本發明專利技術涉及醫藥技術領域。水母蜇傷是全球范圍內最常見的海洋生物致傷，水母毒素中的心血管毒性成分引起的急性循環衰竭被認為是水母蜇傷致死的主要原因。本發明專利技術的目的在于提供不同類型鈣通道阻斷劑在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。不同類型鈣通道阻斷劑，包括L型鈣通道阻斷劑、T型鈣通道阻斷劑、非特異性鈣通道阻斷等。本發明專利技術在培養的乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物三個層面，發現不同類型鈣通道阻斷劑能夠有效地拮抗水母毒素心臟毒性，可以開發為水母蜇傷的預防或治療藥物。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥
，具體是指鈣通道阻斷劑能夠拮抗水母毒素心臟毒性， 進一步地，不同類型的鈣通道阻斷劑在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。
技術介紹
水母蜇傷是全球范圍內最常見的海洋生物致傷，水母蜇傷后可以產生局部劇痛、 炎癥與壞死等癥狀，嚴重者出現全身肌肉痙攣、呼吸和循環抑制甚至休克、死亡。水母毒素是一類結構新穎、毒性極強的肽類毒素，具有心血管、溶血、神經、呼吸等多種生物活性，其中心血管毒性成分引起的急性循環衰竭被認為是水母蜇傷致死的主要原因。盡管存在溶血、肌肉、神經等其他多種毒性成分，但心血管毒性成分是水母毒素中引起死亡的主要致病因素(Xiao L, Liu GS, Wang QQ, et al.，The lethality of tentacle-only extract from jellyfish Cyanea capillata is primarily attributed to cardiotoxicity in anaesthetized SD rats. Toxicon. 2010,55(4) :838-845)。因此，要深入研究水母蜇傷致死的防治方法，必須首先研究水母毒素中心血管毒性成分的作用機理及其拮抗藥物的干預效果，以利于開發水母蜇傷的預防或治療藥物。研究表明，心血管毒性成分的作用可能與其引起心肌細胞鈣超載有關，心肌細胞膜上的鈣通道過度激活是心血管毒性成分引起鈣超載的重要原因。因而阻斷鈣離子通道可能起到拮抗水母毒素心臟毒性的作用。鈣通道阻滯劑有多種類型，根據其對鈣通道的選擇性可分為非選擇性鈣通道阻斷劑(如氟桂利嗪等)和選擇性鈣通道阻斷劑；選擇性鈣通道阻斷劑又可分為多種亞型，以作用于L型鈣通道和T型鈣通道(如苯妥英等)的阻斷劑最為常用。L型鈣通道是成熟心肌細胞膜上最重要的鈣通道，其阻斷劑在臨床上廣泛應用于心絞痛、高血壓、心律失常以及周圍血管痙攣性疾病等，其作用機理與心肌或血管平滑肌細胞膜除極時抑制鈣離子內流有關，可以使心臟產生負性肌力、負性頻率以及負性傳導作用，使血管平滑肌松弛，周圍血管阻力下降，血壓降低等。根據L型鈣通道阻斷劑的化學結構特點，又可分為二氫吡啶類(如硝苯地平、尼莫地平、氨氯地平等)、地爾硫卓類(地爾硫卓)、苯烷胺類(維拉帕米)以及粉防己堿等類型。至今未見鈣通道阻斷劑應用于制備預防或治療水母蜇傷藥物中的報道。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供鈣通道阻斷劑的新的適應癥，具體是指不同類型鈣通道阻斷劑在制備預防或治療水母蜇傷藥物的應用。本專利技術人前期研究從整體動物心功能、離體心臟以及心肌細胞三個層面闡述了水母毒素的心臟及心肌細胞毒性，證明水母毒素具有直接的心臟毒性，心肌收縮力下降引起的急性全心衰竭是毒素導致大鼠死亡的主要原因(Xiao L，Liu GS, Wang QQ, et al.，The lethality of tentacle-only extract from jellyfish Cyanea capillata is primarilyattributed to cardiotoxicity in anaesthetized SD rats. Toxicon. 2010,55 (4) 838-84 。進一步從整體動物水平發現TOE可以導致心臟組織鈣含量增高，而激光掃描共聚焦顯微技術發現水母毒素可以導致細胞外液含鈣與無鈣的心肌細胞鈣超載，且細胞外含鈣的心肌細胞鈣超載發生的速度快，幅度大，毒性強，提示鈣超載可能在水母毒素心肌細胞毒性中發揮重要的作用，且細胞外鈣離子影響非常大。本專利技術人設想，鑒于細胞外鈣離子內流需要通過心肌細胞膜上的鈣通道(主要為 L型鈣通道)，因此采用不同類型的鈣通道阻斷劑，通過抑制心肌細胞膜上L型鈣通道的開放頻率，降低心肌細胞膜外的鈣離子內流，可以有效地拮抗水母毒素心血管毒性成分引起的心肌細胞鈣超載，從而拮抗水母毒素引起的心臟毒性作用。本專利技術提供了不同類型鈣通道阻斷劑在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。本專利技術還提供了不同類型鈣通道阻斷劑在制備水母毒素心臟毒性拮抗藥物中的應用。不同類型鈣通道阻斷劑，是指L型鈣通道阻斷劑，具體是指地爾硫卓類鈣通道阻斷劑地爾硫卓、粉防己堿類鈣通道阻斷劑粉防己堿、二氫吡啶類鈣通道阻斷劑硝苯地平、尼莫地平；不同類型鈣通道阻斷劑，是指T型鈣通道阻斷劑苯妥英；不同類型鈣通道阻斷劑，是指非特異性鈣通道阻斷劑氟桂利嗪；不同類型鈣通道阻斷劑，還包括非特異性陽離子通道阻斷劑氯化鑭。本專利技術的具體技術方案如下1.制備水母粗毒提取液1)采樣采集鮮活水母，迅速剪下其觸手，立即將觸手干冰冷凍，運回后置于_70°C超低溫冰箱凍存備用。2)制備水母粗毒提取液將凍存觸手用自配海水于4°C自溶4天，磁力攪拌器攪拌，收集觸手自溶液體，10000 X g離心15min，上清液即水母粗毒提取液。2.不同種類鈣通道阻斷劑拮抗水母毒素心臟毒性實驗(以地爾硫卓為代表)1)在心肌細胞水平，鈣通道阻斷劑地爾硫卓拮抗水母毒素心臟毒性體外培養的乳鼠心肌細胞預先給予不同濃度的地爾硫卓(0、2、5、10、20μπιΟ1/υ作用30min后，給予 40μ g/ml上述制備的水母粗毒提取液作用12h，采用CCK-8法檢測細胞活力。發現給予地爾硫卓(5、10、20ymOl/L)的心肌細胞存活率顯著高于未給予地爾硫卓或僅給予低濃度地爾硫卓Qymol/L)的心肌細胞，表明在乳鼠心肌細胞水平，地爾硫卓可以拮抗水母毒素心臟毒性。2)在離體心臟水平，鈣通道阻斷劑地爾硫卓拮抗水母毒素心臟毒性采用含有 1 μ mol/L地爾硫卓KH液灌注Langendorff離體心臟模型，穩定30min后側管給予0. 18mg 上述提取的水母粗毒提取液，觀察30min，發現給予1 μ mol/L地爾硫卓灌注的離體心臟心功能各項指標(心率、冠脈流量、左心室發展壓、左心室內壓最大上升/下降速率以及左心室舒張末壓)都要顯著優于未給地爾硫卓的對照組，表明在離體心臟水平，地爾硫卓可以拮抗水母毒素心臟毒性。3)在整體動物水平，鈣通道阻斷劑地爾硫卓拮抗水母毒素心臟毒性采用麻醉 Sprague-Dawley (SD)大鼠，預先通過頸外靜脈注射0. 5mg/kg地爾硫卓(30min注射完)，然后靜脈給予lmg/kg上述提取的水母粗毒提取液，監測大鼠動脈血壓變化。發現給予0. 5mg/ kg地爾硫卓的大鼠動脈血壓要明顯高于未給予地爾硫卓的對照組，表明在整體動物水平， 地爾硫卓可以拮抗水母毒素心臟毒性。本專利技術在培養的乳鼠心肌細胞、離體心臟以及整體動物三個層面，分別預先給予一定量的不同種類的鈣通道阻斷劑，然后再給予水母毒素，觀察鈣通道阻斷劑拮抗水母毒素心臟毒性的效果。其中乳鼠心肌細胞水平包括地爾硫卓類鈣通道阻斷劑地爾硫卓(2、 5、10、20μΜ)、苯烷胺類鈣通道阻斷劑維拉帕米Ο、5、10、20μΜ)、粉防己堿類鈣通道阻斷劑粉防己堿(0.5、1、2、5μΜ)、二氫吡啶類鈣通道阻斷劑硝苯地平(5、10、20、50μΜ)、尼莫地平(10、20、50、100μΜ)、氨氯地平(10、20、50、100μΜ)、尼群地平(10、20、50、100 μ Μ)、 T型鈣通道阻斷劑苯妥英(5、10、20、50μΜ)、非特異性鈣通本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．鈣通道阻斷劑在制備預防或治療水母蜇傷藥物中的應用。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：肖良，王蓓蕾，張黎明，王倩倩，聶菲，張琳，陸佳，王濤，溫小娟，厲瑛，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第二軍醫大學，
類型：發明
國別省市：31
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