本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)涉及一種高效液相色譜法對(duì)食品中γ-氨基丁酸含量的測(cè)定方法。即待測(cè)試樣經(jīng)二次水充分渦動(dòng)、超聲提取，離心后上清液過(guò)濾得試樣液；稱(chēng)取γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，二次水溶解并定容后作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，進(jìn)一步用二次水稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；鄰苯二甲醛與2-巰基乙醇作為衍生劑，經(jīng)配備有在線衍生器的高效液相色譜儀對(duì)試樣處理液進(jìn)行衍生，外標(biāo)法定量檢測(cè)。采用本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的方法檢測(cè)食品中γ-氨基丁酸的含量，快速有效，線性范圍為0.5-1000mg/L，回收率達(dá)到88.2％以上，相對(duì)平均偏差(RSD)小于5％。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的方法為食品中γ-氨基丁酸含量的檢測(cè)，提供了一種可靠的便于實(shí)施的方法，能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)涉及一種高效液相色譜法對(duì)食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法，特別是涉及一種通過(guò)配備在線衍生器的高效液相色譜儀對(duì)食品中Y-氨基丁酸的含量進(jìn)行檢測(cè)的方法。
技術(shù)介紹
Y-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)也稱(chēng)氨酪酸，哌啶酸，是一種非蛋白質(zhì)氨基酸，廣泛分布于動(dòng)植物體內(nèi)。植物如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有GABA。GABA是目前醫(yī)學(xué)上研究較為深入的一種重要抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，它參與多種代謝活動(dòng)，具有很高的生理活性。2009年我國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)Y-氨基丁酸為新資源食品，但是目前還沒(méi)有制定食品中Y-氨基丁酸含量的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。因此建立一種快速、準(zhǔn)確、方便和經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法，有利于監(jiān)控Y-氨基丁酸生產(chǎn)廠家產(chǎn)品的添加使用量，從而保障食品安全。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
目前國(guó)家并沒(méi)有相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)GABA進(jìn)行測(cè)定，而現(xiàn)有的方法主要有紙層析柱法、離子色譜法及毛細(xì)管電泳法，這些方法存在檢出限高，線性范圍窄，儀器不普及等缺點(diǎn)，因此， 通過(guò)摸索緩沖液最佳濃度，衍生溶液的組成及濃度，在線衍生方法和最佳色譜條件而建立一種食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法非常有必要。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專(zhuān)利技術(shù)采取以下設(shè)計(jì)方案本專(zhuān)利技術(shù)的一種食品中Y -氨基丁酸含量的測(cè)定方法包括如下步驟配制0. 4mol/L硼酸鹽緩沖溶液(pH = 10. 2)稱(chēng)取硼砂3. 43g和硼酸0. 25g，加 80mL水溶解，用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH = 10. 20，定容100mL。配制衍生溶液稱(chēng)取0. Ig鄰苯二甲醛(ΟΡΑ)，加入30 μ L 2_巰基乙醇，加入甲醇 4. OmL，充分溶解，用硼酸鹽緩沖溶液定容至5mL。稱(chēng)取充分混勻的待測(cè)試樣2. 0000士0. Ig (精確至0. OOOlg)，加入純凈水，定容至 IOmL,充分渦旋混勻后超聲提取2min，3000r/min離心5. Omin,經(jīng)0. 45 μ m濾膜過(guò)濾后由高效液相色譜進(jìn)行在線衍生并分析。稱(chēng)取Y-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，用二次水溶解并定容，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用二次水稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；利用高效液相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)；計(jì)算結(jié)果，試樣中Y-氨基丁酸的計(jì)算公式為Γ CX F χ 1000X =-m χ 1000式中X-試樣中Y-氨基丁酸的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；C-經(jīng)查標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得進(jìn)樣液的濃度，單位為(μ g/mL)；V-試樣定容體積，單位為毫升(mL)；m-稱(chēng)樣量，單位為克(g)。優(yōu)選地，所述緩沖液為硼酸鹽緩沖溶液，濃度為0. 4mol/L, pH = 10. 2。優(yōu)選地，所述衍生溶液為OPA與2-巰基乙醇的混合溶液，濃度在20%。優(yōu)選地，所述待測(cè)試樣的衍生方式為在線衍生。所述利用高效液相色譜儀對(duì)試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)的色譜條件為色譜柱Kromasil-100-5C18，4.6X250mm，5ym，或相當(dāng)型號(hào)色譜柱流動(dòng)相流動(dòng)相A+流動(dòng)相B，梯度洗脫流動(dòng)相A 稱(chēng)取8g結(jié)晶乙酸鈉于IL燒杯中，加IL 二次水溶解，再加入220 μ L三乙胺，5%醋酸調(diào)pH = 7. 2，加入5mL四氫呋喃，混合后，過(guò)濾備用。流動(dòng)相B 稱(chēng)取4g結(jié)晶乙酸鈉于IL燒杯中，加200mL水溶解，5 %醋酸調(diào)pH = 7. 2， 加入400mL乙腈和400mL甲醇，混合后，過(guò)濾備用。梯度洗脫程序如下權(quán)利要求1.一種高效液相色譜法對(duì)食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法，其特征在于所述測(cè)定方法包括如下步驟配制0. 4mol/L硼酸鹽緩沖溶液(pH = 10. 2)稱(chēng)取硼砂3. 43g和硼酸0. 25g，加80mL 二次水水溶解，用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH = 10. 2，定容至100mL。配制鄰苯二甲醛衍生溶液稱(chēng)取0. Ig 0ΡΑ，加入30 μ L 2-巰基乙醇，加入甲醇4. OmL, 超聲溶解，用硼酸鹽緩沖溶液定容至5mL。稱(chēng)取充分混勻的待測(cè)試樣2. 0000士0. lg(精確至0. OOOlg)，加入二次水，定容至10mL， 充分渦旋混勻后超聲提取anin，3000r/min離心5. Omin,經(jīng)0. 45 μ m濾膜過(guò)濾后由配備紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀進(jìn)行在線衍生并分析。稱(chēng)取Y -氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，用二次水溶解并定容，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用二次水稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液。利用高效液相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)使用液和試樣處理液進(jìn)行在線衍生處理和檢測(cè)，外標(biāo)法定量；計(jì)算結(jié)果，試樣中Y-氨基丁酸的計(jì)算公式為 χ _ cx Fx 1000 —mχ 1000式中X-試樣中Y-氨基丁酸的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)； C-經(jīng)查標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得進(jìn)樣液的濃度，單位為(yg/mL)； V-試樣定容體積，單位為毫升(mL)； m-稱(chēng)樣量，單位為克(g)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜法對(duì)食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法，其特征在于所述0. 4mol/L硼酸鹽緩沖溶液，在高效液相色譜在線衍生過(guò)程中起到良好的緩沖作用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜法對(duì)食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法，其特征在于所述衍生溶液，包括衍生化試劑鄰苯二甲醛(OPA)和2-巰基乙醇，OPA的濃度在20%左右，能達(dá)到較好的在線衍生效果。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜法對(duì)食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法，其特征在于所述利用高效液相色譜儀對(duì)試樣處理液及標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行在線衍生，在線衍生的程序如下步驟目的吸量(μ L)吸樣速度(μ L/min)1吸緩沖液52002洗針02003吸樣品12004洗針02005.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效液相色譜法對(duì)食品中Y-氨基丁酸含量的測(cè)定方法，其特征在于所述利用高效液相色譜儀對(duì)試樣處理液進(jìn)行檢測(cè)的色譜條件為色譜柱Kromasil-100-5C18 4. 6 X 250mm，5 μ m，或相當(dāng)型號(hào)色譜柱流動(dòng)相流動(dòng)相A+ 流動(dòng)相B，梯度洗脫流動(dòng)相A 稱(chēng)取8g結(jié)晶乙酸鈉于IL燒杯中，加IL水溶解，再加入220 μ L三乙胺，5% 醋酸調(diào)PH = 7. 2，加入5mL四氫呋喃，混合后，過(guò)濾備用。流動(dòng)相B 稱(chēng)取4g結(jié)晶乙酸鈉于IL燒杯中，加200mL水溶解，5%醋酸調(diào)pH = 7. 2，加入400mL乙腈和400mL甲醇，混合后，過(guò)濾備用。梯度洗脫程序如下全文摘要本專(zhuān)利技術(shù)涉及。即待測(cè)試樣經(jīng)二次水充分渦動(dòng)、超聲提取，離心后上清液過(guò)濾得試樣液；稱(chēng)取γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，二次水溶解并定容后作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，進(jìn)一步用二次水稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液；鄰苯二甲醛與2-巰基乙醇作為衍生劑，經(jīng)配備有在線衍生器的高效液相色譜儀對(duì)試樣處理液進(jìn)行衍生，外標(biāo)法定量檢測(cè)。采用本專(zhuān)利技術(shù)的方法檢測(cè)食品中γ-氨基丁酸的含量，快速有效，線性范圍為0.5-1000mg/L，回收率達(dá)到88.2％以上，相對(duì)平均偏差(RSD)小于5％。本專(zhuān)利技術(shù)的方法為食品中γ-氨基丁酸含量的檢測(cè)，提供了一種可靠的便于實(shí)施的方法，能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。文檔編號(hào)G01N30/06GK102230921SQ20111007624公開(kāi)日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月29日專(zhuān)利技術(shù)者宋薇 申請(qǐng)人:寧波譜尼測(cè)試技術(shù)有限公司本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
１．一種高效液相色譜法對(duì)食品中γ－氨基丁酸含量的測(cè)定方法，其特征在于：所述測(cè)定方法包括如下步驟：配制０．４ｍｏｌ／Ｌ硼酸鹽緩沖溶液（ｐＨ＝１０．２）：稱(chēng)取硼砂３．４３ｇ和硼酸０．２５ｇ，加８０ｍＬ二次水水溶解，用５ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ｐＨ＝１０．２，定容至１００ｍＬ。配制鄰苯二甲醛衍生溶液：稱(chēng)取０．１ｇ ＯＰＡ，加入３０μＬ ２－巰基乙醇，加入甲醇４．０ｍＬ，超聲溶解，用硼酸鹽緩沖溶液定容至５ｍＬ。稱(chēng)取充分混勻的待測(cè)試樣２．００００±０．１ｇ（精確至０．０００１ｇ），加入二次水，定容至１０ｍＬ，充分渦旋混勻后超聲提取２ｍｉｎ，３０００ｒ／ｍｉｎ離心５．０ｍｉｎ，經(jīng)０．４５μｍ濾膜過(guò)濾后由配備紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀進(jìn)行在線衍生并分析。稱(chēng)取γ－氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品，用二次水溶解并定容，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，然后進(jìn)一步用二次水稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液。利用高效液相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)使用液和試樣處理液進(jìn)行在線衍生處理和檢測(cè)，外標(biāo)法定量；計(jì)算結(jié)果，試樣中γ－氨基丁酸的計(jì)算公式為：（ｍａｔｈ）??（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）Ｘ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＝（／ｍｏ）?（ｍｆｒａｃ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）ｃ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｉ）Ｖ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１０００（／ｍｎ）?（／ｍｒｏｗ）?（ｍｒｏｗ）?（ｍｉ）ｍ（／ｍｉ）?（ｍｏ）＆ｔｉｍｅｓ；（／ｍｏ）?（ｍｎ）１０００（／ｍｎ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍｆｒａｃ）?（／ｍｒｏｗ）?（／ｍａｔｈ）式中：Ｘ－試樣中γ－氨基丁酸的含量，單位為毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；ｃ－經(jīng)查標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得進(jìn)樣液的濃度，單位為（μｇ／ｍＬ）；Ｖ－試樣定容體積，單位為毫升（ｍＬ）；ｍ－稱(chēng)樣量，單位為克（ｇ）。...
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋薇，
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