本發明專利技術涉及一種棘孢曲霉ZJ(AspergillusaculeatusZJ)菌株及其應用。所說的棘孢曲霉ZJ,保藏編號為CCTCC?No.M2011264。該菌株主要用于轉化槐角的有用成分生產5,7,8,4’-四羥基異黃酮。具體方法是用專一性強的棘孢曲霉ZJ或其產生的酶作用于槐角或其提取液,使其中的槐角苷等糖苷類化合物、染料木素等經過轉化,生成5,7,8,4’-四羥基異黃酮,通過常規方法分離提取(純度可達98%)。本發明專利技術提供了一種專一性強,轉化效率高的棘孢曲霉轉化槐角苷生成5,7,8,4’-四羥基異黃酮的方法,條件溫和,過程綠色,工藝與設備要求簡單,有很好的應用價值。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種制備5，7，8，4’ -四羥基異黃酮的新方法，特別是用微生物或酶轉化染料木素及其糖苷生成5，7，8，4’ -四羥基異黃酮的方法。屬于中藥新藥研究開發領域。
技術介紹
5，7，8，4’-四羥基異黃酮分子式=C15HltlO6分子量386 分子結構5，7，8，4’-四羥基異黃酮，固體呈微黃色，溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有機溶劑，難溶于水。5，7，8，4’ -四羥基異黃酮屬異黃酮類物質，是染料木素加上一個羥基后的衍生物。染料木素是一種雌激素樣化合物藥物，被稱為植物性雌激素類藥物，醫藥中主要用于治療婦女病和老年性骨質疏松癥(中國專利CN101497594A)。此外在抗月中瘤(Sanjeev Banerjee et al, 2005, Molecular evidence for increased antitumoractivity of gemcitabine by genistein invitro and invivo using an or the topic model of Pancreatic cancer[J]. Cancer Res. 2005, 65: 9064-9072)、抗炎、陣痛、降尿酸(黃敬群等.染料木素抗炎、鎮痛、降尿酸作用實驗研究[J].西北藥學雜志，2001，26(3): 193-195)、降血脂(金永生，劉超美.金雀異黃素的藥理作用[J]. 國外醫藥與植物藥分冊等，2002，17(5): 191-193)、體外抗肝纖維化(李建芳，陳必成等.染料木素對硫代乙酰胺誘導的肝纖維化大鼠PDGF-BB表達的影響[J].肝膽胰外科雜志，2009，21(3): 118-125)等方面都具有明顯的生物活性。染料木素作為藥物使用時，進入人體內的染料木素一部分被腸內細菌轉化，一部分自小腸黏膜吸收經代謝，5，7，8，4’-四羥基異黃酮就是代謝產物之一。(楊秀偉.中藥成分的吸收、分布、代謝、排泄、毒性與藥效(上).北京中國醫藥科技出版社，2006)。由染料木素衍生而來的5，7，8，4’ -四羥基異黃酮是酪氨酸酶的有效抑制劑， 具有很強的酪氨酸酶抑制活性(TE-SHENG CHANG. Two potent suicide substrates ofmushroom tyrosinase:5, 7, 4' -trihydroxyisoflavone and 5,7,8,4' -tetrahydroxyisoflavone[J], FoodChem, 2007, (55): 2010-2015),研究表明黃酮母核上的羥基的數量對黃酮類化合物的活性影響很大(Sabine Ε. Kulling, Doris Μ. Honig, Thomas J. Simat, Manfred. Metzler. Oxidative in viruo metabolism of the soy phytoestrogens daidzein and genistein[J]. J. Agric. Food Che, 2000, 48(10) : 4963-4972)。研究發現異黃酮的A環上5，7位及B環上的4’的羥基是抑制前列腺癌和乳腺癌的主要基團。由于酚羥基作為供氧體能與自由基反應使之形成相應的離子或分子，大豆異黃酮含有的酚羥基可減少氧自由基，降低其對生物大分子的損傷，可能減少了腫瘤的發生(毛峻琴， 宓鶴鳴.大豆異黃酮的研究進展[J].第二軍醫大學藥學院，2000，(31): 61-64)。因此比染料木素多一個羥基的5，7，8，4’ -四羥基異黃酮在水溶性方面更有研究價值。酪氨酸酶(tyrosinase)廣泛存在于自然界中，是黑色素生物合成的關鍵酶和限速酶。酪氨酸酶的活性與色素沉著性疾病、食品褐變等均有密切關系。酪氨酸酶抑制劑的研發對人類皮膚色素疾病的治療、食品保鮮及農業抗蟲領域具有重要意義。(李娜，魯曉翔.酪氨酸酶抑制劑的研究進展[J].食品工業科技，2009，(7): 406-409)。目前氫醌、熊果苷、曲酸、壬二酸等酪氨酸酶抑制劑已用于臨床(閆軍，陳聲利，李春陽.酪氨酸酶抑制劑及對黑素生物合成的影響[J].國外醫學皮膚性病醫學分冊，2003，29(4): 250-253), 5，7，8，4’ -四羥基異黃酮作為一種酪氨酸酶抑制劑有重要的研究價值。染料木素廣泛存在于植物的葉子和種子中，但含量很低，如葛根 0. 065%-0. 078%,大豆0. 04%-0. 24%;紅車軸草約0. 3% ；豆豉0. 34%,從大豆中得到染料木素是目前工業化的方法，成品收率約為原料的0.04%。(中國專利CN101497594A)，因含量低的原因，分離成本較高。而槐角中含染料木素含量為0.5-1%比大豆等高幾十倍。大豆中染料木苷含量在0. 025%?；睒湓谌珖芏嗟胤蕉寄苌L，槐角資源豐富，槐角含有大量糖苷化合物，其中染料木素的糖苷化合物-染料木苷的含量很高，有的產地可達9. 14%(房敏峰，曲歡歡，文頌華，李靜，孫文基.槐角不同炮制品種槐角苷的含量測定[J]. 中藥材，2007，30(1): M-25)。現有的研究大多從大豆發酵產品中提取分離得到了 5, 7,8,4'-四羥基異黃酮，TE-SHENG，CHANG利用黑曲霉從500g大豆胚芽固體曲中提取得至Ij 33. 5mg5，7，8，4，_ 0 基異黃Sf (Te-Sheng Chang. Mushroom tyrosinase inhibitory effct isofisoavone sisolated from soygerm koji fermented with Aspergillus oryzae BCRC32288 [J]. Food Chemistry, 2007，(105) : 1430-1438)，收率僅為 0. 0067 且純度未提，大豆中染料木素的含量在0. 04-0. 1%,染料木苷的含量在0. 0 左右(毛峻琴，宓鶴鳴.大豆異黃酮的研究進展[J].中草藥，2000，31(1): 60-64)，的因此槐角是生產染料木苷或染料木素或5，7，8，4’ -四羥基異黃酮的理想原料。本專利技術利用特異性強的棘孢曲霉將槐角中高含量的染料木苷等高效地轉化為 5，7，8，4’ -四羥基異黃酮，從槐角得到5，7，8，4’ -四羥基異黃酮產品。該方法條件溫和 (常溫)，操作簡便。
技術實現思路
本專利技術目的在于提供一株棘孢曲霉菌，以及利用該項菌轉化槐角得到 5，7，8，4’-四羥基異黃酮的方法。所述的一株棘孢曲霉菌，是棘孢曲霉ZjrAs/^r^/BM aculeatus ZJ入該菌株的保藏編號是 CCTCC NO :Μ 2011264ο本專利技術所說的制備5，7，8，4’-四羥基異黃酮的方法，其特征在于包含以下步驟 將棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculea tusZJ )接種到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，在一定條件下進行轉化；得到的物料經分離純化處理，得到 5，7，8，4’ -四羥基異黃酮; 或者是將棘孢曲霉Z J (Aspergillus aculea tusZJ )的菌曲加入到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，進行本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．一種棘孢曲霉ＺＪ?。ǎ粒螅穑澹颍纾椋欤欤酰蟆。幔悖酰欤澹幔簦酰蟆。冢剩┚?，其特征在于該菌株的保藏編號是ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ?。玻埃保保玻叮?。
【技術特征摘要】
1.一種棘孢曲霉ZJ {Aspergillus aculeatus ZJ)菌株，其特征在于該菌株的保藏編號是 CCTCC NO :Μ 2011264ο2.一種制備5，7，8，4’ -四羥基異黃酮的方法，其特征在于包含以下步驟將棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculea tuslS)接種到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，在一定條件下進行轉化；得到的物料經分離純化處理，得到 5，7，8，4’ -四羥基異黃酮;或者是將棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculeatus ZJ) 的菌曲加入到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，進行生物轉化，得到的物料經分離純化處理，得到 5，7，8，4’-四羥基異黃酮;或者是將棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculeatuslS)中得到的酶液或酶粉加入到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，進行生物轉化，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳育如，張玉千，玄燕，唐超，
申請(專利權)人：南京師范大學，
類型：發明
國別省市：84
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