰胺提取劑中Al、&!或Mg的離子濃度為10-30mmol/L ；本 專利技術采用低濃度金屬離子破壞蛋白膠體水化膜協助三氯乙酸徹底沉淀蛋白質，提取劑是能 沉淀蛋白質但可溶解三聚氰胺的溶液。乳品蛋白質完全沉淀需要采用終濃度為12g/100mL 的三氯乙酸(IS08968)；但實驗證明，此濃度不適宜于三聚氰胺檢測，因為10g/100mL以上 濃度的三氯乙酸將會導致三氯乙酸共沉，因而可能導致假陰性結果。本專利技術在多次實驗基 礎上，采用低濃度金屬離子的聯合作用，降低了蛋白質完全沉淀對三氯乙酸的濃度要求，協助三氯乙酸在較低濃度下快速徹底沉淀蛋白，此方案未見報道。經實驗證實該提取劑對蛋 白質的沉淀效果十分理想，也不會使三聚氰胺產生沉淀。三聚氰胺指示劑的制備三聚氰胺指示劑為氯化銅的飽和溶液，參考質量體積濃 度為75g/100mL。指示劑是可以與三聚氰胺發生特異性沉淀反應、表現出肉眼可見渾濁現象 的溶液。二、具體的檢測操作方法1)提取劑制備向20-25g/100mL的三氯乙酸水溶液中加入A1C13、ZnCl2或MgCl2 得提取劑，提取劑中Al、Si或Mg的離子濃度為10-30mmol/L ；2)指示劑制備配制CuCl2的飽和水溶液作為指示劑；3)樣品中Mel的提取此步驟目的是將樣品中的Mel抽提至提取劑中，并使樣品 中的蛋白質和對后續檢測有干擾的物質被沉淀除去。操作過程為，如果待檢樣為粉末狀固 體(蛋白粉、奶粉、飼料等)，首先要將其配制成35-50g/100mL的液態試樣待用。若為液體 樣品(鮮乳，發酵乳等)則直接作為液態試樣；將液態試樣與提取劑按3-4 1的大體積比 充分混合得提取液，將提取液超聲處理2分鐘，然后于4000g離心力下離心3-5分鐘，去除 沉淀并取上清液做為待檢測液，或者用經過4-5倍稀釋的提取劑潤濕濾紙，然后用潤濕的 濾紙過濾提取液去除沉淀，取濾液作為待檢測液。4)檢測與結果判讀將指示劑與待檢測液按1 20的體積比混勻，若混勻后的溶 液為藍色渾濁液，則說明試樣為含Mel且濃度超過30mg/kg的問題乳，濁度越高，含量越大； 含量低于30mg/kg的待檢測液則為清澈透亮的天藍色溶液。所使用技術原理及產品工作原理本檢測過程實質上是順序偶聯的2個選擇性沉淀反應。首先采用提取劑從樣品中 提取溶解Mel，同時沉淀去除蛋白質等懸浮態大分子雜質，方便下步反應現象觀察；第二步 則是用Mel特異的沉淀反應指示提取液中究竟有沒有Mel存在。以下分別介紹待檢樣品中 雜質和Mel的性質及其檢測原理。1、待檢樣品的理化性質和其中蛋白質的沉淀原理人為添加Mel的目的都是為了虛高產品的蛋白含量以欺騙消費者，因此被加入 Mel的產品常常是對蛋白含量有要求的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．三聚氰胺快速現場檢測試劑，其特征在于：包括三聚氰胺提取劑和三聚氰胺指示劑，所述提取劑由２０－２５ｇ／１００ｍＬ的三氯乙酸水溶液與ＡｌＣｌ３、ＺｎＣｌ２或ＭｇＣｌ２混合而成，三聚氰胺提取劑中Ａｌ、Ｚｎ或Ｍｇ的離子濃度為１０－３０ｍｍｏｌ／Ｌ，所述三聚氰胺指示劑為ＣｕＣｌ２的飽和水溶液。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊水云，張孝宗，段安虎，房磊，
申請(專利權)人：西安交通大學，
類型：發明
國別省市：87
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